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可以重复利用生物催化剂,便于讲生物催化剂与反应产物分开
9疫苗的第二次革命主要是那些反面?
1重组DNA技术
2蛋白质化学
3单克隆抗体技术
10疫苗的基本成分有哪些?
1抗原2佐剂3防腐剂4稳定剂5反活剂及其他相关成分
11疫苗的基本性质
1免疫原性2安全性3稳定性
12疫苗的种类有哪些?
1传统疫苗:
a灭火疫苗b减毒c亚单位或成分
2新型育苗a基因工程b遗传重组c合成肽d抗独特型抗体e微胶囊
13联合疫苗中各抗原的相互作用主要指那些?
1加强反应2抑制反应3机体已有的免疫力对新抗原应答的干扰
14常见免疫佐剂的类型
1铝佐剂2矿物油乳剂3植物油佐剂4植物来源佐剂5细菌来源佐剂6人合成佐剂7细胞因子佐剂
15免疫系统包括那两个部分?
包括先天性的非特异免疫系统和后天性的特异性免疫系统。
先天性免疫系统由一系列物理屏障、细胞、细胞因子和蛋白质组成。
获得性免疫系统则主要由T淋巴细胞、B淋巴细胞和抗原提呈细胞,以及它们分泌的各种细胞因子所组成。
16常见的免疫活性细胞及类型?
1)淋巴细胞:
B淋巴细胞、T淋巴细胞、自然杀伤细胞2)抗原提呈细胞:
单核-巨噬细胞、树突状细胞、APC3)粒细胞:
嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞及肥大细胞、嗜酸性粒细胞
17传统疫苗和新型疫苗有何不同?
传统疫苗是采用病原微生物及其代谢产物经人工减毒,脱毒,灭活等方法制成的疫苗。
新型疫苗则是通过基因工程技术和生物化学合成技术生产的疫苗。
18基因工程亚单位疫苗的表达系统
用于亚单位疫苗生产的表达系统主要有大肠杆菌,枯草杆菌,酵母,昆虫细胞,哺乳动物细胞,转基因植物,转基因动物等。
表达系统的选择主要考虑其表达抗原的免疫原性,表达效率及产物纯化的难易程度。
19构建核酸疫苗的基本操作流程
核酸疫苗由编码目的抗原的的基因和质粒表达载体两部分构成,所以首先要明确目的基因几对目的基因的提取,然后就是DNA疫苗载体的选取。
核酸疫苗的特点
(1)诱导机体产生全面的免疫应答,其保护免疫应答对不同亚型的病原体具有交叉抵御作用
(2)无病毒,灭活疫苗引起的致病作用,具有可靠的安全性
(3)能表达经修饰的天然抗原
(4)与亚单位疫苗一样具有高产性
(5)可将编码不同抗原的基因构建在同一个质粒中
(6)DNA具有预防作用,也有治疗作用
(7)生产简便,成本低廉,稳定性好,储运方便
(8)易于快速筛选具有免疫作用的基因
(9)能定向诱导以Th1和为Th2主导的免疫应答
20基因工程疫苗的发展重点
(1)主要研究常规技术不能解决或很难解决的新疫苗
(2)积极进行传统疫苗的改造
(3)加强治疗性疫苗的研究
(4)发展多价疫苗
21细菌类疫苗的种类和制备方法
种类:
减毒疫苗,灭活疫苗,亚单位疫苗或成分疫苗
制备方法:
(1)用人工诱变的方法培育出弱毒菌株或无毒菌株而制成的
(2)将自然强毒株或标准菌株人工大量培育后,经加热处理或福尔马林,戊二醛,B-丙内酯等化学处理制成
(3)细菌培养液中提取、用化学方法、脱毒
22细菌外毒素的基本特性和简单生产流程
特性:
1毒性强2具有亲组织性3具抗原性4是一种双组分结构蛋白质
生产流程:
1产毒2脱毒3精制
23病毒类疫苗的培养方法
1细胞培养2鸡胚培养法3动物培养法
24血浆的生物学功能
1运输功能2维持内环境的稳态3参与凝血-纤溶等生理性止血功能和营养功能4参与体液调节和防卫功能
25简述白细胞的种类和各自的作用
1嗜中性粒细胞:
炎症时进入组织,吞噬作用与巨噬细胞相同,无抗原提呈和免疫调节作用
2嗜碱粒细胞及肥大细胞:
含有组织胺,嗜碱性粒细胞表面表达IgE受体,可诱发I型细胞过敏反应
3嗜酸性粒细胞:
表面含有Ig受体,能吞噬与销毁组胺颗粒与抗原体复合物,引发Ig免疫应答反应,但不能吞噬病原异物
26简述RH血型系统
RH抗原只存在于红细胞膜上,不存在与其他组织细胞和体液中。
