微生物作业及答案Word格式.docx

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A厌氧试验 

B灭菌试验 

C曲颈瓶试验 

D菌种分离试验

8．柯赫提出了证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则——（ 

A巴斯德原则 

B柯赫原则 

C菌种原则 

D免疫原理

9．微生物基因组序列分析表明，在某些微生物中存在一些与人类某些遗传疾病相类似的基因，因此可以利用这些微生物作为（ 

）来研究这些基因的功能，为认识庞大的人类基因组及其功能做出重要贡献。

A模式生物 

B受体 

C供体 

D突变材料

10．我国学者汤飞凡教授的（ 

）分离和确证的研究成果，是一项具有国际领先水平的开创性成果。

A鼠疫杆菌 

B沙眼病原体 

C结核杆菌 

D天花病毒

习题解答

1． 

C 

2． 

D 

3． 

4． 

5． 

A 

6． 

7． 

8． 

B 

9． 

10． 

B

第二章微生物的纯培养和显微镜技术

一、术语或名词

1．菌落（c010ny） 

单个微生物细胞在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到——定程度形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。

2．菌苔（lawn） 

固体培养基表面众多菌落连成一片时所形成的微生物生长群体。

3．平皿（Petridish） 

由玻璃或透明塑料制成的圆形皿底和皿盖组成，皿盖可覆盖于皿底之 

上，防止空气中微生物的污染。

其英文名称是为纪念其发明者RichardPetri。

4．纯培养物（pureculture） 

由一种微生物组成的细胞群体，通常是由一个单细胞生长、繁殖所形成。

5．培养基（culturemedium） 

供微生物生长、繁殖的营养基质，根据其中固化剂含量的不同可分为固体、半固体、液体3种。

6．无菌技术（aseptictechnique） 

在分离、转接及培养纯种微生物时，防止其被环境中微生物污染或其自身污染环境的技术。

7．培养平板（cultureplate） 

常简称为平板，指固体培养基倒人无菌平皿，冷却凝固后所形成的培养基平面。

8．稀释倒平板法（pourplatemethod） 

将待分离的材料稀释后与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后制成可能含菌的培养平板，保温培养后分离得到的微生物菌落生长在固体培养基表面和里面。

