实验室常用技术参数资料样本Word文件下载.docx
- 文档编号:17525253
- 上传时间:2022-12-07
- 格式:DOCX
- 页数:16
- 大小:28.09KB
实验室常用技术参数资料样本Word文件下载.docx
《实验室常用技术参数资料样本Word文件下载.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《实验室常用技术参数资料样本Word文件下载.docx(16页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
1μgpBR322DNA=0.36pmol
1pmol1000bpDNA=0.66μg
1pmolpBR322=2.8μg
1kb双链DNA(钠盐)=6.6×
105道尔顿
1kb单链DNA(钠盐)=3.3×
1kb单链RNA(钠盐)=3.4×
(4)蛋白摩尔换算:
100pmol分子量100,000蛋白质=10μg
100pmol分子量50,000蛋白质=5μg
100pmol分子量10,000蛋白质=1μg
氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿
(5)蛋白质/DNA换算:
1kbDNA=333个氨基酸编码容量=3.7×
104MW蛋白质
10,000MW蛋白质=270bpDNA
30,000MW蛋白质=810bpDNA
50,000MW蛋白质=1.35kb
100,000MW蛋白质=2.7kbDNA
4.常见蛋白质分子量标准参照物
(1)高分子量标准参照
(2)中分子量标准参照(3)低分子量标准参照
肌球蛋白分子量磷酸化酶B97,400碳酸酐酶31,00
肌球蛋白212,000牛血清白蛋白66,200大豆脻蛋白酶21,500
β-半乳糖甘酶B116,000谷氨酶脱氢酶55,000抑制剂
磷酸化酶B97,400卵白蛋白42,700马心肌球蛋白16,900
牛血清白蛋白66,200醛缩酶40,000溶菌酶14,400
过氧化氢酶`57,000碳酸酐酶31,000肌球蛋白(F1)8,100
醛缩酶40,000大豆脻蛋白酶21,500肌球蛋白(F2)6,200
抑制剂 肌球蛋白(F3)2,500
溶菌酶14,400
5.常见DNA分子量标准参照物
λDNA/HindⅢλDNA/EcoRⅠλ/HindⅢ+EcoRⅠpBR322/HaeⅢ
231302122621227587123
941674215148405104
65575804497350489
43615643426845880
23224843353043464
20273530202726757
564 190423451
125 158421321
137519218
97418411
8311247
564
125
续上表
pBR322/HinfⅠφχ174/HinfⅠφχ174/HaeⅢφχ174/TapⅠ
163172614013532914
51771311810781175
506553100872404
39650082603327
34441766310231
29841348281141
2213114227187
2202494023454
1542002419433
75151 11820
72
二、常见缓冲液
1.分子克隆常见缓冲液
2.磷酸缓冲液
(1)25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※
pH1mol/LK2HPO4(ml)1mol/LKH2PO4(ml)
5.88.591.5
6.013.286.8
6.219.280.8
6.427.872.2
6.638.161.9
6.849.750.3
7.061.538.5
7.271.728.3
7.480.219.8
7.686.613.4
7.890.89.2
8.094.06.2
(2)25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※
pH1mol/LNa2HPO4(ml)1mol/LNaH2PO4(ml)
5.87.992.1
6.012.088.0
6.217.882.2
6.425.574.5
6.635.264.8
6.846.353.7
7.057.742.3
7.268.431.6
7.477.422.6
7.684.515.5
7.889.610.4
8.093.26.8
※:
用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml,根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值:
pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])
在此,pK’=6.86(25℃)。
3.电泳缓冲液
测序凝胶加样缓冲液
98%去离子甲酰胺
10mol/LEDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚蓝
甲酰胺:
许多批号的试剂级甲酰胺,其纯度符合使用要求,无须再进行处理。
不过,一旦略呈黄色,则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与DowexXG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理,并用Whatman1号滤纸过滤2次,去离子甲酰胺分装成小份,充氮存于-70℃。
常见的电泳缓冲液
缓冲液使用液浓贮存液(每升)
Tris-乙酸(TAE)1×
:
0.04mol/LTris-乙酸50×
242gTris碱
0.001mol/LEDTA57.1ml冰乙酸
100ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)
Tris-磷酸(TPE)1×
0.09mol/LTris-磷酸10×
10gTris碱
0.002mol/LEDTA15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)
40ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)
Tris-硼酸(TBE)a0.5×
0.045mol/LTris-硼酸5×
54gTris碱
0.001mol/LEDTA27.5硼酸
20ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)
碱性缓冲液b1×
50mmol/LNaOH1×
5ml10mol/LNaOH
1mmol/LEDTA2ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸c1×
25mmol/LTris5×
15.1gTris
250mmol/L甘氨酸94g苷氨酸(电泳级)(pH8.3)
0.1%SDS50ml10%SDS(电泳级)
说明:
①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物,为避免这一问题,可在室温下用玻璃瓶保存5×
溶液,出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×
TBE作为使用液(即1:
5稀释浓贮液)进行琼脂糖凝胶电泳。