RH血型系统是红细胞血型中最复杂的一个系统,现在已发现46个RH抗原,与临床关系密切的是D、C、E、C、e五种抗原。
其中,D抗原的抗原性最强。
通常将红细胞上含有D抗原者称为RH阳性,缺乏者称为RH阴性
27细胞因子的种类及其作用
1干扰素除具有抗病毒作用外,还有抗肿瘤、免疫调节、控制细胞增殖、引发发热等
2集落刺激因子有集落刺激活化,不同的CSF对不同发育阶段的造血干细胞和造血细胞起促增殖化分作用,是血细胞发生不可少的刺激因子
3白细胞介素有重要的介导作用
4肿瘤坏死因子除具有杀肿瘤外,TNF还可引发炎症反应
5趋化因子调节淋巴细胞和巨噬细胞的趋化性,激活巨嗜/单核细胞,促进定向造血干细胞的增殖,促进内皮细胞的一些转化细胞的功能。
在体炎症反应和抗感染及创伤愈合中起作用
6生长因子对机体不同细胞有促进生长作用
28简述细胞因子的特性
1来源的多样性:
一种因子源于多种细胞或同种刺激物可诱发同种细胞产生多种细胞因子
2多效性:
一种细胞因子可以有多种生物学活性
3高效性:
有微量,高效的特性
4快速反应性
5两面性:
具有生理和病理性
6理化性质:
绝大多数的细胞因子为小分子的分泌性多肽或蛋白质,多数细胞因子为单链结构,部分为同源双体结构,不同的细胞因子的氨基酸序列有很大差异,一些细胞因子的基因是连锁的
1、联合免疫:
采用多种具有免疫原性的抗原联合制成多联或多价疫苗,注射这种疫苗克预防多种传染病或相同疾病的不同亚型,也可将多种疫苗同时进行免疫接种,已达到预防多种传染病的目的。
2、免疫佐剂:
凡非特异地通过物理或化学的方式与抗原结合而增强其特异免疫性的物质
3、先天性免疫系统:
是人体天生具有的免疫保护系统,包括四道主要防线,即物理防线、生理防线、吞噬细胞防线和感染反应防线。
4、基因工程亚单位疫苗:
又称生物合成亚单位疫苗或重组亚单位疫苗,主要是指将病原微生物的抗原基因用分子生物学的方法分离,然后与载体DNA相连接,再经载体将抗原基因带进受体进行复制与表达,最后将基因工程表达的蛋白质抗原分离纯化后制成的疫苗。
5、肿瘤坏死因子:
是一类具有广泛生物学活性的细胞因子,能引起肿瘤出血性坏死。
对各种正常细胞具有广泛的免疫生物学活性。
6、单克隆抗体:
是将抗体产生细胞与具有无限增值能力的骨髓瘤细胞相融合,通过有限稀释法及克隆花使杂交瘤细胞成为纯的单克隆细胞系而产生。
7、抗原:
指能够刺激机体产生免疫应答,并能与免疫应答产生抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合,发生免疫效应的物质。
8、转基因植物疫苗:
通过介导特定的外源基因来获得转基因植物,以改良植物、研究植物功能,生产具有重要经济价值的蛋白质。
9、细胞因子:
是人类或动物的各类细胞分泌的具有多样性生物活性的因子,是一组可溶性的不均一的蛋白质分子,能够调节细胞的生长与分化
10、类毒素:
是一种主动免疫制剂,用于细菌毒素性疾病的预防,包括白喉、破伤风等类毒素。
11、灭火疫苗:
是将自然强毒株或标准菌株人工大量培养后,经加热处理或福尔马林、戊二醛、B-丙内酯等化学处理制成的。
灭火疫苗需加工佐剂以提高其免疫效果。
12、集落刺激因子:
是一类能参与造血调节过程的酸性糖蛋白分子,在体外培养中能刺激骨髓造血细胞分化增值为细胞集落,又称造血刺激因子或造血调节因子。
13、疫苗:
是一种特殊的药物,一类由免疫学的经验、理论和生物技术共同发展而产生的生物制品,它与一般药物具有明显的不同,主要用于健康人群,通过免疫机制预防疾病发生。
14、离子交换层析:
是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。
15、蛋白质等电点沉淀:
当蛋白质溶液的PH=pI时,蛋白质的净电荷为0,因而失去了水化和分子间相斥的作用,疏水性氨基酸残基暴露,蛋白质分子相互靠拢、聚集,最后形成沉淀析出,即等电点沉淀。
16、免疫原性:
指疫苗接种进入机体产生免疫应答的强度和持续时间,影响因素包括:
1,抗原的强弱、大小和隐定性2,抗原的理化性质
