微生物检验标本采集运送程序检验科Word下载.docx

微生物检验标本采集运送程序检验科Word下载.docx

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时间

温度

转运

报告时间

（工作日）

采样限制

注意事项

原则

装置和

最小量

血液

骨髓

1、培养瓶消毒：

用75%乙醇消毒橡胶塞30s

2、静脉穿刺消毒：

严格按皮肤消毒步骤操作（酒精-碘酊-酒精）

3、血液培养需特别注意消毒，因许多微生物、尤其葡萄球菌属通常存在皮肤表面或近表层处，易造成污染

4、采血时机：

在寒战出现时或发热初期采集血培养最佳

血培养瓶有两种规格，采血量不一样。

成人瓶：

5～8ml/瓶

小儿瓶：

1～3ml/瓶

≤2h

常温

禁止冷藏

阴性：

5d

阳性：

随时报告危急值，最终报告及时发出

建议从不同部位各采1瓶，共2瓶同时送检。

病人信息标识不可覆盖血培养瓶的条形码；

标本采集后立即送检，如不能立即送检，应置于室温，禁止放置冰箱

脑

脊

液

同血液、骨髓

≤1h

3～5d

无

微生物标本采集指南

（二）

转动

说明

脓肿

伤口

1、采集前用无盐水或75%酒精清创，以去除表面细菌。

2、用无菌针穿刺法抽吸深部脓液，或用无菌拭子从伤口深处采集渗出物。

无菌容器

≥1ml

≤1h

3d

1/d#

组织或抽吸物标本优于拭子标本

组织

1、用无菌容器呈送

2、小样本应滴加几滴无菌盐水保持湿润

3、不能使组织干涸

无菌容器，需要加一些盐水

呈送组织的量尽可能多，不要呈送表面简单摩擦的拭子

静脉

导管

1、用75%酒精消毒导管周围的皮肤

2、将导管未端约5㎝移入无菌管

无菌试管

穿刺液、心包液、胸腹水、关节液、等

1、注意彻底消毒，因许多微生物，尤其葡萄球菌属通常存在皮肤表面或近表层处，易造成污染

2、尽量留取多量标本

引流液

1、用75%酒精消毒导管采集部分

2、用注射器从引流管无菌采集2～3ml

2d

及时发送报告

标本不能直接从引流袋放出，因引流液在袋中潴留时间太长容易孳生细菌

1/d#表示一天中仅需送检1次，无需多次重复送检相同标本。

微生物标本采集指南（三）

眼结膜

1、用无菌盐水预湿的拭子绕每一个结膜取标本

2、采集完即接种培养基

常温（需要时保温），

立即送检

1、采集时，需避免感染蔓延至眼部临近区域

2、需标明左眼、右眼的标本

肺泡灌洗液、气管抽吸物、痰、等

1、用温开水清洗或漱口去除口腔表面菌

2、指导病人从肺深部咳出痰液，采集到无菌容器内

对不能咳痰的病人，应经抽吸获得标本，最好的标本应≤10个鳞状细胞/LPF

鼻

用被无菌盐水湿润的拭子插入鼻孔约2㎝，对鼻黏膜用力旋转

咽

1、用无菌盐水湿润的拭子经鼻轻轻插入鼻咽后部

2、慢慢旋转拭子5s，吸收分泌物

喉

1、用压舌板压舌

2、用无菌盐水湿润的试子从咽后、扁桃体和发炎区采样

喉拭子培养不能用于会厌发炎的病人

微生物标本采集指南（四）

粪便

1、取有脓血、黏液部分的粪便1～3g

2、液体粪便取1～3ml

无菌

容器

≤2h

及时发出

1、住院超过3d或入院诊断不是胃肠炎的病人，不做常规粪便培养

直肠拭子

1、小心插入拭子超越肛门括约肌，轻轻旋转拭子，在肛门隐窝取样

2、用于检测病原的拭子应能见到粪便

试管

褥疮溃疡

1、一般不选择拭子标本

2、无菌盐水清洗表面

3、如得不到活检标本或抽吸物，则用拭子用力采集损伤底部

1、由于褥疮溃疡拭子提供不了什么临床信息，一般选择组织活检或针头抽吸标本

中

段

尿

1、在未使用抗生素之前采集标本，注意避免消毒剂污染标本

2、最好留取早晨清洁中段尿，采集前先用中性肥皂和水清洁外阴及尿道口周围

留取时将前段尿排去，截留中段尿5～10ml病人睡前少饮水

无菌容器≥3ml

导尿

2、用注射器从导尿管无菌采集5～10ml

不能直接从导尿袋放出，因尿液在袋中潴留时间太长，容易孳生细菌

涂

片抗

酸

染

色

痰

量多为宜

无

1h出报告

至少连续送3d，每日1次

尿（24h尿沉淀或12h全夜尿沉淀）

10ml

无菌管