9．涂布平板法（spreadplatemethod） 

在培养平板表面均匀涂布经过稀释的微生物悬液后，保温培养，在固体培养基表面得到生长分离的微生物菌落。

10．平板划线法（streakplatemethod） 

用接种环在培养平板表面划线接种微生物，使微生物细胞数量随着划线次数的增加而减少，并逐步分开。

保温培养后，在固体培养基表面得到生长分离的微生物菌落。

11．稀释摇管法（dilutionshakeculturemethod） 

将待分离的材料稀释后与已熔化并冷却至50~C左右的琼脂培养基混合，摇匀后用石蜡封盖，保温培养后分离得到的微生物菌落生长在琼脂柱中间。

12．单细胞分离法（singlecellpickupmethod） 

采用显微操作技术直接挑取微生物的单细胞（孢子），培养后获得纯培养物。

13．富集培养（enrichmentculture） 

利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，从自然界中分离到所需的特定微生物。

14．二元培养物（two—componentculture） 

由两种具有特定关系（例如寄生或捕食）的微生 

物组成的混合培养物。

15．原子力显微镜（atomicforcemicroscope） 

扫描探针显微镜的一种，利用细小的探针对样品表面进行恒定高度的扫描，同时通过一个激光装置来监测探针随样品表面的升降变化来获取样品表面形貌的信息。

16．明视野显微镜（bright—fieldmicroscope） 

这种显微镜的照明方式为透射照明，即光线直接进入视野，在一个相对明亮的背景中形成一个暗的物像。

17．聚焦扫描激光显微镜（confocalscanninglasermicroscope，CSLM） 

这种显微镜采用激光作为光源，每次仅对一个点进行照射，从而大大减少样品其他部分发出的杂散光的干扰。

观察时通过激光器或载物台扫描，计算机处理，最终获得反差鲜明、高分辨率的三维立体数字图像。

18．荧光显微镜（fluorescencemicroscope） 

这种显微镜用紫外线或蓝紫光照射经过荧光染料染色的样品，然后观察激发出的荧光所形成的物像。

19．数值孔径（numericalaperture） 

决定显微镜物镜分辨率性能物理指标，取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率。

20．相差显微镜（phase—contrastmicroscope） 

这种光学显微镜通过特殊的装置把样品不同部位间折射率和细胞密度的微弱差异转变为人眼可以察觉的明暗差，可在不染色的情况下对透明的活细胞及其内部结构进行直接观察。

21．分辨率（resolution） 

能辨析两点之间最小距离的能力，距离越小，分辨率越高。

22．扫描电子显微镜（scanningelectronmicroscope，SEM） 

这种电子显微镜用电子束扫描样品表面，收集从表面发出的二次电子形成样品的表面图像。

23．扫描探针显微镜（scanningprobemicroscope） 

通过在物体表面移动一种敏锐的探针来研究表面特征的显微镜（如扫描隧道显微镜）。

24．扫描隧道显微镜（scanningtunnelingmicroscope） 

扫描探针显微镜的一种，用细小的探针在样品表面进行扫描，通过检测针尖和样品间隧道效应电流的变化形成物像。

25．透射电子显微镜（transmissionelectronmicroscope） 

这种显微镜用电子束透射样品，用磁透镜使散射的电子聚焦成像。

26．反差（contrast） 

被观察物区别于背景的程度。

27．暗视野显微镜（dark—fieldmicroscope） 

这种显微镜利用特殊的聚光器进行斜射照明，经样品反射或折射的光线进入物镜成像。

28．固定（fixation） 

制样过程中使整个机体及其细胞的内、外结构被保存并固定在适当位置的过程。

29．负染色（negativestaining） 

染料使背景颜色加深而样品没有着色的染色法。

30．菌丝体（mycelium） 

聚成一团的分支菌丝，见于真菌和某些细菌。

31．菌丝（hypha） 

大多数霉菌和某些细菌的结构单位，管形丝状体。

32．双球菌（diplococcus） 

分裂后成对排列的球菌。

33．球菌（COCCUS） 

细胞大致呈球状的细菌。

34．螺菌（spirillum） 

刚性的螺旋状细菌。

35．螺旋体（spirochete） 

柔韧的螺旋状细菌，具有周质鞭毛。

36．杆菌（rod） 

细胞呈杆状的细菌。

37．柄细菌（prosthecatebacteria） 

细胞上有柄、菌丝、附器等细胞质伸出物，细胞呈杆状或梭状，并有特征性细柄的细菌。

38．霉菌（mold） 

以多细胞丝状群体形式生存的真菌。

39．真菌（fungi） 

有线粒体，无叶绿体，没有根、茎、叶分化，以无性和有性孢子进行繁殖的真核微生物。

40．酵母菌（yeast） 

单细胞真菌。

41．藻类（algae） 

能进行光合作用的真核微生物。

42．原生动物（prokaryote） 

缺少真正细胞壁，具有运动能力，进行吞噬营养的单细胞真核微生物。

二、习 

题

填空题

1．动植物的研究能以 

体为单位进行，而对微生物的研究一般用体。

