脑脊液常规操作规程.docx
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脑脊液常规操作规程
1.检验目的
指导脑脊液(CSF)常规测定。
2.方法原理
2.1脑脊液是存在于脑室及蛛网膜下腔中的无色透明液体。
由于脉络丛上皮细胞对血浆
中各种物质的选择性分泌和超滤作用,血浆中各种成分对血脑屏障的通透性各有不
同。
其中最易通过血脑屏障的是氯、钠、镁离子及乙醇;其次为清蛋白、葡萄糖、钙
离子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐;纤维蛋白原、补体、抗体、某些药物、胆红素、
胆固醇则极难或不能通过。
中枢神经系统任何部位发生器质性病变时,如感染、炎
症、肿瘤、外伤、水肿和阻塞等都可以引起脑脊液成分的改变。
通过对脑脊液理学
检查,显微镜检查、化学和免疫学检查及脑脊液病原学检查,可对疾病的诊断、治
疗和预后判断提供依据。
2.2脑脊液(CSF)常规测定内容包括:
颜色、性状、有核细胞计数、红细胞计数、潘
氏试验、细菌等。
2.3潘氏(pandys)试验:
CSF中的球蛋白与苯酚结合,形成不溶性的蛋白盐而产生白
色混浊或沉淀。
1
颜色(COLOR)
6
中性粒细胞(NE)
2
透明度(clearity)
7
淋巴细胞(LY)
3
凝固性(coagulability)
8
单核细胞(MO)
4
脑脊液有核细胞计数(CSF—NUCL)
9
潘氏试验(pandystest)
5
脑脊液红细胞计数(CSF—RBC)
3.方法性能参数(如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵敏度和特
4.标本类型
4.1标本类型:
新鲜CSF。
4.2标本拒收条件:
拒收延迟室温2h、冷藏6h未送达标本。
4.3标本保存与稳定性:
一般室温1h内完成检验,久置可致细胞破坏,影响细胞计数
及分类检查。
5.要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统
5.1标本容器:
BD无促凝成分红头管或洁净干燥带盖玻璃管。
5.2试剂
5.2.1试剂组分:
生理盐水
0.9%Nacl溶液
白细胞稀释液
1%冰乙酸(1ml分析纯冰醋酸+蒸馏水至100ml)
刘氏快速瑞氏染色液
A液:
曙红、甲醇
B液:
亚甲蓝
潘氏试剂
10%苯酚溶液(纯苯酚10ml+蒸馏水至100ml)
5.2.2试剂存储和有效期:
试剂名称
存储条件
有效期
开瓶有效期
位置
生理盐水
室温
1年
1年
存货柜/血常规室操作台
冰乙酸
室温
2年
1年
药品柜
1%乙酸
冷藏
1年
1年
试剂冰箱
10%苯酚溶液
室温
1年
1年
药品柜
刘氏快速瑞氏染色液
室温
2年
6个月
药品柜/染色操作台
5.3仪器:
OLYMPUS光学显微镜,血细胞计数板。
6.校准程序(计量学溯源性)
不适用
7.质量控制,控制品使用水平和频率,允许限的纠正措施
不适用
8.程序步骤
8.1一般性状检查:
轻轻混匀CSF,观察量、颜色、有无凝块和透明度(一般细胞数≥300
/μl个时或蛋白增加可产生混浊),并记录。
8.2显微镜检查
8.2.1细胞计数(无凝块标本)
(1)清或微混标本:
a)混匀后直接冲入计数池,计数四角四大方格内细胞总
数(包括RBC,NUCL)。
b)用白细胞稀释液作1:
1稀释,计数有核细胞数
c)红细胞数=细胞总数-有核细胞数
(当白细胞数≥30个/μl时,在白细胞计数池中直接分类至少50个白细胞)
(2)混浊及以上标本:
外观
稀释
样本量
稀释液/溶解剂
粉色/轻度混浊
1:
20
20μl
380μl
红色/混浊
1:
50
10μl
490μl
带血量极高/极度混浊
1:
100
10μl
990μl
a)稀释标本:
于清洁试管中按上表进行稀释,用以计数细胞总数;
b)溶解RBC:
于清洁试管中按上表进行稀释,用以计数有核细胞数;
c)冲池;计数
d)红细胞数=细胞总数-有核细胞数
8.2.2有凝块或粘稠标本:
(1)用吸管旋转并挤压凝块,挤出里面的液体及细胞。
(2)2000rpm×5min离心,分离上清液和沉渣。
(3)混匀沉渣,涂片,用高倍镜观察NUCL、RBC。
(4)报告每高倍镜视野的红细胞和有核细胞数。
8.2.3离心获取沉渣和上清液:
将完成计数的CSF离心,2000rpm×5min离心,吸出上
清液于另一试管,并在试管上编号。
8.2.4瑞氏染色:
当NUCL>106/μl时进行操作。
将沉渣混匀涂片,厚薄根据有核细
胞数而定,血性标本可考虑推片。
待干后,瑞氏染色进行分类(分
