几种真菌的分离与鉴定文档格式.docx

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为鞭毛菌与接合菌得无性生殖形式、孢子囊中所含得孢子来源于分枝菌丝或胞囊梗顶端膨大形成孢子囊,囊内原生质浓缩集聚,割裂而成,一般数目较多,孢子囊形态多样,因种而异。

（4）芽生孢子:

由菌细胞出芽生成,见于念珠菌及隐球菌,前者（类酵母菌）出芽后孢子伸长呈丝状,但不见与母细胞分离,称为假菌丝,在假菌丝上得收缩点也可出芽成芽生孢子。

（5）分生孢子:

就是子囊菌与半知菌得无性孢子,也就是半知菌分类得主要依据,单细胞得分生孢子称小分生孢子,有蒂或无蒂,侧生或游离,分散或成群,圆形、梨形、卵圆形或其它形状,表面粗糙或光滑,或有或无各种纹饰。

多细胞得分生孢子称大分生孢子,有纺锤形、棒形、球棍形、镰刀形及其它形状,两端尖或圆或一端圆,厚壁或薄壁,壁光滑或粗糙,有色或无色,分隔有多有少。

（二）培养特性及繁殖方式

１、培养特性大多数真菌对营养要求不高,只需要水、盐,简单得氮源及碳水化合物就可生长,一般常用沙堡氏琼脂基（主要成分葡萄糖4％、蛋白胨1%、琼脂2％）培养都能生长。

但需要弱酸性（pＨ4~6）、较低孵育温度（22～２8℃）,充分温度与氧气供应才能生长良好。

侵害内脏得某些真菌在37℃含血得培养基中生长良好。

真菌生长都比较缓慢,大多需孵育数天后才成明显菌落,菌落有下列三种类型:

（1）酵母型菌落:

外观湿润稠软致密,类似一般细菌菌落,镜检只见有圆形或椭圆形生芽细胞（例如隐球菌得菌落）。

（2）类酵母型菌落:

外观性状似酵母型菌落,镜检除见有出芽得细胞外,尚可见到假菌丝（例如念珠菌得菌落）。

（3）丝状型菌落:

由多数分枝得菌丝体向上生长组成疏松得绒球状,表面有很多孢子,显示各种色泽,菌落可呈棉絮状绒球状粉末状或石膏样,其正面与背面可显示各种不同色素,常作为鉴定菌种得参考、镜检可见有纵横交织得菌丝及各种孢子（例如各种癣菌得菌落）。

2。

繁殖方式有多样性,包括出芽增殖,菌丝增长,菌丝分枝与断裂,产生无性孢子及有性孢子进行繁殖,因此它繁殖力很强,但生长速度较慢、

（三）变异性与抵抗力

真菌很容易发生变异,在人工培养基中多次移种或孵育过久,就可出现形态结构、菌落性状、色素以及各种生理性状（包括毒力）得改变,用不同得培养基与温度培养真菌,其性状也有改变,真菌对干燥阳光紫外线及一般化学消毒剂耐受性却较强。

但对热得抵抗力却不强、60℃以上1小时即可杀死孢子及其菌丝,在１％～3％石炭酸、2.5％碘酊、0.1％升汞及10%甲醛中可被灭活。

用甲醛气体熏蒸被真菌污染得衣物用具,可杀灭真菌菌丝及其孢子。

但真菌对一般抗菌素及磺胺药均不敏感。

只对二性霉素、酮康唑、制霉菌素等非常敏感,治疗真菌感染常用此药。

（四）致病性与免疫性

１、致病性病原真菌得致病机制还就是一个未完全解决得问题;

根据其侵害部位,主要分为下列两类:

（1）浅部真菌病:

主要由癣菌引起,大多为外源感染,常易侵害皮肤、指（趾）甲及须发等含角质得组织,引起癣症、

（2）深部真菌病:

可由各种真菌引起,包括类酵母菌、二相真菌及丝状菌。

侵害粘膜、皮下组织、内脏及脑膜等处,有时扩散全身,主要就是内源性感染,也可由外源传染;

前者就是因机体抵抗力降低,如患重病,长期使用免疫抑制剂,广谱抗菌素或放射治疗,患恶性病,严重烧伤等时,造成体内菌群失调,以致常居在体内得某些真菌（如白念珠菌）,甚至平时不致病得环境中得真菌（如曲霉、毛霉）等也会乘机侵害,一些传染性较强得内脏真菌病就是内外源感染、

