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引言
维生素C是可溶于水的无色结晶,是一种分子结构最简单的维生素。
维生素C有防治坏血病的功能,所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。
维生素C在水溶液中易被氧化,在碱性条件下易分解,在弱酸条件中较稳定,维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸(有生理作用)。
维生素C能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态,起解毒作用等。
其广泛存在于植物组织中,新鲜的水果、蔬菜,特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。
准确测定维生素C的含量,对饮食健康、医疗保健都具有十分重要的意义。
本文总结近年来的文献报道维生素C测定方法主要有滴定法、荧光法、光度分析法、高效液相色谱法。
滴定法测定维生素C
测定原理
2,6一二氯靛酚法和碘量法是较常见的滴定测定维生素C的方法。
还原型抗坏血酸还原染料2,6一二氯靛酚,该染料在酸性中呈红色,被还原后红色消失。
还原型抗坏血酸还原2,6一二氯靛酚后,本身被氧化成脱氢抗坏血酸。
在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液还原标准2,6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。
碘量法的原理:
维生素C包括氧化型、还原型和二酮古乐糖酸三种,当用碘滴定维生素C时,所滴定的碘被维生素C还原为碘离子,随着滴定过程中维生素C全被氧化,所滴入的碘将以碘分子形式出现。
碘分子可以使含指示剂(淀粉)的溶液产生蓝色,即为滴定终点。
测定操作
2,6一二氯靛酚法:
取适量的样品可食部,加入100mL2%草酸溶液,制成匀浆。
取同一样品匀浆10g,加入1%草酸溶液20mL,摇匀,用滤纸过滤,取5mL过滤液于锥形瓶中,用2,6一二氯靛酚钠盐溶液滴定(1mL≈mgVitC),以淡红色存在30s内不褪色为滴定终点。
记录2,6-二氯酚靛酚钠盐溶液的消耗量,根据结果计算出样品中维生素C含量(mg/100g)。
荧光法测定维生素C
测定原理:
Deutsch和Weeks曾经报道过一种检测维生素C的荧光分析法(OPDA),并被指定为维生素C的经典荧光分析法。
在该方法中,维生素C先被活性炭(Norit)氧化为脱氢抗坏血酸(DHAA),DHAA再与荧光底物邻苯二胺(OPDA)结合生成荧光产物,通过对该荧光产物的检测实现对维生素C的定量分析。
孙振艳等[1]提出了一种新的测定维生素C的荧光分析方法。
基于维生素C被Cu2+氧化为DHAA,DHAA进一步与苯甲酸及十六烷基三甲基溴化铵产生荧光协同增敏作用,通过对体系荧光强度的测定进行维生素C的定量分析。
测定操作:
荧光分析法(OPDA)的测定方法:
称取一定量样品,研磨后用水浸泡,取清液加入适量1%草酸溶液,振摇约3min,加入0.2g已处理好的活性炭再充分振摇约3min后过滤,滤液加于两个25mL比色管再加入缓冲溶液,,其中一管加入硼酸溶液(即空白)摇匀,放置15min后,两管均加入邻苯二胺溶液10mL,避光放置30min待测。
样品荧光强度减去空白荧光强度值即为样品相对荧光强度值。
孙振艳等的荧光分析法:
在25mL比色管中依次加入0.6mLCuSO4溶液,2.0mL十六烷基三甲基溴化铵溶液,2.0mL苯甲酸溶液,一定体积的维生素C标准溶液,,5.0mLNaOH-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液,用蒸馏水定容,摇匀。
在35℃恒温水浴中加热30min,将溶液流水冷却至室温,激发波长为308nm,在发射波长408nm处,测量荧光强度F,以不含维生素C的试剂空白为F0,计算ΔF=F-F。
光度分析法测定维生素C
2,4-二硝基苯肼法和钼蓝比色法是常见测定维生素C的一种光度分析法。
2,4-二硝基苯肼法的原理是总维生素C包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸,样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸,再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎,脎的含量与总抗坏血酸含量成正比,进行比色测定。
钼蓝比色法是测定果蔬中还原型维生素C含量的一种常用方法,因偏磷酸和钼酸铵反应生成的磷钼酸铵经还原型的维生素C还原后生成亮蓝色的络合物,通过分光比色可以测定样品中还原型维生素C的含量。
2,4-二硝基苯肼法:
取匀浆20g(含1~2mg抗坏血酸)置入100mL容量瓶中,用1%草酸溶液定容,混匀后过滤。
取25mL过滤液放入有2g活性炭的25mL比色管中,振摇1min,过滤。
然后取10mL此氧化提取液,加入10mL2%硫脲溶液,混匀。
按照GB12392-90中呈色反应方法,用分光光度计进行比色,根据结果计算出样品中抗坏血酸含量。
按下式计算样品中Vc的含量:
X=c·
Vm×
F×
1001000。
X—样品中总抗坏血酸含量,mg/100g;
c—由标准曲线查得或回归方程算得“样品氧化液”总抗坏血酸的浓度,μg/mL;
V—试样用1%草酸溶液定容的体积,mL;
F—样品氧化处理过程中稀释倍数;
m—试样质量,g。
钼蓝比色法:
准确称取100g样品,加入草酸-EDTA溶液,经捣碎后移入100mL容量瓶,定容,过滤,吸取2mL上清液于50mL容量瓶中,加入1mL的偏磷酸-醋酸溶液,5%的硫酸2.0mL,摇匀,加入4mL钼酸铵,以去离子水定容至50mL,20min后测定吸光度。
参考文献:
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