17、获得性免疫系统:
是在抗原诱导下形成的,它包括中枢免疫系统、外周免疫器官及各种组织中的免疫细胞、各种免疫活性介质等
18、亚单位疫苗:
是利用单一蛋白质抗原分子来诱导免疫反应的
填空题:
基因工程技术是生物技术的核心技术。
现代生物技术是以20世纪70年代DNA重组技术的建立为标志。
PCR包括三个步骤_变性,退火,延伸
基因工程的实施包括四个必要条件:
工具酶、基因、载体和受体细胞。
限制性内切酶酶切DNA片断后通常有两类末端:
平末端、黏性末端。
基因组文库中包括有内含子和外显子,而cDNA文库中则不含内含子
生物技术主要是指基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、蛋白质工程。
基因工程操作流程主要包括目的基因分离、与克隆载体重组、转入受体细胞、筛选和鉴定克隆子。
细胞工程包括植物细胞的体外培养技术、细胞融合技术、细胞器移植技术、克隆技术、干细胞技术。
酶工程包括酶的固定化技术、细胞的固定化技术、酶的修饰改造技术、酶反应器的设计等技术。
酶的生产方法有提取法,发酵法和化学合成法。
酶分子修饰的主要目的是改进酶的性能,即提高酶的活力、减少抗原性,增加稳定性。
蛋白质工程的目标是根据对蛋白质功能的特定需求,对蛋白质结构进行分子设计,根据中心法则便可以改造天然蛋白质。
简答题
基因工程操作过程的主要步骤有哪些?
①分离或合成基因;
②通过体外重组将基因插入载体;
③将重组DNA导入细胞;
④扩增克隆的基因;
⑤筛选重组体克隆;
⑥对克隆的基因进行鉴定或测序;
⑦控制外源基因的表达;
⑧得到基因产物或转基因动物、转基因植物
一种理想的用作克隆载体的质粒必须满足的条件是什么?
(1)具有转录复制起始点。
(2)具有抗菌素抗性基因。
(3)具有若干限制酶切单一识别位点。
(4)具有较小的分子量和较高的拷贝数。
基因工程研究的理论依据是什么?
(1)不同基因具有相同的物质基础。
(2)基因是可切割的
(3)基因是可以转移的
(4)多肽与基因之间存在对应关系
(5)遗传密码是通用的
(6)基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代
分离目的基因的途径有哪些?
(1)酶切法
(2)PCR法
(3)化学合成法
(4)基因组或cDNA文库法
目的基因克隆的基本方法有哪些?
(1)直接从染色体DNA中分离:
仅适用于原核生物、叶绿体和线粒体基因的分离,较少采用。
(2)人工合成:
根据已知多肽链的氨基酸顺序,利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。
适应于编码小分子多肽的基因。
(3)从mRNA合成cDNA:
采用一定的方法钓取特定基因的mRNA,再通过逆转录酶催化合成其互补DNA(cDNA),除去RNA链后,再用DNA聚合酶合成其互补DNA链,从而得到双链DNA。
这一方法通常可得到可表达的完整基因。
(4)利用PCR合成:
如已知目的基因两端的序列,则可采用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)技术,在体外合成目的基因。
(5)从基因文库中筛选:
首先建立基因组或cDNA文库,利用探针从文库中筛选目的克隆。
cDNA文库和基因组文库的主要差别有哪些?
(1)基因组文库克隆的是任何基因,包括未知功能的DNA序列;
cDNA文库克隆的是具有蛋白质产物的结构基因,包括调节基因。
(2)基因组文库克隆的是全部遗传信息,不受时空影响;
cDNA文库克隆的是不完全的编码DNA序列,因它受发育和调控因子的影响。
(3)基因组文库中的编码基因是真实基因,含有内含子和外显子,而cDNA文库克隆的是不含内含子的功能基因。
重组DNA导入受体细胞方法有哪些?
(1)化合物诱导法
(2)电穿孔法
(3)农杆菌介导基因转化法(叶盘法)
(4)微弹轰击法
(5)超声波处理法
(6)脂质体介导法
(7)体内注射转化法
(8)精子介导法
工业化菌种的要求是什么?