100个NUCL);如见有不能分类细胞或怀疑有恶性细胞时,应请示
上级主管,由有经验的上级主管进行分析,并在报告时另行描述报
告,如脑膜白血病或肿瘤细胞等。
8.3潘氏试验
8.3.1试验操作:
取小试管一支,加入10%的石碳酸水溶液约5ml,用一次性吸管
加一滴CSF上清液立即在黑色背景灯照下观察结果。
8.3.2结果判定:
阴性:
清晰透明。
弱阳性(±):
微呈白雾状,在黑色背景下才能看到。
阳性(+):
灰白色云雾状。
(2+):
白色浑浊。
(3+):
白色浓絮状沉淀。
(4+):
白色凝块。
9.计算结果原理
9.1颜色
9.1.1红色:
常见于穿刺损伤或出血性病变。
为区别蛛网膜下腔出血和穿刺损伤应注意:
(1)离心沉淀后:
如上层液体呈黄色,隐血试验阳性,多为蛛网膜下腔出
血,且出血时间已经超过4小时。
如上层液体澄清无色,红细胞均沉
管底,多为穿刺出血或因病变所致的新鲜出血。
(2)红细胞皱缩,不仅见于陈旧性出血,在穿刺损伤引起出血时也可看
到,因脑脊液渗透压较血浆高所致。
9.1.2黄色:
可因陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血、椎管梗阻、化脓性脑膜炎、结核性
脑膜炎、重症如核黄疸等引起。
9.1.3白色或灰白色:
多因白细胞增加所致,常见于化脓性脑膜炎。
9.1.4褐色或黑色:
常见于脑膜黑色素瘤。
9.1.5绿色:
可见于绿脓假单胞菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎、高胆红
素血症和脓性脑脊液。
9.2透明度:
脑脊液混浊程度与细胞数量有关,脑脊液中细胞数超过300×10/L时,可出现
混浊。
蛋白质含量增加或含大量微生物也可产生混浊。
9.3凝固性:
结核性脑膜炎静置12-24小时后,标本表面有纤细的网膜形成。
蛛网膜下腔
梗阻时,可产生黄色胶冻状。
9.4潘氏试验:
有脑组织和脑脊髓膜疾患时常成阳性反应如化脓性脑脊髓膜炎、梅毒性中
枢神经系统疾病、脊髓灰质炎、流行性脑炎等。
脑出血时多呈阳性反应,
如外伤性血液混入脑脊液中,亦呈阳性反应。
9.5细胞分类:
9.5.1中枢神经系统病变的CSF,细胞可增多,其增多的程度及细胞的种类与病变的
性质有关。
9.5.2中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑脊髓膜炎时,细胞数可中度增加,
常以淋巴细胞为主。
9.5.3细菌感染时(化脓性脑脊髓膜炎),细胞数显著增加,以中性粒细胞为主。
9.5.4寄生虫病时,可见较多的嗜酸性粒细胞。
9.5.4脑室或蛛网膜下腔出血时,脑脊液内可见多数红细胞。
10.生物参考区间
颜色(COLOR)
无色
透明度(clearity)
透明
凝固性(coagulability)
无凝块
潘氏试验(pandystest)
阴性OR弱阳性
有核细胞计数
(CSF—NUCL)
成人(0-8)×106/L
中性粒细胞(NE)
成人(0-6%)
儿童(0-15)×106/L
新生儿(0-8%)
新生儿(0-30)×106/L
淋巴细胞(LY)
成人(40-80%)
单核细胞(MO)
成人(15-45%)
新生儿(5-35%)
新生儿(50-90%)
红细胞计数(CSF—RBC)
0×10/L
(正常脑脊液中白细胞主要为淋巴细胞、单核细胞,之比约为7:
3,可含极少中性粒细
胞)。
11.警告值、危急值(适用时)
12.检验结果可报告区间
13.对超出可报告范围的结果的处理
13.1如检到细菌时应建议培养确认。
13.2有不能分类细胞,应请示上级主管,并另行描述报告,如脑膜白血病或肿瘤细胞。
14.实验室解释
15.安全防护措施
15.1所有样品按具有潜在传染性的标本处理。
15.2测定完成后,上清液及沉渣试管于2000mg/L有效氯消毒液浸泡4小时以上,倒入
医疗废物下水槽,由医院统一消毒处理;塑料试管或容器等容器等医疗废弃物倒入
黄色医疗垃圾袋,贴上标签并封口,由医院统一销毁处理。
15.3原液保存48小时或以上,倒入黄色医疗垃圾袋,贴上标签并封口,由医院统一销
毁处理,并做记录。
16.最常见的误差源。
手工操作,主观性较强,细胞鉴别需要有经验。
17.方法的局限性(如乳糜血、溶血、高胆红素血等干扰影响、交叉反应等)
18.参考文献
18.1全国临床检验操作规程-第三版
19.有关引用程序与文件
20.SOP涉及的记录与表格
(学习的目的是增长知识,提高能力,相信一分耕耘一分收获,努力就一定可以获得应有的回报)
- 配套讲稿:
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