BJS12食用油脂中脂肪酸的综合检测法docWord格式.docx

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3.3.4

3.3.537种脂肪酸甲酯混合标准溶液标准品，各组分浓度参考附录A。

3.3.6

3.7标准溶液配制

3.8

3.4.1十一碳酸甘油三酯内标溶液（1000mg/L）

3.4.2

称取0.10g（精确至0.0001g）十一碳酸甘油三酯，加入50mL甲醇溶解，移入100mL容量瓶中，以甲醇定容，制成储备液。

储备液于-20℃可冷藏保存三个月。

使用时以甲醇稀释成50mg/L的中间液，现用现配。

3.4.2十一碳酸甲酯内标溶液（1000mg/L）

3.4.3

称取0.10g（精确至0.0001g）十一碳酸甲酯，加入50mL正己烷溶解，移入100mL容量瓶中，以正己烷定容，制成储备液。

储备液于-20℃可冷藏保存三个月。

使用时以正己烷稀释成50mg/L的中间液，现用现配。

3.4.337种脂肪酸甲酯标准溶液

3.4.4

将脂肪酸甲酯混合标准溶液从安瓿瓶中完全转移至10mL容量瓶中，用正己烷定容，于-20℃冷藏可保存一周。

根据需要稀释成适当浓度的含5.00mg/L十一碳酸甲酯内标的标准工作溶液，现用现配。

4仪器与设备

5

4.1气相色谱-质谱联用仪（GC/MS）。

4.2

4.3恒温水浴：

（40℃～100℃）±

1℃。

4.4

4.5分析天平：

感量0.1mg。

4.6

4.7涡旋振荡器。

4.8

4.9烘箱。

4.10

5分析步骤

5.1样品前处理

5.2

称取样品0.1g（精确至0.1mg）于250mL烧瓶中，加入50mg/L十一碳酸甘油三酯内标1mL（相当于50μg），加入含2%氢氧化钠的甲醇溶液（3.2.1）8mL，混合摇匀，连接回流冷凝器并在80℃水浴上回流，直至油滴消失；

从回流冷凝器上端加入15%三氟化硼甲醇溶液（3.2.2）7mL，继续回流2min；

用去离子水冲洗回流冷凝器，继续加热1min；

从水浴上取下烧瓶，迅速冷却至室温，准确加入10mL正己烷，振摇2min，吸取上层正己烷相，使其通过无水硫酸钠吸水后，过0.22μm的有机相滤膜，待GC/MS检测。

5.3仪器条件

5.4

a.色谱柱：

毛细管色谱柱（DB-23，60m×

0.25mm×

0.25μm），或性能相当者。

b.载气：

高纯氦气。

c.载气流量：

1.0mL/min。

d.进样口温度：

270℃。

e.程序升温：

初始温度60℃持续3.0min；

60℃～160℃，升温速率15℃/min；

保持0min；

160℃～210℃，升温速率8℃/min；

210℃～230℃，升温速率3.15℃/min；

保持10min。

211

f.进样方式：

分流进样，分流比5∶1。

g.进样体积：

1.0μL。

h.离子源：

EI，70eV。

i.离子源温度：

230℃。

j.四极杆温度：

150℃。

k.接口温度：

270℃。

l.定量分析为选择离子扫描（SIM），14种脂肪酸甲酯的保留时间、定性及定量离子见表1。

表114种脂肪酸甲酯的保留时间、定性离子和定量离子

序号

脂肪酸甲酯

定量离子（m/z）

定性离子（m/z）

保留时间（min）

1

C6:

74

87、99、59

8.34

2

C8:

87、127、59

10.44

3

C10:

87、143

12.23

4

C11:

0（内标）

87、200、143

13.08

5

C12:

87、143、183

13.94

6

C13:

87、143、185

14.79

7

C14:

87、143、199

15.66

8

1n5

87、166、208

16.06

9

C15:

87、143、213

16.53

10

C16:

1n7

87、194、236

17.81

11

C17:

87、143、284

18.42

12

C18:

2n6t

67

81、95、294

20.03

13

C20:

