抗体的基本结构Word文档格式.docx

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仁

同种型

同种异型

独特型

7.

免疫球蛋白分子的超家族

免疫球蛋白超家族的组成

免疫球蛋白超家族的特点

&

各类免疫球蛋白的生物学活性

IgG

IgA

IgM

l£

D

1£

E

9.

免疫球蛋白基因的结构和抗体多样性

1・

lg重链基因的结构和重排

恒轻链基因的结构和重排

抗体多样性的遗传学基础

10.药理作用

11.药品说明书

1.适应症

2.用量用法

12.相关文献

具有抗体活性的血清蛋白称为免疫球蛋白，又称为抗体,是由机体的B淋巴细胞在抗原的刺激下分化、分裂而成的一组特殊球蛋白。

人和动物的免疫血淸中的免疫球蛋白极不均一，英组成、结构、大小、电荷、生物学活性等都有很大差异，约占机体全部血淸蛋白的20〜25%。

目前已在人、小鼠等血淸中先后分纯得到5类免疫球蛋白，1968年，世界卫生组织统一命名为免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白D（IgD）、免疫球蛋白E（IgE）o

Porter等对血淸IgG抗体的研究证明•lg单体分子的基本结构是由四条肽链组成的。

即由二条相同的分子量较小的肽链称为轻链和二条相同的分子量较大的肽链称为重链组成的。

轻链与重链是由二硫键连接形成一个四肽链分子称为lg分子的单体，是构成免疫球蛋白分子的基本结构。

lg单体中四条肽链两端游离的氨基或竣基的方向是一致的，分别命名为氨基端（N端）和按基端（C端）。

图2・3免疫球蛋白分子的基本结构示意图

由于竹髓瘤蛋白（M蛋白）是均一性球蛋白分子，并证明本周蛋白（BJ）是lg分子的L链，很容易从患者1血液和尿液中分离纯化这种蛋白，并可对来自不同患者的标本进行比较分析，从而为lg分子氨基酸序列分析提供了良好的材料。

1.轻链（lightchain,L）轻链大约由214个氨基酸残基组成，通常不含碳水化合物，分子量约为24kD。

每条轻链含有两个链内二硫键所组成的环肽。

L链共有两型：

kappa（K）与lambda。

）,同一个天然lg分子上L链的型总是相同的。

正常人血清中的K：

入约为2：

1。

2.垂链（heavychain,H链）重链大小约为轻链的2倍，含450〜550个氨基酸残基,分子量约为55或75kD。

每条H链含有4〜5个链内二硫键所组成的环肽。

不同的H链由于氨基酸的排列顺序、二硫键的数目和们置、含糖的种类和数量不同，英抗原性也不相同，根据H链抗原性的差异可将英分为5类：

p链、丫链、a链、6链和£

链，不同H链与L链（K或入链）组成完整lg的分子分別称之为IgM、IgG、IgA、IgD和IgE。

丫、a和（5链上含有4个环肽，p和e链含有5个环肽。

重链（heavychain,H链）由450〜570个氨基酸残基组成,分子量约为50〜70kD。

不同的H链因氨基酸的排列顺序、二硫键的数目和位置、含糖的种类和数疑不同，其抗原性也不相同，可将其分为U链、Y链、a链、§

链、£

链五类，这些H链与L链（k链或入链）组成的完整|g分子分别称为IgM（u）、IgG（丫）、IgA（a）、IgD

（6）和IgE（e

通过对不同柠髓蛋白或本周蛋白H链或L链的氨基酸序列比较分析，发现其绘基端（N-末端）氨基酸序列变化很大，称此区为可变区（V）,而竣基末端（C-末端）则相对稳泄，变化很小，称此区为恒泄区（C区）。

1.可变区（variableregion,V区）位于L链靠近N端的1/2（约含108—111个绘基酸残基）和H链靠近N端的1/5或4/4（约含"