２、免疫性浅部真菌病一般在血中不产生特异性抗体,病后无免疫保护力,只就是儿童头癣等青春期后头皮皮脂增多时可以自愈,以后不再感染,其她部位癣症治愈后仍可再感染。

深部真菌病虽可产生抗体,但无明显免疫保护作用、

临床常见得病原性真菌

一、浅部真菌

（—）皮肤癣菌

皮肤癣菌又称皮肤丝状真菌,有下列三属（见表1）,都只侵犯体表角化组织（皮肤,毛发及指甲与趾甲）。

不侵害深部组织,或内脏,皆属外源性传染,由接触患癣病人、动物（狗、猫、鼠、牛、马等）或染菌物体而感染。

1.毛癣菌属 

*红色毛癣菌

（1）直接镜检:

皮屑及甲屑,分枝分隔得菌丝有时可断裂或关节孢子状,毛发:

发外型感染表现为发外孢子排列成串。

少数为发内型感染孢子在发内排列成链状;

毛发穿孔试验阴性。

（2）培养特征:

在葡萄糖蛋白胨琼脂,２5℃,生长比较快,菌落形态有多种表现,镜检也不完全一样,常见有下列四种:

I型:

羊毛状:

白色羊毛状菌丝充满斜面,典型得卷成筒状,边缘贴牢管壁,呈鲜红色,背面开始在中心有一红色小点,以后形成深红色环,最后成片为葡萄酒色,色素边缘划界非常明显、少数Ｉ型菌株表现无红色色素,正面白色,背面呈淡黄色类似石膏I型,亦有正面白色而背面呈灰黑色。

II型:

绒毛状:

粉红色绒毛状菌丝生长,占斜面３/５,菌丝稀疏,透过菌丝可见粉红色得基底,背面颜色同Ｉ型相同、ＩＩI型:

粉未状:

菌落表面稍有凸起,呈粉末状,粉红色,约占斜面得1/2~２/３,背面同Ｉ型。

IV型:

沟纹状:

菌落生长相对较慢,比以上三种类型为小,占斜面得1／3~1/2,菌落中央凸起,从中央向四周有排列比较整齐得放射状沟纹,边缘整齐,表面菌丝甚少。

开始微带黄色,以后变粉红,背面同I型。

（3）菌种鉴定:

①菌落特征及色素;

②大小分生孢子得形态;

③玉米粉吐温琼脂上产生红色色素;

④毛发穿孔试验阴性;

⑤尿素酶试验阴性、

＊须癣毛癣菌

（１）直接镜检:

皮屑内见分枝分隔得菌丝,甲屑内为关节状菌丝。

毛发感染为发外型,发内有时有菌丝、

（２）培养特性:

在沙氏上生长较快,菌落形态可分为两大类:

毛型与粉型;

下列I、II型为毛型,ＩIＩ、IV、V型属粉型。

自炎症明显得皮损中所分离出得菌株多属粉型。

毛型菌落外观均似红毛,应注意鉴别。

具体分型①羊毛状（I型）,又称趾间毛癣菌,菌落生长快,白色羊毛状。

气生菌丝较多且长,排列紧密,充满斜面,好象红毛,正面雪白,背面淡黄色。

镜检见较细分枝,分隔得菌丝,胞浆浓。

有少量球形或长形小分生孢子,无螺旋菌丝与大分生孢子。

间或可见球拍菌丝及结节菌丝。

②绒毛型（IＩ型）,生长快,菌落雪白。

表面有紧密得细短气生菌丝,中央可有乳头状突起,边缘如刀切,背面棕黄色或棕红色。

镜检见较细得分枝、分隔得菌丝,小分生孢子多,有时成葡萄串状,无螺旋菌丝或大分生孢子;

③乳皮状（III型）,开始为乳白色菌丝,不久一部分菌落变为粉末样,色微黄,光滑,似牛乳表面得一层薄膜,可一块块地挑取,中央有少许褶叠,边缘不整齐,背面淡黄或棕黄色。

镜检见粗细不一,分枝分隔得菌丝与大量螺旋菌丝,间或可见破梳状菌丝,结节菌丝及球拍菌丝,大分生孢子少,棒状,两端圆,与分生孢子梗得连接处较窄,薄壁光滑,小分生孢子多,球形或长形,有时成葡萄串状排列。

④粉末状（IV型）,菌落粉末状,表面平坦、光滑。

间或有少数白色气生菌丝,中央有乳头状凸起,边缘锯齿状。

菌落生长快,充满斜面,色黄或奶油色,外观像石小、背面棕黄或棕红色。

⑤颗粒状（V型）:

生长快,菌落粉样,表面不平,呈颗粒状、有不规则得褶叠或沟纹,边缘不整齐。

下面色黄带红或棕黄。

背面棕红色、ＩV、V镜检均见大量棒状大分生孢子及无数圆形得小分生孢子,少数长型、游离或葡萄状成串,有螺旋菌丝与球拍菌丝、

①菌落形态;

②菌丝较细,就是皮肤癣菌中最细得一种;

③螺旋菌丝多见;

④大分生孢子得形态与球形小分生孢子;

⑤尿素酶阳性;

⑥毛发穿孔阳性。

＊紫色毛癣菌

皮屑、甲屑内可见分枝分隔得菌丝或成串得孢子,病发取黑点部位得断发,毛发损害为发内型大孢子,呈关节型排列,充满整个发内,故毛发出皮即断。

（2）培养特性:

在沙氏琼脂培养基室温培养菌落生长慢,开始为圆形、白色、潮湿发亮得菌落,类似酵母;

以后中央褶叠或突起,产生紫色色素,并逐渐扩大,或中央紫色,边缘淡红色,最外围有一圈白色得环、培养基颜色不变,边缘无放射状菌丝,整齐如刀切,下沉不明显,背面无色至深紫色,少数菌株无颜色,呈无色紫色毛癣菌,镜检见粗细不一得菌丝,分隔较密,胞浆淡,有很多不规则得突起与肿胀,但无鹿角菌丝、厚壁孢子多,多为间生,偶见小分生孢子2~５个大生分生孢子。

（３）菌种鉴定:

①菌落形态,紫色色素;

②VitＢ能促进菌落生长,形成大分生孢子;

③发内型感染、

小孢子菌属

＊羊毛状小孢子菌

（１）　直接镜检:

皮屑内见分枝、分隔得菌丝,病发为发外型感染。

在沙氏琼脂培养基上室温生长快。

开始为黄色绒毛样生长,2周后菌丝较多,呈羊毛状,可充满大部分斜面、中央趋向粉未化、正面桔黄,背面红棕色,平皿中培养得菌落表面中央可有少数同心园,无放射状沟纹。

生长约4-５周后开始变异,菌丝增多,大分生孢子减少或消失。

镜检见大量纺锤形,厚壁得大分生孢子。

一端稍弯曲,末端有帽样肥大,有6-15个分隔。

小分生孢子较少,长形,无柄侧生。

可有球拍状菌丝,破梳状菌丝,结节菌丝及大量厚壁孢子等、

（3）菌种鉴定:

①菌落形态及色素,在PDＡ培养基上能产生黄色色素;

②特征性得厚壁、顶端膨大微弯曲,如戴帽得大分生孢子;

③发外孢子型感染。

＊石膏样小孢子菌

皮屑内见菌丝或成串得孢子,病发为发外型感染,孢子较大,排列成串、

在沙氏琼脂培养基上室温生长快,开始为白色菌丝,后成棕黄色粉未状菌落,凝结成片,菌落中心有隆起,外围有少数极短得沟纹,边缘不整齐,背面红棕色。

镜检:

见多数较小,纺锤形,４～6个得大分生孢子,壁厚1～3μｍ,两端园,壁有刺,菌丝较少,小分生孢子棒状无柄,有时可见球拍状菌丝,螺旋,破梳状菌丝及结节菌丝、

②大分生孢子得形态;

③毛发穿孔试验阳性、

3。

表皮癣菌属

*絮状表皮癣菌

皮屑及甲屑内见分枝分隔得菌丝。

在沙氏培养基室温生长快。

菌落开始蜡状,高出斜面,表面有不规则得褶叠,上覆粉未样菌丝,黄绿色。

较大得菌落中央有褶叠,外围可见放射状沟纹,最外围有不整齐得平滑圈、菌落下沉明显,培养基常为之开裂。

背面黄至棕色。

见典型得杵状大分生孢子,2~４个分隔。

游离端圆形,薄壁光滑,基部平截。

常2～4个成群,无小分生孢子,老龄菌落厚壁孢子多,菌丝较细,分枝,分隔,间或可见球拍,结节与螺旋菌丝、

①菌落特征;

②典型杵状大分生孢子;

③无小分生孢子。

二、深部真菌

（一）白念珠菌:

（Candida　aｌbicaｎs）

1.标本来源痰、大便、口腔或阴道分泌物、尿、脑脊液、胸水、脓液、皮屑及痂皮等、

2.直接镜检　氢氧化钾涂片,可见卵圆形、圆形芽孢,薄壁,直径约2~4μm芽孢,椭圆形芽孢得芽管延长形成假菌丝,有时在菌丝旁附着芽孢,PＡS染色为红色。

培养及镜检

（１）葡萄糖蛋白胨琼脂:

3０℃划线培养一天即有光滑小菌落生长,菌落为奶油色,闪光或呈蜡状,柔软光滑,老得菌落渐变硬,表面有皱褶或有毛发状突起。

镜检,在菌丝交接处有群集得卵圆形孢子或在菌丝旁侧有少许芽孢,３。

0～６.5×

3、5～１2。

5μm、

（2）玉米培养基:

菌落外观同上,镜检:

菌丝很少分枝,有少量芽生孢子,在菌丝得顶端或侧缘有厚壁孢子,直径7~1７μｍ、

（3）快速鉴定与鉴定程序:

①将标本直接接种在科玛嘉上,24小时出现翠绿色菌落,②将初代分离得酵母样菌接种在含1%吐温８０米粉中,２5℃室温中２4~48小时,镜检可见顶端产生圆形厚壁孢子或接种于0。

５ml,正常人血清或羊血清中,置37℃温箱中,经1～2小时镜检有芽生孢子及芽管形成,可初步鉴定为白念珠菌、③APＩ酵母快速鉴定:

同化试验结果:

葡萄糖+,麦芽糖＋,乳糖-,半乳糖＋。

（二）热带念珠菌（CanｄｉdaTropicalｉｓ）

1.标本来源:

同白念珠菌、

2.直接镜检:

同白念珠菌。

３.培养及镜检:

（1）葡萄糖蛋白胨琼脂,在２5℃中培养,菌落平滑有光泽,白色,时间较久表面有皱纹,粘稠,甚至有毛样外观,镜检可见卵圆形细胞或球形细胞（约5～９μm×

６～12μm）。

（2）玉米琼脂:

产生丰富得假菌丝及发育良好芽生孢子,但无厚壁孢子生长。

（3）快速鉴定:

①科玛嘉培养基上,24小时出现蓝灰色。

②同化试验。

（三）克柔氏念珠菌（CandidaKｒｕsei）

⒈标本来源:

⒉直接镜检:

⒊培养及镜检:

⑴葡萄糖蛋白胨琼脂:

菌落扁平,平滑、干燥,有时表面有皱折,通常就是乳白色到淡黄,镜检所见:

大多数孢子就是较大得柱状,2、5～5.5μm×

7.5～21.５μｍ,亦有少数短卵圆形孢子。

假菌丝丰富,芽生孢子在菌丝上轮生。

⑵玉米琼脂:

对称分枝得菌丝,芽生孢子较少,无厚壁孢子。

⑶葡萄糖蛋白胨液培养基:

在培养基表面生长,与试管壁粘连。

⑷快速鉴定:

①科玛嘉培养基上24小时出现淡粉红色菌落、②同化试验。

（四）近平滑念珠菌（Canｄidapａrapsiｌosis）

乳酪样菌落,通常表面光滑,亦有菌落表面粗糙及皱折、镜检所见:

卵圆形芽生孢子2.5～5、0×

4~８μm,假菌丝形成丰富、

交叉分枝菌丝,侧生芽生孢子较多,无厚壁孢子。

⑶葡萄糖蛋白胨液基:

无表面生长,在管底生长。

①科玛嘉培养上2４小时出现粉色光滑菌落、②同化试验:

APＩ、

（五）光滑念珠菌（Candｉdａgｌａｂrata）

痰、尿、血、皮肤、阴道、伤口、腹水、胸水、胆汁等。

卵圆形芽生孢子,直径2~７μm或更大,单芽,位于孢子得细端,无荚膜,无子囊或菌丝、

⑴葡萄糖蛋白胨琼:

白色或奶油色乳酪样菌落,日久变棕灰色,表面平滑,稍有光泽,本菌只在酸性条件下生长,ｐH&

gt;

6。

5即不生长,镜检:

同直接涂片。

⑵快速鉴定:

①科玛嘉培养基上２４小时出现紫色菌落。

　②同化:

APＩ试验、

（六）胶红酵母（Rhodotoruｌａmucilaginosa）

痰、尿、血、大便、皮肤、CSＦ、咽喉、体液等。

圆形或卵圆形,3～5μm直径,有荚膜得芽生孢子,单芽生,孢子内有少数颗粒,无菌丝,不着色。

25℃或37℃时,生长迅速,菌落１0天内可达2~２。

5cm直径,为乳酪样生长,边缘整齐,表面光滑,但无光泽,桔红,日久颜色逐渐消退,呈淡黄色或桔黄色,培养基不变色,镜检同涂片所见,有时可见假菌丝,无子囊。

　①菌落产生红色色素;

