蔬菜中维生素c的测定Word格式.docx
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●3、改善铁、钙和叶酸的利用。
●4、改善脂肪和类脂特别是胆固醇的代谢,预防心血管病。
●5、促进牙齿和骨骼的生长,防止牙床出血,防止关节痛、腰腿痛。
●6、增强肌体对外界环境的抗应激能力和免疫力。
●7、水溶性强抗氧化剂,主要作用在体内水溶液中。
二、实验目的
●1.人类营养中最重要的维生素之一。
缺乏时引起坏血病。
●2.维生素C含量可作为植物抗衰老和抗逆境的重要生理指标,也可作为果品质量、选育良种的鉴别指标。
●3.水果、蔬菜保鲜贮藏必须测定维生素C含量,了解果蔬品质量的高低。
●4.了解和掌握2,6-二氯酚靛酚测定维生素C含量的原理和方法。
三、实验原理
●2,6—二氯靛酚是一种染料,其颜色反应表现为两种特性。
一是取决于氧化还原状态,氧化态为深蓝色,还原态为无色;
二是受其介质酸度的影响,在碱性介质中呈深蓝色,在酸性溶液介质中呈浅红色。
●用蓝色的碱性染料标准液,滴定含VC的酸性浸出液,染料被还原为无色,到达终点时,微过量的2、6—二氯靛酚染料在酸性溶液中呈浅红色即为终点。
从染料消耗量即可计算出试样中还原型抗坏血酸量。
2.6-二氯酚靛酚滴定法
●维生素C:
强的还原性
●将染料2.6-D还原成无色的2.6-二氯酚靛酚
●2.6-二氯酚靛酚:
强的氧化性
●中性/碱性:
蓝色酸性:
红色
●氧化型2.6-二氯酚靛酚(红色)
●氧化型2.6-二氯酚靛酚(蓝色)
●还原型2.6-二氯酚靛酚(无色)
四、不同的测定方法、
●目前研究维生素C测定方法的报道较多,有关维生素C的测定方法。
●荧光法。
●2,6-二氯靛酚滴定法。
●2,4-二硝基苯肼法。
●分光光度分析法。
●碘量法。
荧光法
●原理
:
●样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后,与邻苯二胺反应生成具有荧光的喹喔啉,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
●脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与邻苯二胺反应,以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。
本方法的最小检出限为0.022
g/ml。
●本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。
2,4-二硝基苯肼法
●总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸。
样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸,再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎,脎的含量与总抗坏血酸含量成正比,进行比色测定。
碘量法
●原理:
●维生素C包括氧化型、还原型和二酮古乐糖酸三种。
当用碘滴定维生素C时,所滴定的碘被维生素C还原为碘离子。
随着滴定过程中维生素C全被氧化,所滴入的碘将以碘分子形式出现。
碘分子可以使含指示剂(淀粉)的溶液产生蓝色,即为滴定终点。
●由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性,能被碘氧化,用碘滴定VC。
分光光度分析法
●原理:
●维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸。
●通过吸收光谱曲线法确定维生素C的水溶液的最大吸收波长为267nm,进而通过工作曲线法快速测定蔬菜水果中维生素C的含量。
●本方法与常规方法比较,具有准确、快速、稳定、试剂易得等优点。
五、仪器试剂与样品
●新鲜生菜
●滴定管、三角瓶、研钵、量筒、移液管离心机
●20g/L草酸溶液:
称取20g草酸,加水至1000mL。
●60g/L碘化钾溶液。
●0.001mol/L
KIO3标准溶液。
●2,6-二氯酚靛酚溶液。
●1mg/ml抗坏血酸标准溶液。
六、实验步骤
●2,6-二氯酚靛酚标准液的标定
●吸取1mg/ml抗坏血酸溶液1ml置于锥形瓶中,加10ml20g/L草酸,摇匀,用2,6-二氯酚靛酚滴定至溶液呈淡红色。
在15s不消失为终点。
计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸(取10ml20g/L草酸作空白对照)计算滴定度T:
维生素C的提取和测定
●1、称取10g新鲜生菜样品,置研钵中,分次加20ml20g/L草酸,研成匀浆,用的20g/L草酸定容100ml。
通过纱布过滤后取10ml放于离心机中3000r/min离心10min,吸取上清使用。
●2、吸取滤液10ml,放入50ml三角瓶中,立即用已标定的2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至出现明显的粉红色在15s内不消失为止。
记录所用滴定液体积。
另取10ml20g/L草酸作空白对照实验。
七、结果计算
●V1---滴定空白所用染料溶液的体积,ml
●V2---滴定样品所用染料溶液的体积,ml
●T---2,6-二氯酚靛染料溶液的滴定度,mg/ml
●M---样品的质量,g
2,6—二氯靛酚溶液的标定
样品中维生素C含量的测定
●V----吸取维生素C标准溶液的体积,ml
八、注意事项
●1、本法测定的结果为食品中的还原型抗坏血酸含量,而非维生素C总量。
此法是测定还原型抗坏血酸最简便的方法,适合于大批果蔬,但对红色果蔬不太适宜。
●2、维生素C在酸性条件下较稳定,故样品处理或浸提都应在弱酸性环境中进行。
浸提剂以偏磷酸
(HPO3)
稳定维生素C效果最好,但价格较贵。
一般可采用草酸
(20g/L)代替偏磷酸,价廉且效果也较好。
●3、Vc不稳定,在空气中易被氧化,研磨时,尽可能要快,以减少Vc的氧化。
●4、样品处理过程中加入等量的2%草酸,目的是抑制抗坏血酸氧化酶,避免维生素C氧化损失,也可用2%偏磷酸代替。
●5、某些水果、蔬菜(如橘子、西红柿等)浆状物在100
mL容量瓶中泡沫太多,可加入戊醇2~3滴消除之。
●6、同法作空白实验,消除系统误差。
●7.操作要迅速,防止还原型维生素C被空气中的氧化。
滴定过程一般不超过2min。
滴定所用的染料不应小于1mL或多于4mL,如果样品含维生素C太高或太低时,可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。
干扰滴定因素有:
●1、色素
若提取液中色素很多时,滴定不易看出颜色变化,可用白陶土脱色,或加1mL氯仿,到达终点时,氯仿层呈现淡红色。
●2、
Fe2+可还原二氯酚靛酚。
对含有大量Fe2+的样品可用8%乙酸溶液代替草酸溶液提取,此时Fe2+不会很快与染料起作用。
●3、维生素C提取时要避光、避免与铜铁接触,以免Vc氧化。
九、实验结果与讨论
●1、为什么在测定维生素C的同时要进行2,6-D溶液的标定?
●2、为了保证抗坏血酸含量测定准确,应注意些什么?
●3、为了测得准确的维生素C含量,实验过程中都应注意哪些操作步骤?
为什么?
●4、食品中维生素C测定的方法有哪些,各自的原理和适用范围是什么?
●5、测定脂溶性维生素时样品需如何处理?
●6、测定水溶性维生素时、从样品中提取浓缩可采用那些方法?
●7、加入20g/L草酸溶液的目的是什么?
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