8个氨基酸残基）。

每个V区中均有一个由链内二硫键连接形成的肽环，每个肽环约含67〜75个氨基酸残基。

V区氨基酸的组成和排列随抗体结合抗原的特异性不同有较大的变异。

由于V区中氨基酸的种类、排列顺序千变万化，故可形成许多种具有不同结合抗原特异性的抗体。

L链和H链的V区分别称为VL和VH。

在VL和VH中某些局部区域的氨基酸组成和排列顺序具有更奇的变休程度，这些区域称为髙变区（hypervariableregion,HVR）。

在V区中非HVR部位的氨基酸组而和排列相对比较保守，称为骨架区（frameworkregion）。

VL中的髙变区有三个，通常分别位于第24〜34、50〜65、95〜102位氨基酸。

VL和VH的这三个HVR分别称为HVR1、HVR2和HVR3。

经X线结晶衍射的研究分析证明，髙变区确实为抗体与抗原结合的位巻，因而称为决龙族互补区（complementarity-determiningregion,CDR）。

VL和VH的HVR1、HVR2和HVR3又可分别称为CDR1、CDR2和CDR3,般的CDR3具有更髙的髙变程度。

高变区也是lg分子独特型决泄簇（idiotypicdeterminants）主要存在的部位。

在大多数情况下H链在与抗原结合中起更重要的作用。

图2-4与抗原表位结合髙变区（HVR）示意图（G表示相对保守的甘氨酸）

2.恒泄区（constantregion,C区）位于L链靠近C端的1/2（约含105个氨基酸残基）和H链靠近C端的3/4区域或4/5区域（约从119位氨基酸至C末端）。

H链每个功能区约含门0多个氨基酸残基，含有一个由二铳键连接的50〜60个氨基酸残基组成的肽环。

这个区域氨基酸的组成和排列在同一种属动物lg同型L链和同一类H链中都比较恒左，如人抗白喉外毒素IgG与人抗破伤风外毒素的抗毒素IgG,它们的V区不相同，只能与相应的抗原发生特异性的结合，但其C区的结构是相同的，即具有相同的抗原性，应用马抗人IgG第二体（或称抗抗体）均能与这两种抗不同外毒素的抗体（IgG）发生结合反应。

这是制备第二抗体，应用荧光、酶、同位毒等标记抗体的重要基础。

lg分子的H链与L链可通过链内二硫键折叠成若干球形功能区，每一功能区（domain）约由行0个氨基酸组成。

在功能区中氨基酸序列有高度同源性。

1.L链功能区分为L链可变区（VL）和L链恒定区（CL）两功能区。

2.H链功能区IgG、IgA和IgD的H链各有一个可变区（VH）和三个恒泄区（CH1、CH2和CH3）共四个功能区。

IgM和IgE的H链各有一个可变区（VH）和四个恒左区（CH1.CH2、CH3和CH4）共五个功能区。

如要表示某一类免疫蛋白H链恒定区,可在C（表示恒龙区）后加上相应重链名称（希腊字母）和恒定区的位置（阿拉伯数字），例如IgG重链CH1.CH2和CH3可分别用Cy1、Cy2和Cy3来表示。

IgL链和H链中V区或C区每个功能区各形成一个免疫球蛋白折叠（immunoglobulinfold,lgfold）,每个Ig折叠含有两个大致平行、由二硫连接的B片层结构（betapleatedsheets）,每个B片层结构由3至5股反平行的多肽链组成。

可变区中的高变区在Ig折叠的一侧形成高变区环（hypervariableloops〉，是与抗原结合的位苣。

3.功能区的作用

（1）VL和VH是与抗原结合的部位，其中HVR（CDR）是V区中与抗原决怎簇（或表位）互补结合的部位。

VH和VL通过非共价柑互作用，组成一个FV区。

单位Ig分子具有2个抗原结合位点（antigen-bindingsite）,二聚体分泌型IgA具有4个抗原结合位点，五聚体IgM可有10个抗原结合位点。

（2）CL和CH上具有部分同种异型的遗传标记。

（3）CH2：

IgGCH具有补体Clq结合点，能活化补体的经典活化途径。

母体IgG借助CH2部分可通过胎盘主动传递到胎体内。

（4）CH3：

lgGCH3具有结合单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、B细胞和NK细胞Fc段受体的功能。

lgMCH3（或CH3因部分CH4）具有补体结合位点。

IgE的02和"