但0.5×
的使用液已具备足够的缓冲容量。
当前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1:
10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小,故经过缓冲液的电流量一般较大,需要使用1×
TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2×
SDS凝胶加样缓冲液:
100mmol/LTris•HCl(6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇(DTT)
4%SDS(电泳级)
0.2%溴酚蓝
20%甘油
不含DTT的2×
SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温,应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
4.凝胶加样缓冲液
缓冲液类型6×
缓冲液贮存温度
Ⅰ0.25%溴酚蓝4℃
0.25%二甲苯青FF
40%(W/V)蔗糖水溶液
Ⅱ0.25溴酚蓝室温
15%聚蔗糖(Ficoll400)
Ⅲ0.25%溴酚蓝4℃
30%甘油水溶液
Ⅳ0.25%溴酚蓝4℃
40%(W/V)蔗糖水溶液
碱性加样缓冲液:
300mmol/LNaOH
6mmol/LEDTA
Ⅴ18%聚蔗糖(Ficoll400)4℃
0.15%溴甲酚绿
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三:
增大样品密度;
以确保DNA均匀进入样品孔内;
使样品呈现颜色,从而使加样操作更为便利,含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍,而与琼脂糖浓度无关。
以0.5×
TBF作电泳液时,溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。
在琼脂糖浓度为0.5%~1.4%的范围内,这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。
可是,对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料,因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
5.各种pH值的Tris缓冲液的配制
各种pH值的Tris缓冲液的配制
所需pH值(25℃)0.1mol/LHCl的体积
7.145.7
7.244.7
7.343.4
7.442.0
7.540.3
7.638.5
7.736.6
7.834.5
7.932.0
8.029.2
8.126.2
8.222.9
8.319.9
8.417.2
8.514.7
8.612.4
8.710.3
8.88.5
8.97.0
某一特定pH值的0.05mol/LTris缓冲液的配制:
将50ml0.1mol/LTris碱溶液与上表所示相应体积(单位:
ml)的0.1ml/LHCl混合,加水将体积调至100ml
(2)温度对50mmol/LTris•HCl液pH值的影响
4℃25℃37℃
8.17.57.2
8.27.67.3
8.37.77.4
8.47.87.5
8.57.97.6
8.68.07.7
8.78.17.8
8.88.27.9
8.98.38.0
9.08.48.1
9.18.58.2
9.28.68.3
9.38.78.4
9.48.88.5
(6)常见缓冲液的pKa值
缓冲液分子量pKa值缓冲范围
Trisa12.18.087.1~7.9
HEPESb283.37.477.2~8.2
MPOSc209.37.156.6~7.8
PIPESd304.36.766.2~7.3
MESe195.26.095.4~6.8
a:
三羟甲基氨基甲烷;
b:
N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸;
c:
3-(N-吗啉代)丙磺酸;
d:
N,N’-双(2-乙磺酸)哌嗪;
e:
2-(N-吗啉代)乙磺酸。
7.温度对常见缓冲液pH的影响
缓冲体系pKa(20℃)△pKa/10℃
Mes6.15-0.110
Ada6.60-0.110
PiPes6.80-0.085
Aces6.90-0.200
Bes7.15-0.160
Mops7.20-0.013
Tes7.50-0.200
Hepes7.55-0.014
Tricine8.15-0.210
Tris8.30-0.310
Bicine8.35-0.180
Glycylglycine8.40-0.280
三、常见酶的配制
1.溶菌酶
用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液,分装成小份并保存于-20℃。
每一小份一经使用后便予丢弃。
2.蛋白水解酶类
贮存液贮存温度反应浓度反应缓冲液温度预处理
0.01mol/LTris(pH7.8)
链霉蛋白酶a20mg/ml-20℃(溶于水)1mg/ml0.01mol/LEDTA37℃自消化b
0.5%SDS
蛋白酶Kc20mg/ml-20℃(溶于水)50μg/ml0.005mol/LEDTA37~56℃无须预处理
链霉蛋白酶是从链球菌(Streptomycesgriseus)中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b:
自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染,经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下:
把该酶的粉末溶解于10mmol./lTris•HCl(pH7.5)、10mmol/lNaCl中,配成20mg/ml浓度,于37℃温育1h。
经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中,保存-20℃。
c:
蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从林伯氏白色念球菌(TritirachiumalbumLimber)中纯化得到。
该酶有两个Ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。
然而,如果从该酶中除去Ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性一般已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。
因此,蛋白酶K消化过程中一般加入EDTA(以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用)。
可是,如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/lCa2+而不含EDTA的缓冲液。
在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT(pH8.0)至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+。
3.无DNA酶的RNA酶