(1)原料廉价、生长迅速、繁殖能力强、目的产物产量高。
(2)发酵中产生的泡沫少,易于控制培养条件,酶活性高,发酵周期短。
(3)抗杂菌和噬菌体的能力强。
(4)不产生或少产生与目标产物相近的幅产物。
(5)菌种遗传性稳定,不易变异和退化
(6)不产生任何有害的生物活性物质和毒素,保证安全生产。
什么是种子的扩大培养?
种子扩大培养是发酵生产的第一道工序。
就是将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接种到试管斜面活化后,再经过摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。
34、什么是蛋白质工程?
是以对蛋白质结构和功能关系的认识为依据,借助基因工程技术和X-射线衍射分析技术,从基因入手,通过定点突变改变核苷酸顺序,以达到改造现有蛋白质分子、或创造新的蛋白质分子目的的技术学科。
何谓固定化酶?
固定化酶的特性与游离酶的比较有哪些改变?
固定化酶是指固定在一定载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶。
固定化酶既保持了酶的催化功能,又克服了游离酶的不足之处,具有提高酶的催化效率,增强稳定性,可反复或连续使用以及易于和反应产物分开等显著优点。
固定化酶与游离酶比较,其催化特性主要有下列变化:
(1)固定化酶的稳定性一般比游离酶的稳定性好,主要表现在:
对热稳定性提高,可以耐受较高的温度;
保存稳定性好,可以在一定条件下保存较长时间;
对蛋白酶的抵抗性增强,不易被蛋白酶水解;
对变性剂耐受性提高,在尿素、有机溶剂和盐酸胍等蛋白质变性剂的作用下,仍可保留较高的酶活力等。
(2)固定化酶的最适作用温度一般与游离酶差不多,活化能也变化不大,但也有些固定化酶的最适温度与游离酶比较会有较明显的变化。
(3)酶经过固定化后,其作用的最适pH往往会发生一些变化。
(4)固定化酶的底物特异性与游离酶比较可能有些不同,其变化与底物相对分子质量的大小有一定关系。
对于那些作用于低分子底物的酶,固定化前后的底物特异性没有明显改变。
而对于那些可作用于大分子底物,又可作用于小分子底物的酶而言,固定化酶的底物特异性往往会发生变化。
转基因食品的优点有哪些?
(1)可延长蔬菜的货架期及感官特性。
(2)提高食品的品质。
(3)提高食品的营养。
(4)提高肉、奶和畜类产品的数量和质量。
(5)增加农作物抗逆能力,增加农业产量。
(6)生产可食性疫苗或药物
(7)生物功能性食品
什么是生物农药?
生物农药是“可用来防治病、虫、草等有害生物的生物体本身或源于生物,并可作为‘农药’的各种生理活性物质”。
生物农药可分为生物体农药和生物化学农药。
生物农药本身具有的对人畜毒性小,只杀害虫,与环境相容性好以及病虫害相对不易产生抗性等优点。
简述疫苗的概念,并简述三代疫苗的特点?
疫苗:
广义的疫苗是指将病原微生物(如细菌、立克次氏体、病毒等)及其代谢产物,经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。
其中,由细菌制成的称为菌苗;
由病毒、立克次体、螺旋体等制成的称为疫苗。
第一代疫苗:
19世纪中叶,法国科学家Parsteur首先发明了减毒疫苗的制备技术。
用病原体减毒或弱化制成疫苗,称之为第一代疫苗。
特点:
以减毒、弱化或灭活的病原体做疫苗。
第二代疫苗(基因工程疫苗):
将病原体的抗原(某种蛋白质)基因克隆在细菌或真核细胞内,利用其生产的病原体抗原作为疫苗。
利用病原体的某些抗原成分作为疫苗。
第三代疫苗(核酸疫苗):
将含有编码病原体抗原基因序列的质粒载体直接作为疫苗,经肌肉注射或微弹轰击等方法导入体内,通过宿主细胞表达系统表达抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答。
用含有病原体抗原基因序列的质粒载体直接作为疫苗。
如何利用微生物勘探石油和提高采油量?
微生物二次采油技术的基本原理:
利用微生物能在油层中发酵并产生大量的酸性物质以及H2、CO2及甲烷等气体的生理特点,产气增加地层压力、酸性物质降低原油黏度,发酵产物具有表面活性剂作用。
采油量可提高20%-34%。
微生物三次采油原理利用微生物分子生物学技术构建能产生大量CO2和甲烷等气体的基因工程菌株或选育能提高产气量的高活性菌株。
让这些工程菌能在油层中不仅产生气体增加井压,而且还能分泌高聚物,糖酯等表面活性剂,降低油层表面张力,使原油从岩石中、沙土中松开,黏度减低,从而提高采油量。
什么是生物修复技术?