3功能区与结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞FCeRI有关。

4.铁链区（hingeregion）较链区不是一个独立的功能区，但它与其客观存在功能区有关。

铁链区位于CH1和CH2之间。

不同H狡链区含氨基酸数目不等，cd、a2、y1.丫2和丫4链的较链区较短，只有10多个氨基酸残基：

丫3和6链的铁链区较长，约含60多个氨基酸残基，其中丫3铁链区含有M个半胱氨酸残基。

较链区包括H链间二硫键，该区富含邇氨酸,不形成a-螺旋,易发生伸展及一左程度的转动，当VL、VH与抗原结合时此氏发生扭曲，使抗体分子上两个抗原结合点更好地与两个抗原决左簇发生互补。

由于CH2和CH3构型变化，显示出活化补体、结合輕细胞等生物学活性。

较链区对木瓜蛋白酚、i'

i蛋白爾敏感，当用这些蛋白酶水解免疫球蛋白分子时常此区发生裂解。

2M和IgE缺乏狡链区。

J链（joiningchain）存在于二聚体分泌型IgA和五聚体IgM中。

J链分子量约为15kD,由于124个氨基酸组成的酸性糖蛋白，含有8个半胱氨酸残基,通过二硫键连接到p链或a链的竣基端的半胱氨酸。

J链可能在Ig二聚体、五聚体或多聚体的组成以及在体内转运中的具有一定的作用。

2・分泌成分（secretorycomponent,SC）又称分泌片（secretorypiece），是分泌型IgA上的一个辅助成分，分子量约为75kD,糖蛋白，由上皮细胞合成,以共价形式结合到Ig分子，并一起被分泌到粘膜表而。

SC的存在对于抵抗外分泌液中蛋白水解閒的降解具有重要作用。

1.单体由一对L链和一对H链组成的基本结构，如IgG、IgD、IgE血淸型IgA。

2.双体由J链连接的两个单体，如分泌型IgA（secretoryIgA,SlgA）二聚体（或多聚体）IgA结合抗原的亲合力（avidity）要比单体IgA高。

图2-5分泌型IgA结构示意图

3.五聚体由J链和二硫键连接五个单体，如IgM。

p链Cys414（Cp3）和Cys575（C端的尾部）对于IgM的多聚化极为重要。

在J链存在下，通过两个邻近单体IgMp链Cys之间以及J链与邻M链Cys575之间形成二硫键组成五聚体。

由粘膜下鏗塑所合成和分泌的IgM五聚体，与粘膜上皮细胞表而plgR（poly-lgreceptor,plgR）结合，穿过粘膜上皮细胞到粘膜表而成为分泌型lgM（secretoryIgM）。

1.本瓜蛋白酶的水解片段Porter等最早用木瓜蛋白酶（papain）水解兔IgG,从而区划获知了lg四肽链的基本结构和功能。

（1）裂解部位：

IgG较链区H链链间二硫键近N端侧切断。

（2）裂解片段：

共裂解为三个片段：

①两个Fab段（抗原结合段,fragmentofantigenbinding）,每个Fab段由一条完整的L链和一条约为1/2的H链组成,Fab段分子虽:

为54kD。

一个完整的Fab段可与抗原结合，表现为单价，但不能形成凝集或沉淀反应。

Fab中约1/2H链部分称为Fd段，约含225个氨基酸残基，包括VH、CH1和部分钱链区。

②一个Fc段（可结晶段，fragmentcrystallizable）,由连接H链二硫键和近竣基端两条约1/2的H链所组成,分子量约50kD»

lg在异种间免疫所具有的抗原性主要存在于Fc段。

图2・6人分泌型IgA和分泌型IgM的局部产生示意图

图2-7IgM结构示意图

2.胃蛋白酶的水解片段Nisonoff等最早用胃蛋白酶（pepsin）裂解免疫球蛋白。

（1）裂解部位：

较链区H链链间二硫键近C端切断。

（2）裂解片段：

1）F（abr）2：

包括一对完整的L链和由链间二硫键相连一对略大于Fab中Fd的H链,称为Fd'