3n6

79

67、95

20.79

14

4n6

91、67、105

23.62

5.5结果计算

5.6

按下式

（1）计算样品中脂肪酸的含量（以脂肪酸甲酯计）：

……………………………………

（1）

式中：

X—样品中脂肪酸的含量（以脂肪酸甲酯计），单位为毫克每千克（mg/kg）

c—样品溶液中脂肪酸甲酯的浓度，单位为微克每毫升（µ

g/mL）

V—样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）

m—样品称取的质量，单位为克（g）

计算结果保留三位有效数字。

6结果判定

7

依据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在异常，判定异常时提示油脂中可能存在反复高温处理并经高度精炼获得的异常油脂。

判定依据见表2。

表2依据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否异常

化合物

判定依据（mg/kg）

x>

30，油脂可能存在异常，若确认不是棕榈油

（1），可判定为异常油脂样品

120，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰（4），且确认不是葵花籽油

（1），可判定为异常油脂样品

100，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰

（2），且确认不是芥花油和菜籽油

（1），可判定为异常油脂样品

400>

130，油脂可能存在异常，若排除棕榈油和菜籽油干扰

（2），且确认不是芥花油和香油

（1），可判定为异常油脂样品x>

400，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰

（2），可判定为异常油脂样品

10，可判定为异常油脂样品

1200，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰

（2），可判定为异常油脂样品

x>

600>

240，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰

（2），且确认不是芥花油和菜籽油

（1），可判定为异常油脂样品

600，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰

（2），可判定为异常油脂样品

2000，油脂可能存在异常，若排除芥花油、菜籽油、橄榄油和棕榈油干扰（1～2），可判定为异常油脂样品

1800，油脂可能存在异常，若排除橄榄油干扰

（1），可判定为异常油脂样品

800，可判定为异常油脂样品

450>

220，油脂可能存在异常，若排除菜籽油干扰

（2），可判定为异常油脂样品

450，可判定为异常油脂样品

120>

36，油脂可能存在异常，若排除菜籽油干扰

（2），可判定为异常油脂样品

120，可判定为异常油脂样品

注：

（1）确认不是干扰油的方法：

采用气相色谱法测定样品中37种脂肪酸含量，根据37种脂肪酸含量分布结合附录C进行确认，检测方法参考GB5009.168-2016。

（2）排除棕榈油、菜籽油干扰的方法：

参考表3。

表3排除干扰油的方法

方法说明（mg/kg）

（样品中肉豆蔻酸C14:

0的含量×

0.04），可排除棕榈油干扰

0.072），可排除棕榈油干扰

1.00），可排除棕榈油干扰x>

（样品中芥酸C22:

1n9的含量×

0.08），可排除菜籽油干扰

0.12），可排除棕榈油干扰

0.15），可排除菜籽油干扰

0.04），可排除菜籽油干扰

0/C12:

0比值

20，可排除棕榈油干扰

8质量控制

9

7.1方法空白

7.2

以十一碳酸甘油三酯为空白，进行脂肪酸过程空白对照。

7.3质控样品

7.4

7.2.1以正常食用植物油（纯大豆油、菜籽油、花生油）做对照，每批样品处理过程均以这三种作为阴性对照。

7.2.2

7.2.3以已确定为“异常油脂”的样品作阳性对照，同时以不同稀释度进行对照。

7.2.4

7.5质谱仪的质量数校正

7.6

采用仪器自动调谐PFTBA进行质量数校正。

附录A

脂肪酸甲酯混合标准溶液各组分浓度

表A脂肪酸甲酯混合标准溶液各组分浓度

组分中文名称

组分英文名称

CASNo.

简称

纯度

浓度/（mg/mL）

丁酸甲酯

Methylbutyrate

623-42-7

C4:

99.9

0.402

己酸甲酯

Methylhexanoate

106-70-7

99.7

0.399

辛酸甲酯

Methyloctanoate

111-11-5

癸酸甲酯

Methyldecanoate（caprate）

110-42-9

十一碳酸甲酯

Methylundecanoate

1731-86-8

99.5

0.199

十二碳酸甲酯

Methyllaurate

111-82-0

99.8

0.398

十三碳酸甲酯

Methyltridecanoate

1731-88-0

99.4

十四碳酸甲酯

Methylmyristate

124-10-7

0.400

顺-9-十四碳一烯酸甲酯

Myristoleicacidmethylester

56219-06-8

99.9

0.202

十五酸甲酯

Methylpentadecanoate

7132-64-1

99.6

0.200

顺-10-十五烯酸甲酯

Cis-10-pentadecenoicacidmethylester

90176-52-6

99.0

0.197

十六碳酸甲酯

Methylpalmitate

112-39-0

0.598

顺-9-十六碳一烯酸甲酯

Methylpalmitoleate

1120-25-8

十七碳酸甲酯

Methylheptadecanoate

1731-92-6

0.201

15

顺-10-十一烯酸甲酯

Cis-10-heptadecenoicacidmethylester

75190-82-8

16

十八碳酸甲酯

Methylstearate

112-61-8

17

反-9-十八碳一烯酸甲酯

Trans-9-elaidicmethylester

1937-62-8

1n9t

96.9

0.194

18

顺-9-十八碳一烯酸甲酯

Cis-9-oleicmethylester

112-62-9

1n9c

19

反，反-9,12-十八碳二烯酸甲酯

Linolelaidicacidmethylester

2566-97-4

20

顺，顺-9,12-十八碳二烯酸甲酯

Methyllinoleate

112-63-0

2n6c

21

二十碳酸甲酯

Methylarachidate

1120-28-1

0.401

22

顺，顺，顺-6,9,12-十八碳三烯酸甲酯

GAMMA-linolenicacidmethylester

16326-32-2

0.198

23

顺-11-二十碳一烯酸甲酯

Methyleicosenoate

2390-09-2

1n9

24

顺，顺，顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯

Alpha-Methyllinolenate

301-00-8

3n3

25

二十一碳酸甲酯

Methylheneicosanoate

6064-90-0

C21:

26

顺，顺-11,14-花生二烯酸甲酯

Cis-11,14-eicosadienoicacidmethylester

2463-02-7

2n6

27

二十二碳酸甲酯

Methylbehenate

929-77-1

C22:

28

顺，顺，顺－8,11,14－花生三烯酸甲酯

Cis-8,11,14-eicosatrienoicacidmethylester

21061-10-9

99.1

29

顺-13-二十二碳一烯酸甲酯

Methylerucate（cis-13-docosenoicacidmethylester）

1120-34-9

30

顺-11,14,17-花生三烯酸甲酯

Cis-11,14,17-eicosatrienoicacidmethylester

55682-88-7

99.2

31

顺-5,8,11,14-花生四烯酸甲酯

Methylcis-5,8,11,14-eicosatet

2566-89-4

99.3

32

二十三碳酸甲酯

Methyltricosanoate

2433-97-8

C23:

33

顺-13,16-二十二碳二烯酸甲酯

Cis-13,16-docosadienoicacidmethylester

61012-47-3

34

二十四碳酸甲酯

Methyllignocerate

2442-49-1

C24:

35

顺-5,8,11,14,17-花生五烯酸甲酯

Methylcis-5,8,11,14,17-eicosatet

2734-47-6

5n3

36

顺-15-二十四一烯酸甲酯

Methylnervonate

2733-88-2

37

顺-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯

cis-4,7,10,13,16,19-Docosahexaenoicacidmethylester

2566-90-7

6n3

附录B

各类典型食用植物油及“异常油脂”参考谱图

图B.137种脂肪酸甲酯标准物质SIM图

图B.2典型菜籽油中脂肪酸甲酯SIM图

图B.3典型大豆油中脂肪酸甲酯SIM图

图B.4典型花生油中脂肪酸甲酯SIM图

图B.5典型玉米油中脂肪酸甲酯SIM图

图B.6典型棕榈油中脂肪酸甲酯SIM图

图B.7典型植物调和油中脂肪酸甲酯SIM图

图B.8典型“异常油脂”中脂肪酸甲酯SIM图

附录C

棕榈油、菜籽油、芥花油、葵花籽油37种脂肪酸含量分布

图C.1实验室普查6个棕榈油样本结果

图C.2实验室普查7个菜籽油样本结果

图C.3实验室普查12个葵花籽油样本结果

图C.4实验室普查8个芥花油样本结果

本方法负责起草单位：

中国检验检疫科学研究院、浙江九安检测科技有限公司

本方法参与验证单位：

中国食品药品检定研究院

主要起草人：

仲维科、李礼、许秀丽、张峰、任荷玲、黄传峰