留取24h尿或12h全夜尿于洁净容器中，必须静止2h后，弃上清液，收集沉渣约10ml于无菌容器送检

脑脊液

1～2ml

体液（胸腹水、关节液等）

5～10ml

胃冲洗液或灌洗液

脓液、伤口、抽取液

1～5ml

支气管刷片

载玻片

5．相关文件及记录表格（略）

细菌室标本接收处理操作规程

规范细菌室标本接收处理操作规程，保证实验室不误检、漏检。

适用于细菌室所有标本。

细菌室标本接收、处理岗位人员应遵守本程序。

4.1微生物标本送至细菌室后，接收人员与标本运送人员共同核对标本及标本信息，并记录，包括接收标本数、接收人与接收日期。

4.2细菌培养标本需抄写培养记录单，包括患者姓名、性别、年龄、科室、床号、ID号、标本种类、检验申请条码号、接收日期，并在医院信息系统上记费，记费时只收细菌培养、鉴定费用，药敏费用先不记，如果标本中分离到致病菌后做药敏试验时再收药敏费用。

4.3涂片染色镜检标本先编号后在记录本上登记，内容包括姓名、性别、年龄、科室、床号、ID号、检验申请条码号、标本种类、接收日期。

5．相关文件及记录表格

5.1中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL31:

2007医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明.2007

5.2中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL02:

2008医学实验室质量和能力认可准则（ISO15189:

2007）.2008

备注：

值班人员按4.1进行。

细菌检验标本处理完后不能丢弃，交班时需将贴有检验条形码的原始标本与其它涂片及培养物一起交细菌室！

！

细菌室标本拒收程序

规范标本拒收程序。

细菌室所有工作人员应遵守本程序。

4.1细菌室检验人员应根据各类标本的送检要求评估标本的合格性，具体参见《标本采集运送程序》。

4.2必须严格执行标本的接收、拒收制度和标准，拒收所有可能导致错误结果的标本。

4.3下表中列举了常见微生物标本拒收原因及处理方式。

拒绝原因

处理方式

无标识

送检延迟（超过规定时间）

容器不合适或标本泄漏

标本运送条件不合适（例如厌氧条件送检的标本却用需氧条件送检）

同一天内同一检测条件的重复标本（血除外）

标本污染

标本量不够

1、非损伤方法获得的标本（例如：

痰、粪便等标本），重新送检。

2、损伤方法获得的标本（例如血、脑脊液或组织等），与取样医师协商后，再处理标本。

并在检验记录单上注明问题所在，记录所采取的措施。

提示送检者拒收原因，并要求重新送检，在拒收标本记录本上登记“标本送检延迟”。

通知送检者，并要求重新送检，在拒收标本记录本上登记。

与送检者联系，阐明检测要求，指出不符合之处，并要求重新送检，在拒收标本记录本上登记。

通知送检者，指出重复标本，在拒收标本记录本上登记。

重新采样

4.4下表中列举了一些不适合微生物学检查的标本及替代处理方法或建议。

标本类型

替代方法或建议

烧伤，伤口（拭子）

结肠造口术排出物

褥疮（拭子）

Foley导管头

坏疽损伤（拭子）

牙周损害（拭子）

直肠周围脓肿（拭子）

送检深部组织标本或抽吸物

不处理

送检组织标本或抽吸物

4.5在《不合格标本处理记录表》上登记相关信息，至少包括：

病人信息、标本种类、标本采集人姓名、标本采集时间、不合格原因及性状描述、识别者签名及时间。

细菌检验标本处理操作规程

规范细菌检验标本处理操作规程。

2．适用范围

细菌检验标本。

细菌检验人员严格执行本程序。

4.1血液标本

接收标本后，立即抄写检验记录单，住院病人需先收取细菌培养鉴定费用。

门诊病人在检验记录单上记录住址、联系电话等信息。

将血细菌培养瓶置于全自动培养仪中培养。

4.2痰标本

4.2.1接收时检查送检标本质量，随后抄写检验记录单，住院病人需先收取细菌培养鉴定费用。

4.2.2用接种环挑取脓性痰液后在第一区反复涂抹，尽量将包裹在痰中的病原菌接种在平板上，如无法用接种环挑取痰液时，用无菌棉签挑取标本分别涂布于血琼脂平板、巧克力琼脂平板，麦康凯平板的第一区，然后用接种环划第二、第三区。