约含235个氨基酸残基，包括VH、VH1和铁链区。

F（ab1）2具有双价抗体活性,与抗原结合可发生凝集和沉淀反应。

双价的F（ab1）2与抗原结合的亲合力要大于单价的Fab。

由于应用F（abJ2时醴了结合相应抗原的生物学活性，又减少或避免了Fc段抗原性可能引起的副作用,因而在生処區中有较大的实际应用价值。

虽然F（ab1）2与抗原结

合特性方而同完整的lg分子一样，但由于缺乏lg中部分，因此不具备固左补体以及与鯉隍表面Fc受体结介的功能。

F（ab1）2经还原等处理后，H链间的二硫可发生断裂而形成两个相同的Fab片段。

2）Fc'

可继续被胃蛋白酶水解成更小的片段，失去其生物学活性©

图2-8lg酶水解片段示意图

IQ是体液免疫应答中发挥免疫功能最主要的免疫分子,免疫球蛋白所具有的功能是由其分子中不同功能区的特点所决定的。

lg最显着的生物学特点是能够特异性地与相应的抗原结合，如细菌、病毒、寄生虫、某些勉或侵入机体的英他异物。

lg的这种特异性结合抗原特性是由其V区（尤其是V区中的高变区）的空间构成所决泄的。

lg的抗原结合点由L链和H链超变区组成，与相应抗原上的表位互补，借助静电力、蠱以及范徳华力等次级键相结合，这种结合是可逆的，并受到pH、温度和电解浓度的影响。

在某些情况下，由于不同抗原分子上有相同的抗原决定簇，或有担但的抗原决立簇，一种抗体可与两种以上的抗原发生反应，此称为交叉反应（crossreaction）。

抗体分子可有单体、双体和五聚体.因此结合抗原决左簇的数目（结合价）也不相冋。

Fab段为单价，不能产生凝集反应和沉淀反应。

F（ab‘）2和单体lg（如IgG、IgD、IgE）为双价。

双体分泌型IgA有4价。

五聚体IgM理论上应为10价，但实际上由于立体构型的空间位阻.一般只有5个结合点可结合抗原。

B细胞表而Ig（Smlg）是特异性识别抗原的受体，成熟B细胞主要表达SmlgM和SmlgD,同一B细胞克隆表达不同类Smlg其识别抗原的特异性是相同的。

1.IgM、lgG1、lgG2和lgG3可通过箜典途径活化补体。

当抗体与相应抗原结合后，IgG的CH2和IgM的CH3眾露出结合Clq的补体结合点，开始活化补体。

由于Clq6个亚单位中一般需要2个C端的球与补体结合点结合后才能依次活化Clr和Cis,因此IgG活化补体需要一泄的浓度，以保证两个相邻的IgG单体同时与1个Clq分子的两个亚单位结合。

当Clq一个C端球部结合IgG时亲和力则很低，Kd为10-4M,当Clq两个或两个以上球部结合两个或多个IgG分时，亲合力增髙Kd为10-8M.IgG与Clq结合点位于CH2功能区中最后一个B折叠股318〜322位氨基酸残基（Glu-x-Lys-x-Lys）oIgM倍以上。

人类天然的抗A和抗B血型抗体为IgM,血型不符合引韦的输血反应发生快而且严重。

2.凝聚的IgA、lgG4和IgE等可通过替代途径活化补体。

结合FC受体

不同细胞表面具有不同lg的Fc受体，分別用FcyR、FceR、FcaR等来表示。

当lg与相应抗原结合后，由于构型的改变，苴Fc段可与具有相应受体的细胞结合。

IgE抗体由于其Fc段结构特点，可在游离情况下与有相应受体的细胞（如嗜碱性粒细胞、肥大细胞）结合，称为亲细胞抗体（cytophilicantibody）0抗体与Fc受体结合可发挥不同的生物学作用。