2．在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物，其中只有 

3．一般情况下，培养微生物的器具，在使用前必须先行 

，使容器中不含 

4．用培养平板进行微生物纯培养分离的方法包括：

、 

和 

。

5．微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行 

的重要依据。

6．微生物保藏的目标就是要使所保藏菌株在一段时间不 

、不 

和不 

7．一般说来，采用冷冻法时，保藏温度越 

，保藏效果越 

8, 

是影响显微镜观察效果的3个重要因素。

9．光学显微镜能达到的最大有效放大倍数是 

，这时一般使用 

X的目镜，和 

x的物镜，并应在物镜镜头和玻片之间加 

10．采用明视野显微镜观察未经染色的标本（如活的细胞）时， 

光的 

都没有明显的变化，因此，其形态和内部结构往往难以分辨。

11．在 

的照射下，发荧光的物体会在黑暗的背景下表现为光亮的有色物体，这就是荧光显微技术的原理。

12．透射电子显微镜用电子作为 

，因此其分辨率较光学显微镜有很大提高，但镜筒必须是 

环境，形成的影像也只能通过 

或 

进行观察、记录。

13．在显微镜下不同细菌的形态可以说是千差万别，丰富多彩，但就单个有机体而言，其基本形态可分为 

与 

3种。

14．霉菌菌体均由分支或不分支的菌丝构成。

许多菌丝交织在一起，称为 

在固体培养基上，部分菌丝伸入培养基内吸收养料，称为 

；

另一部分则向空中生长，称为 

有的气生菌丝发育到一定阶段，分化成 

15． 

是一类缺少真正细胞壁，细胞通常无色，具有运动能力，并进行吞噬营养的单细胞真核生物。

它们个体微小，大多数都需要显微镜才能看见。

选择题（4个答案选1）

1．培养微生物的常用器具中，（ 

）是专为培养微生物设计的。

A平皿 

B试管 

C烧瓶 

D烧杯

2．（ 

）可用来分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。

A选择平板 

B富集培养 

C稀释涂布 

D单细胞显微分离

3．下面哪一项不属于稀释倒平板法的缺点?

（ 

）

A菌落有时分布不够均匀B热敏感菌易被烫死 

C严格好氧菌因被固定在培养基中生长受到影响D环境温度低时不易操作

4．下面哪一种方法一般不被用作传代保藏?

A琼脂斜面 

B半固体琼脂柱 

C培养平板 

D摇瓶发酵

5．冷冻真空干燥法可以长期保藏微生物的原因是微生物处于（ 

）的环境，代谢水平大大降低。

A干燥、缺氧、寡营养 

B低温、干燥、缺氧 

C低温、缺氧、寡营养 

D低温、干燥、寡营养

6．对光学显微镜观察效果影响最大的是（ 

A目镜 

B物镜 

C聚光器 

D总放大倍数

7．暗视野显微镜和明视野显微镜的区别在于（ 

A目镜 

D样品制备

8．相差显微镜使人们能在不染色的情况下，比较清楚地观察到在普通光学显微镜和暗视野显微镜下都看不到或看不清的活细胞及细胞内的某些细微结构，是因为它改变了样品不同部位间光的（ 

），使人眼可以察觉。

A波长 

B颜色 

C相位 

D振幅

9．（ 

）不是鉴别染色。

A抗酸性染色 

B革兰氏染色 

C活菌染色 

D芽孢染色

10．细菌的下列哪项特性一般不用作对细菌进行分类、鉴定?

A球菌的直径 

B球菌的分裂及排列 

C杆菌的直径 

D杆菌的分裂及排列

是非题

1．为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，并在使用前进行高温干热灭菌。

2，所有的微生物都能在固体培养基上生长，因此，用固体培养基分离微生物的纯培养是最重要的微生物学实验技术。

3．所有的培养基都是选择性培养基。

4．直接挑取在平板上形成的单菌落就可以获得微生物的纯培养。

5．用稀释摇管法分离获得的微生物均为厌氧微生物。

6．冷冻真空干燥保藏、液氮保藏法是目前使用最普遍、最重要的微生物保藏方法，大多数专业的菌种保藏机构均采用这两种方法作为主要的微生物保存手段。

7．光学显微镜的分辨率与介质折射率有关，由于香柏油的介质折射率（约1．5）高于空气（1．0）， 

因此，使用油镜的观察效果好于高倍镜，目前科学家正在寻找折射率比香柏油更高的介质以进一步改善光学显微镜的观察效果。

8．与其他电子显微镜相比，扫描隧道显微镜在技术上的最大突破是能对活样品进行观察。

9．与光学显微镜相比，电子显微镜的分辨率虽然有很大的提高，但却无法拍摄彩色照片。

10．和动植物一样，细菌细胞也会经历由小长大的过程，因此，在相同情况下应选择成熟的细菌而非幼龄细菌进行显微镜观察，这样可以看得更清楚。

11．霉菌、酵母菌均是没有分类学意义的普通名称。

问答题

1．一般说来，严格的无菌操作是一切微生物工作的基本要求，但在分离与培养极端嗜盐菌时常在没有点酒精灯的普通实验台上倾倒培养平板、在日常环境中直接打开皿盖观察和挑取菌落，而其研究结果并没有因此受到影响，你知道这是为什么吗?

2．如果希望从环境中分离得到厌氧固氮菌，你该如何设计实验?

3．为什么光学显微镜的目镜通常都是15X?

是否可以采用更大放大倍率的目镜（如30x）来进 

一步提高显微镜的总放大倍数?

4．为什么透射电镜和扫描电镜对样品厚度与大小的要求有如此大的差异?

能否用扫描电镜来观察样品的内部结构，而用透射电镜来观察样品的表面结构?