生物修复是利用生物,特别是微生物的代谢活动来减少或清除污染环境中的化学污染物的过程。
这种技术涉及生物催化进行的降解、去毒或积累作用,并且可用于大面积污染环境的治理,又称为生物改善、生物挽救、生物再建或生物处理等。
生物修复的技术大致可分为原位生物修复和异位生物修复两类。
原位生物修复中的污染对象不需移动,处理费用低,但处理过程控制比较难。
异位生物修复需要通过某种方法将污染对象转移到污染现场之外,再进行处理。
生物技术领域的发明包括哪些?
①转基因动物和植物品种发明;
②微生物及遗传物质发明;
③生物制品发明;
④获得生物体的生物学方法或遗传工程学方法发明;
⑤微生物学方法发明;
⑥基因治疗方法发明等。
生物技术专利保护的两个关键问题是什么?
①如何确定生物技术领域中的科学发现和发明的界限,尤其是关于基因的发明与发现问题。
②如何界定一个符合专利申请的与生命物质有关的发明,以及对此项发明该给予多大范围的保护。
生物技术:
也称生物工程,是人们以现代生命科学为基础,结合先进的工程技术手段和其他基础科学的科学原理,按照预先的设计,改造生物体或加工生物原料,为人类生产出所需产品或达到某种目的的一门新兴的、综合性的学科。
基因组DNA文库:
将某一种基因DNA用适当的限制酶切断后,与载体DNA重组,再全部转化宿主细胞,得到含全部基因组DNA的种群,称为基因组DNA文库。
或:
把某种生物基因组的全部遗传信息通过载体贮存在一个受体菌克隆子群体中,这个群体即为这种生物的基因组文库。
cDNA文库:
即由mRNA经过反转录成cDNA,然后来构建文库,构建的文库不包含内含子。
基因和基因组DNA分子中具有特定生物学功能的片段称为基因(gene)。
一个生物体的全部DNA序列称为基因组(genome)
载体:
把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖或表达的工具称为载体。
转化:
外源DNA导入宿主细胞的过程称之为转化。
细胞工程:
以生物细胞、组织或器官为研究对象,运用工程学原理,按照预定目标,改变生物性状,生产生物产品,为人类生产或生活服务的科学。
外植体:
指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料。
愈伤组织:
在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞,多在外植体切面上产生。
体细胞杂交:
(原生质体融合)指在人工控制条件下不经过有性过程,两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。
悬浮培养:
是将植物游离细胞或细小的细胞团,在液体培养基中进行培养的方法。
原生质体:
指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露细胞。
传代:
将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。
原代培养:
也称初代培养期。
从体内取出组织接种在培养瓶中培养到第一次传代前阶段,一般持续1-4周。
细胞系:
经过再培养后而形成的具有增殖能力、特性专一、类型均匀的培养细胞。
细胞株:
将所得到的纯净细胞群,以一定的密度接种在lmm厚的薄层固体培养基上,进行平板培养,使之形成细胞团,尽可能地使每个细胞团均来自一个单细胞,这种细胞团称为“细胞株”。
干细胞:
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,它可以化成多种功能细胞。
诱变育种:
是指用物理、化学因素诱导植物的遗传特性发生变异,再从变异群体中选择符合人们某种要求的单株,进而培育成新的品种或种质的育种方法。
酶工程:
研究酶的生产和应用的技术过程,包括酶的制备、酶的固定化、酶分子修饰与改性和酶反应器等。
抗体酶:
一类具有催化功能的抗体分子。
又叫催化性抗体。
酶分子修饰:
通过各种方法是酶分子结构发生改变,从而改变酶的催化特性的技术。
固定化酶:
固定在一定载体上并在一定空间范围发生催化反应的酶。
蛋白质结构域:
是指蛋白质分子上可以区分出来的亚级球状结构,是高于超二级结构的结构层次。
定点突变:
定点突变是对已知序列的基因(或DNA)中任意指定位置进行突变的技术。
其主要的技术过程包括核苷酸的置换、插入、或删除。
蛋白组学:
基因组编码的所有蛋白质,是研究细胞内所有蛋白质及其动态变化规律的学科。
基因疫苗:
将含有编码某种抗原蛋白的基因序列的质粒作为疫苗,直接导入人或动物体内,让其在宿主细胞中表达抗原蛋白,诱导宿主产生对抗该抗原蛋白的免疫应答而达到免疫的目的。
也叫DNA疫苗或核酸疫苗。
基因治疗:
利用遗传学原理治疗人类疾病。
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