1.介导I型变态反应变应原刺激机体产生的IgE可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgE高亲力受体细胞脱颗粒，释放组胺,合成由细胞FczRI结合。

当相同的变应原再次进入机体时，可与已固左在细胞膜上的IgE结合，刺激细胞脱颗粒，释放组受，合成由细胞脂质来源的介质如白三烯、前列腺素、血小板活化因子等,引起」型变态反应。

2.调理吞噬作用调理作用（opsonization）是指抗体、补体C3b、C4b等调理素（opsonin）促进吞噬细菌等颗粒性抗原。

由于补体对热不稳立，因此又称为热不稳左调理素（heat-labileopsonin）o抗体又称热稳左调理素（heat-stableopsonin）。

补体与抗体同时发挥调理吞噬作用，称为联合调理作用。

中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞具有高亲和力或低亲和力的FcyRI（CD64）和FcyRH（CD32）,IgG尤其是人lgG1和lgG3亚类对于调理吞噬起主要作用。

嗜酸性粒细胞具有亲利力FcyRH，IgE与相应抗原结合后可促进嗜酸性粒细胞的吞噬作用。

抗体的调理机制一般认为是：

①抗体在抗原颗粒和吞噬细胞之间“搭桥”,从而加强了吞噬细胞的吞噬作用：

②抗体与相应颗粒性抗原结合后，改变抗原表而电荷，降低吞噬细胞与

抗原之间的静电斥力：

③抗体可中和某些细菌表面的抗吞噬物质如肺炎双球菌的荚膜,使吞噬细胞易于吞噬：

④吞噬细胞FcR结合抗原抗体复合物，吞噬细胞可被活化。

图2-9抗体的调理吞噬作用

4.发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用当IqG抗体与带有相应抗原的靶细胞结合后，可与有FcyR的中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、NK细胞等效应细胞结合，发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（antibodydependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC）。

目前已知。

NK细胞发挥ADCC效应主要是通过英膜表而低亲和力FcYRIH（CD16）所介导的,IgG不仅起到连接靶细胞和效应细胞的作用，同时还刺激NK细胞合成和分泌肿瘤坏死因子和Y「扰素等细胞因子,并释放颗粒，溶解靶细胞。

嗜酸性粒细胞发挥ADCC作用是通过其FceRII和FcaR介导的，嗜酸性粒细胞可脱颗粒释放碱性蛋白等，在杀伤寄生虫如蠕虫中发挥重要作用。

图2・10抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）

此外，人IgGFc段能非特异地与匍萄菌A蛋白（staphylococcusproteinA,SPA）结合,应用SPA可纯化IgG等抗体，或代替第二抗体用于标记技术。

在人类.IgG是唯一可通过胎盘从母体转移给胎儿的也IgG能选择性地与胎盘母体一侧的滋养层细胞结合,转移到滋养层细胞的吞饮泡内，并主动外排到胎儿血循环中。

IgG的这种功能与IgGFc片段结构有关，如切除Fc段后所剩余的Fab并不能通过胎盘。

IgG通过胎盘的作用是一种重要的自然被动免疫,对于新生儿抗鯉有重要作用。

lg本身具有抗原性，将也作为免疫原免疫异种动物、同种异体或在自身体内可引起不同程度的免疫性。

根据Igl不同抗原决泄簇存在的不同部位以及在异种、同种异体或自体中产生免疫反应的差别，可把lg的抗原性分为同种型、同种异型和独特型第三种不同抗原决定簇。

同种型（isotype）是指同一种属内所有个体共有的lg抗原特异性的标记，要异种体内可诱导产生相应的抗体，换句话说，同种型抗原特异性因种属（species）而异。

同种型的抗原性位于CH和CLH,同种型主要包括lg的类、亚类，型和亚型。

1.免疫球蛋的类和亚类（classesandsubclasses）

⑴类：

决立lg不同类的抗原性差异存在于H链的恒上区（CH）o根据CH抗原性的差异（即氨基酸组成、排列、构型、二硫键等不同）H链可分为小丫、a、0和£

五类，不同H链与L链组成完整lg的分子別为IgM、IgA、IgD和IgE。

在基因水平上,不同类的H链恒左区的是由不同的恒泄区基因片段所鲤。

不同类lg在理化性质及生物学功能上可有较大差异。

（2）亚类:

同一类lg中由于铁链区氨基酸组成和二硫键数目的差异，可分为不同的亚类，亚类间抗原性的差异要小于不同类之间的差异。

目前已发现人的a重链有cd和a2两个亚类，分别与L链组成lgA1和lgA2.丫重链有4个亚类，但命名为lgG1、lgG2a、lgG2b和lgG3°

IgM、IgD和IgG,目前尚未发现存在不同的亚类。

lg不同亚类也是由不同的恒左区基因片段编码。

2.免疫球蛋白的型和亚型（typesandsubtypes）

（1）型：

决左lg型的抗原性差异存在于L链的恒泄区（CL），根据CL抗原性的差异（氨基酸的组成、排列和构型的不同）分为K和入轻链之比约为2：

1：

而在小鼠，97%轻链

为K型，入型只占3%左右。

（2）亚型：

根据入轻链恒泄区（C2）个别氨基酸的差异又可分入1、入2、入3和入4四个.亚型。

A1和入2在入轻链190位氨基酸的分别为亮氨酸和精氨酸,入3和入4在第154氨基酸分别为某氨酸和丝氮醴。

同种异型（allotype）是指同一种属不同个体间的lg分子抗原性的不同，在同种异体间免疫可诱导免疫反应。

同种异型抗原性的差别往往只有一个或几个氨基酸残基的不同，可能是由于编码lg的结构基因发生点邃所致，并被稳泄地遗传下来，因此lg同种异型可作为一种遗传标记（geneticmarkers）♦这种标记主要分布在CH和CL上。

1.Y链上的同种异型Y仁丫2丫3和入4重链上均存在有同种异型标记，目前已发现:

Glma、x.仁z：

G2mn;

G3mgLg5、bO、口、b3、b4、b5、c3>

c5、s、t、u^v：

G4m4a、4b.共20种左右。

其中G表示入链，仁2、3或4表示亚类入仁入2、入3和入4,m代表标

记（marker）o

除Glmf和z位于lgG1分子的CY1区外，其余的Gm均位于Fc部位。

一条y链可能同时具有一个以上的Gm标志，如白种人常常在y〔H链区有G1mz,Fc部位有G1ma。

由于人第14号染色体编码四种IgG亚类的C区基因CY1.Cy2、Cy3和Cy4是密切连锁的，因此IgGH链各亚类Gm标记可作为间倍体（haplotype）遗传给子代。

2・Q链上的同种异型CI2H链已发现有A2itH和A2m2两种。

A2m1在41仁428、458和467位氨酸上分别为苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、缴氨酸;

A2m2则分别为苏氨酸、笼氨酸、异亮氨酸和丙氨酸。

cdH链上尚未发现有同种异型存在。

3.£

链上的同种异型目前只发现Em1一种同种异型。

4.k链上的同种异型旧称为Inv,现分为Km1、2和3。

Kn"

在153位和191位氨基酸上分別为缄氨酸和亮氨酸，Km2分别为丙氨酸和亮氨酸，Km3分别为丙氨和缄氨酸。

入轻链上尚未发现有同种异型。

独特型（idiotype）为每一种特异性IgV区上的抗原特异性。

不同抗体形成细胞克隆所产生的IgV区具有与英客观存在抗体V区不同的抗原性，这是由可变区中成其是超变区的氨基酸组成、排列和构型所决泄的。

所以，在单一个体内所存在的独特型数疑相当大，可达107以上。

独特型的抗原决定簇称为独特位（idiotope）,可在异种、同种异体以及自身体内诱产生相应在的抗体，称为抗独特型抗体（antiidiotypicantibody,ald）,独特型和抗独型抗体可形成复杂的免疫调节中占有得要地位。

表人免疫球蛋白分子上抗原决立簇的分董

分类

抗原性存在部位

举例

同类CH

lgM>

I