5．试论电子显微镜在进行生物样品制备与观察时应注意的问题。

6．对细菌的细胞形态进行观察和描述时应注意哪些方面?

你是否能很快地在显微镜下区分同为单细胞的细菌、酵母菌和原生动物?

三、习题解答

填空题 

1．个 

群 

2．纯 

3。

灭菌 

任何生物 

4．稀释倒平板法 

涂布平板法 

平板划线法 

5．分类 

鉴定 

6．死亡 

污染 

变异 

7．低（高） 

好（差） 

8．放大 

反差 

分辨率 

9．1000～1500x 

10或15 

90或100 

香柏油 

10．’波长 

振幅 

11．紫外线 

12．光源 

真空 

荧光屏 

照片 

13．球状 

杆状 

螺旋状 

14．菌丝体 

营养菌丝 

气生菌丝 

繁殖菌丝 

15．原生动物

选择题 

D

是非题 

错错对错错对错对对错对

1．培养极端嗜盐菌的培养平板需要添加很高浓度的氯化钠（25％），实验室环境中的一般微生物都不能在这种选择培养基上生长，因此在实验过程中即使不采取无菌操作技术，实验结果仍不会受到影响。

2．

（1）根据选择分离的原理设计不含氮的培养基，在这种培养基上生长的细菌，其氮素应来自固氮作用。

（2）将环境样品（例如土样）稀释涂布到选择平板上，放置于厌氧罐中。

对厌氧罐采用物理、化学方法除去氧气，保留氮气。

培养后在乎板上生长出来的细菌应是厌氧固氮菌或兼性厌氧固氮菌。

（3）挑取一定数量的菌落，对应点种到两块缺氮的选择平板上，分别放置于厌氧罐内、外保温培养。

在厌氧罐内外均能生长的为兼性厌氧固氮菌，而在厌氧罐外的平板上不生长，在厌氧罐内的平板上生长的即为可能的厌氧固氮菌。

（4）对分离得到的厌氧固氮菌菌落样品进行系列稀释，涂布于相应的选择平板，重复上述步骤直到获得厌氧固氮菌的纯培养。

3．光学显微镜的分辨率受到光源波长及物镜性能的限制，在使用最短波长的可见光（4．50nnl）作为光源时在油镜下可以达到的最大分辨率为0．18μm。

由于肉眼的正常分辨能力一般为 

0．25mm左右，因此光学显微镜有效的最高总放大倍数只能达到1000～1500倍。

油镜的放大倍数是100x，因此显微镜配置的目镜通常都是15x，选用更大放大倍数的目镜（如30x）进一步提高显微镜的放大能力对观察效果的改善并无帮助。

4．

（1）透射电子显微镜的成像原理类似于普通光学显微镜，作为光源的电子束在成像时要穿透样品。

由于电子束的穿透力有限，因此在进行透射电镜观察时要求样品一定要薄。

而扫描电镜的成像原理类似于电视或电传真照片，图像是通过收集样品表面被激发的二次电子形成的，因此对样品的厚度并无特别的要求。

（2）扫描电镜一般被用于观察样品的表面结构，但通过样品制备过程中的冰冻蚀刻技术，用扫描电镜也可观察到样品的内部结构，获得立体的图像。

（3）透射电镜一般通过超薄切片技术观察样品的内部结构，但通过样品制备过程中的复型技术，用透射电镜也可对样品的表面结构进行观察。

5．

（1）电子束的穿透能力：

电子束的穿透能力是十分有限的，超薄切片是基本的透射电镜实验技术。

相比之下，扫描电镜对样品的大小和厚度没有严格的要求。

（2）生物组织的特点：

生物组织的主要成分之一是水，若生物样品不经处理直接放进电镜，镜筒中的高真空必然会使样品发生严重的脱水现象，失去样品原有的空间构型，所以一般都不能用电镜进行生物样品的活体观察。