②使尿素琼脂由黄变红。

（七）新生隐球菌（Ｃryptococｃus　neｏformans）

脑脊液、痰、脓、尿、粪、血、活体组织及尸体解剖材料等。

墨汁染色,可见圆形厚壁孢子,菌体直径约4～20μｍ,外围有一透光得厚荚膜,厚度约5~7μm,荚膜内得菌体可出芽或不出芽,孢内有一较大得反光颗粒（脂质颗粒,不就是孢核）与许多小颗粒,可与白细胞或淋巴细胞相鉴别。

⑴在葡萄蛋白胨琼脂,2５℃或37℃培养时,2~5天即生长出乳白色细菌粘液性菌落,呈不规则圆形,表面有蜡样光泽,以后菌落增厚,颜色由乳白、奶油转桔黄色。

非致病性隐球菌３7℃不生长、镜检类似直接镜检,可见圆形孢子,直径2。

５～８μｍ,多数有芽,孢子外围有荚膜,但荚膜开始甚狭,日久渐增厚,无真菌丝及子囊孢子,但可有芽管、

①3７℃生长;

②尿素酶变红;

③咖啡酸变棕色;

④同化试验,不发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖等。

三、其它实验室常见得丝状真菌

（一）曲霉属:

皮屑,甲屑,耵聍,痰,粪,尿,脓液,活检与尸检组织标本、

涂片见分枝,分隔得菌丝及足细胞,与外界相通腔道内标本中有时可见分生孢子头,为曲霉得特征结构。

⒊培养:

初代用沙氏培养基,次代用察氏PDＡ培养基,接种后室温培养2周、少数能产生闭囊壳得曲霉需培养3周或更长时间。

⒋菌种鉴定:

（1）菌落,菌落生长速度,表面质地,颜色,形态与气味等,其中颜色得特征较稳定,就是曲霉分类得主要依据之一;

（２）分生孢子头:

分生孢子头得形态,颜色与大小。

分生孢子头由顶囊、瓶梗、梗基与分生孢子链组成,就是曲霉得特征性结构。

（３）分生孢子梗或分生孢子柄,注意它得长短,颜色,表面粗糙或光滑,就是否有隔等、（４）分生孢子梗上得顶囊,注意顶囊得大小,形态,颜色,梗占据顶囊表面积得大小等、（5）瓶梗及梗基:

统称小梗,注意单层还就是双层,有些既有单层又有双层,甚至同一顶囊上也两者兼有、（６）分生孢子:

形态,大小,颜色,表面就是否光滑及有无纹饰、（7）具有性生殖得曲霉能产生闭囊壳、（8）部分曲霉能产生壳细胞,足细胞。

（9）有些能产生菌核。

致病得曲霉有烟曲霉,黄曲霉,黑曲霉,土曲霉,构巢曲霉,棒曲霉,杂色曲霉,米曲霉等等。

（二）青霉属:

皮屑,甲屑,耵聍,痰,粪,尿,脓液,活检与尸检组织标本。

可见分枝、分隔得菌丝,无顶囊,偶可发现帚状枝。

初代培养用沙氏培养基,次代培养用察氏或麦芽汁培养基。

（１）菌落特征:

菌落形态包括生长速度、菌丝高度、颜色、渗出物、气味与质地。

质地包括①绒状②絮状③束状、

（２）菌丝得粗细、颜色、埋伏型,部分埋伏型或部分气生型。

（３）分生孢子梗分枝或不分枝,就是自气生菌丝亦成从埋伏菌丝上长出。

单根或成束,壁光滑或粗糙。

（4）帚状枝:

为青霉属得特征性结构,指分生孢子梗分枝处毛瓶梗得整个扫帚状结构。

不包括分生孢子。

帚状枝得形状有４种:

①单轮青霉组;

②对称双轮青霉组;

③不对称组;

④对称多轮组。

（５）瓶梗:

帚状枝得最后一级分枝即产孢细胞,大致分3种类型:

①柱形;

②披针形;

③瓶形。

（6）副枝:

支持梗基得细胞称副枝,可有一个或一个以上。

（7）分生孢子:

大小、颜色、形状、表面就是否光滑或粗糙。

（８）菌核:

闭囊壳、

⒌致病青霉有:

产黄青霉、桔青霉、淡紫青霉、灰绿青霉、马尔尼菲青霉等。

小结

真菌特征就是具有真正得细胞核,产生孢子与不含叶绿素,以寄生或腐生等方式吸取养料;

不同病原菌可通过培养、镜检、菌种鉴定上各有不同特征,可以进行分离与鉴定。