将胰RNA酶(RNA酶A)溶于10mmol/lTris•HCl(pH7.5)、15mmol/lNaCl中,配成10mg/ml的浓度,于100℃加热15min,缓慢冷却至室温,分装成小份保存于-20℃。
四、常见抗生素溶液
抗生素贮存液a工作浓度
浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒
氨苄青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml
羧苄青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml
氯霉素34mg/ml(溶于乙醇)-20℃25μg/ml170μg/ml
卡那霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml
链霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml
四环素b5mg/ml(溶于乙醇)-20℃10μg/ml50μg/ml
以水为溶剂的抗生素贮存液经过0.22μm滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。
所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
镁离子是四环素的拮抗剂,四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基(如LB培养基)。
五、常见贮存液的配制
1.30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】
将29g丙烯酰胺和1gN,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。
加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。
用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。
【注意】
丙烯酰胺具有很强的神经毒性并能够经过皮肤吸收,其作用具累积性。
称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺一般含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2.40%丙烯酰胺
把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20gN,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。
继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3.放线菌素D溶液
把20mg放线菌素D溶解于4ml100%乙醇中,1:
10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值。
放线菌素D(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。
放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。
只要经过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液
在0.8ml水中溶解60mgATP,用0.1mol/LNaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃
5.10mol/L乙酸酰溶液
把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。
6.10%过硫酸铵溶液
把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。
7.BCIP溶液
把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃
8.2×
BES缓冲盐溶液
用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6gNaCl和0.027gNa2HPO4,室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。
9.1mol/LCaCl2溶液
在200ml蒸馏水中溶解54gCaCl2•6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。
制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。
10.2.5mol/LCaCl2溶液
在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2•6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液
用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液
把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/lTris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃。
碱基波长(nm)消化系数(ε)[L/(mol•cm)]
A2591.54×
G2531.37×
C2719.10×
103
T2607.40×
比色杯光径为1cm时,吸光度=εM
13.0.5mol/lEDTA(pH8.0)溶液
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na•2H2O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节 溶液的pH值至8.0(约需20gNaOH颗粒)然后定容至1L,分装后高压灭菌备用。
EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。
14.溴化乙锭(10mg/ml溶液)
在100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。
小心:
溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。
15.2×
HEPES缓冲盐溶液
用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2PO4•2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/lNaOH调节 pH值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml。
用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20℃。
1
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 实验室 常用 技术参数 资料 样本