4.2.3同时做痰涂片镜检，将结果记录在检验记录单上。

4.3咽拭子标本：

接收时检查送检标本质量，随后抄写检验记录单，住院病人需先收取细菌培养鉴定费用。

将标本涂布于血琼脂平板、巧克力琼脂平板，麦康凯平板的第一区，然后用接种环划第二、第三区。

4.4脑脊液、关节液、心包穿刺液、胸腹水等穿刺液：

床边抽取体液标本（成人瓶：

5～8ml；

1～3ml）注入细菌培养瓶后送实验室。

4.5粪便或肛拭标本：

立即取粪便脓血部位标本根据检验申请要求选择平板接种。

一般细菌培养时接种血琼脂平板、麦康凯平板和SS平板。

4.6尿标本：

将尿标本混匀，用10μl（可用定量加液器）定量接种环立即接种血琼脂平板、麦康凯平板、TM巧克力平板，分离细菌和菌落计数。

5.1周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海.上海科学技术出版社,2007

5.2叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京:

东南大学出版社,2006

值班人员对细菌检验标本处理参照上述执行！

细菌检验标本接种操作规程

1．目的

规范细菌检验标本接种操作规程，确保检验结果准确可靠。

细菌室所有标本的接种。

4.1分区划线法

4.1.1此法多用于粪便等含菌量较多的标本。

4.1.2用接种环先将标本涂布在平板第一区并作数次划线，再在二、三区依次用接种环划线。

每划一个区域，应将接种环烧灼1次，待冷却后再划下一区域。

每一区域的划线应接触上一区域的接种线2～3次，使菌量逐渐减少，以形成单个菌落。

4.2定量接种划线法

4.2.1本法用于尿液等标本的细菌计数。

4.2.2将尿标本混匀，用10μl（可用定量加液器）定量接种环立即接种划线，不需分区。

4.3斜面接种法

4.3.1此法主要用于鉴定或保存菌种，或观察细菌的某些生化特性和动力。

4.3.2用左手握住菌种管和斜面培养管底部，右手持接种针（环）。

用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。

用接种针（环）伸入菌种管内挑取移种之菌落。

伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上地蜿蜒划线，或直接自下而上地蜿蜒划线。

将接种针垂直插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿原穿刺线退出接种针。

4.4穿刺培养法

4.4.1此法用于保存菌种，观察动力及某些生化反应。

4.4.2以接种针挑取细菌培养物，插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿原穿刺线退出接种针。

4.5液体培养基接种法：

用灭菌接种环挑取菌落或标本，在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌混匀在液体培养基中。

值班人员执行4.1和4.2程序！

革兰染色操作规程

规范革兰染色操作规程。

2．原理

革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法，将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。

实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。

碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。

当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。

革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇（或丙酮）脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。

革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇（或丙酮）溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。