而且，由于生物样品很容易遭到破坏，在对样品进行固定、干燥、染色及其他一些处理过程中，也必须随时注意使样品尽量保持生活状态下的精细结构，而不严重失真。

另外，在扫描电镜的使用中，除要求样品干燥外，还需要样品具一定的导电能力，以减少样品表面电荷的堆积并得到良好的二次电子信号。

而生物样品一般都是不导电的，所以在制备扫描电镜生物样品时，一般需在其表面镀上一层金属薄膜。

（3）增加样品的反差：

显微观察时，只有样品具有一定的反差，才能得到清晰的图像。

光学显微镜可以通过各种染色技术来增加样品的反差，并得到彩色的样品图像。

而在电镜的使用中，彩色染料是不采用的，因为两种不同的颜色在电镜中是不能区别的。

电镜中生物样品不同结构之间反差的取得一般是用重金属盐染色或喷镀，凡是嗜金属的结构，对电子的散射与吸收的能力增强，易于形成明暗清晰的电子图像。

而且，由于电子图像是靠不同电子密度形成的亮度差异而构成，所以，电镜得到的电视或照相图像都是黑白的。

6．

（1）首先应使用稀释涂布等方法对待检菌株的纯度、群落形态、生理特性等进行检查、确认。

（2）选用正常的新鲜培养基和新鲜培养物进行培养和观察，避免培养过程中一些物理、化学条件的改变或培养时间过长等因素对细胞形态的影响。

（3）报告细胞大小时应选用多个细胞检测的平均数，并记录所用的实验方法，包括培养条件、培养时间、样品制备方法和染色方法等。

（4）可从大小和形态上对细菌、酵母菌和原生动物进行区分。

酵母菌、原生动物个体较大，一般可用低倍镜观察，酵母菌细胞一般呈卵圆形、圆形、圆柱形或柠檬形，不具运动性，原生动物细胞形态多变，能够运动。

相比较而言，细菌细胞一般较小，需用高倍镜或油镜才能看清。

附：

显微镜种类比较

显微镜类型

基本原理及特点

应 

用

光学显

微镜

明视野显微镜

光线透射照明，物像处于亮背景中。

为光学显

微镜的最基本配置，价格便宜、容易使用

各种情况下染色样品或活细胞个体形态的观察

暗视野显微镜

通过特殊的聚光器实现斜射照明，亮物像形成于暗背景中

明视野显微镜下不易看清的活细胞的观察；

不易被染色或易被染色过程破坏的细胞的观察（例如对梅毒密螺旋体的检测）；

观察活细胞的运动性

相差显微镜

通过特殊的聚光器和物镜提高样品不同部位间的反差（明暗差异）

活细胞及其内部结构的观察

荧光显微镜

经荧光染料染色或荧光抗体处理的样品在紫外线照射下激发出各种波长的可见光，在黑暗

的背景中形成明亮的彩色物像

环境微生物的直接观察；

病灶或医学样品中特定病原微生物的直接检测（使用特定的荧光抗体）

共聚焦显微镜

激光作为光源，每次照明样品的一个点，连续

扫描后经计算机处理获得样品的二维或三维

图像。

显微镜价格昂贵

对完整细胞的细微立体结构进行观察

和分析

电子显微镜

透射电镜

用电子束作为“光源”聚焦成像，分辨率较光学显微镜大大提高。

仪器庞大、昂贵、对工作环境和操作技术有较高要求

对病毒颗粒或超薄片处理后对细胞

的内部结构进行观察

扫描电镜

电子束在样品表面扫描，收集形成的二次电子形成物像。

分辨率远高于光学显微镜。

一般用于观察样品的表面立体结构

探针扫描显微镜

隧道扫描显微镜

用细小的探针在样品表面进行扫描，通过检测针尖和样品间隧道效应电流的变化形成物像

与电子显微镜相比，这类显微镜能提供

原子力显微镜

利用细小的探针对样品表面进行恒定高度的扫描，同时通过一个激光装置来监测探针随样品表面的升降变化来获取样品表面形貌的

信息

更高的分辨率，可在生理状态下对生物大分子或细胞结构进行观察。

同时仪器体积较小，价格也相对便宜

项 

目

形 

态

构 

造

数 

量

功 

能

内质网

囊腔，细管形

有膜。

分两种：

糙面内质网的膜上有核糖体粒，光面内质网的膜上无核糖体粒

数量少

糙面内质网合成、运送蛋白质，光面内质网合成磷脂

核糖体

小颗粒状

无膜。

表层为蛋白质，内芯为RNA

数量极多，变化大

合成蛋白质

高尔基体

扁平膜囊和小囊泡

由数个扁平膜囊和大小不等

的囊泡组成

浓缩蛋白质，合成糖蛋白和脂蛋白，协调细胞内环境

溶酶体

球形小·

囊泡

小囊泡内含数十种酸性水解酶

数量较多，但变化大

执行细胞内的消化功能

微体