3．标本要求

3.1标本类型：

血液、尿液、脑脊液、关节液、痰液、阴道分泌物、脓汁、其它分泌物等

3.2标本采集：

见标本采集手册（一般需咳深部痰，其它无特殊要求。

）

3.3标本储存和运输：

可室温保存、室温运送。

病人标本须密封运送以避免污染环境。

4．处理方法

4.1尿液以4000r/min离心30min，取沉淀物作涂片

4.2脑脊液以4000r/min离心30min，取沉淀物作小而集中的涂片

4.3胸水、腹水、关节液等菌液可用以3000r/min离心10min，取沉淀物作涂片

4.4脓性脑脊液、脓性关节液等标本可用接种环蘸取菌液点在载玻片上

4.5痰液以接种环挑取干酪样或脓性部分直接涂片

4.6咽分泌物、阴道分泌物、脓汁、其它分泌物的标本可直接在玻片上涂布

4.7菌落涂片时，先取生理盐水1滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。

5．标本的稳定性

所有标本都必须立即送往微生物室，最好在2小时内，如不能及时送检，可在4℃存放，通常用于细菌学检验的标本存放不要超过24小时。

6．容器和添加剂类型

送检查容器可为痰盒、尿杯、试管等，无添加剂使用

7．试剂

7.1试剂名称：

革兰氏染色液

7.2自配试剂

试剂1：

结晶紫溶液

A液：

结晶紫2g

95%乙醇20ml

B液：

草酸铵0.8g

蒸馏水80ml

需在用前24h将A、B液混合，过滤后装入试剂瓶备用。

试剂2：

碘液

碘1g

碘化钾2g

蒸馏水300ml

将碘与碘化钾混合研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完全溶解，最后补足水量。

也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。

试剂3：

丙酮酒精

95％酒精97ml

丙酮3ml

试剂4：

稀释复红

石碳酸复红10ml

蒸馏水90ml

8．染色步骤

8.1涂片经火焰固定，加结晶紫液染1分钟，清水冲洗；

8.2加碘液染1分钟，清水冲洗；

8.3加丙酮酒精脱色，不时摇动约20-30秒，至无紫色脱落为止，清水冲洗；

8.4加稀释复红染20-30秒，清水冲洗；

8.5干后镜检。

9．结果判断

革兰阳性菌呈紫色，革兰阴性菌呈红色。

10．质量控制

10.1采用大肠埃希菌ATCC25922质控标准菌株，每周1次，有室内质控记录。

10.2采用金黄色葡萄球菌ATCC25923质控标准菌株，每周1次，有室内质控记录。

11．注意事项

11.1涂片时必须注意应轻轻操作，制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变；

11.2染液注意密封，以免凝结产生沉淀影响使用效果；

11.3染色的结果常受操作者技术影响，尤其是容易过度脱色，往往阳性染成阴性。

11.4在同一载玻片上，需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌作革半阳性及阴性对照。

11.5染色关键在于涂片和脱色，涂片不宜过厚，固定不宜过热，脱色不宜过度。

11.6菌龄为18～24小时为佳。

11.7提高责任心，做到全片检查。

12．临床意义

12.1鉴别细菌：

可将细菌分为阳性和阴性两大类，因而可以初步识别细菌，缩小范围，有利于进一步鉴定。

12.2选择药物：

革兰阳菌与阴性菌的细胞壁结构有很大差别，因而抗菌药物有差异。

13．相关文件及记录表格

13.1周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海.上海科学技术出版社,2007

13.2王钦王，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京.人民军医出版社,1999

抗酸染色操作规程

规范抗酸染色操作规程

结核杆菌、麻疯杆菌、耻垢杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面含有一层特殊的脂肪酸，具有抵抗结晶紫和其他碱性染色剂透过能力，故一般的染色剂不易透过菌体。

必须加热或使用洗涤剂使细胞膜通透性增加后，染色试剂才能渗入细菌体内，一旦染色剂进入细胞内，就不能被通常所用的酸性乙醇溶剂脱色。

使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色（红色）。

3.1标本类型：

病人的痰、关节液、腹水、胸积液、组织、脑脊液、分泌物、尿液等。

见标本采集手册（一般需咳深部痰，其它无特殊要求）。

4.1尿液以4000r/min离心30min，取沉淀物作涂片。

4.2脑脊液以4000r/min离心30min，取沉淀物作小而集中的涂片。

4.3胸水、腹水、关节液等菌液可用以3000r/min离心10min，取沉淀物作涂片。

4.4痰液以接种环挑取干酪样或脓性部分直接涂片。

4.5咽分泌物、阴道分泌物、脓汁、其它分泌物的标本可直接在玻片上涂布。

5．标本稳定性

涂片查找抗酸杆菌的标本，尤其是已经涂片后，可以保存较长时间，无特别时间限制。

送检查容器可为痰盒、尿杯、试管等，无添加剂使用。

抗酸染色液

石碳酸复红液

碱性复红10g

95％酒精100ml

5％石炭酸900ml（边加边研磨）

酸性酒精溶液（3％盐酸酒精）

浓盐酸3ml

亚甲基蓝溶液（吕氏美兰）

美兰0.3g

95％酒精30ml

蒸馏水70ml

10％KOH水溶液0.1ml

8．仪器设备

普通光学显微镜

9．操作步骤

9.1涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，停顿一会后再次加热，连续3次，切不可沸腾，反复染5分钟，清水冲洗。

9.2