届人教版微生物培养与应用单元测试文档格式.docx

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5.0g

10.0g

20.0g

定容至1000mL

由配方即可知所需的原料；

凡能为微生物生长提供所需氮（或碳）元素的物质即为氮（或碳）源，牛肉膏、蛋白胨均含氮、碳元素。

（2）在配制培养基时营养要协调，按培养的微生物对各种成分的需求来确定；

在加入琼脂后，要不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

（3）玻璃器皿的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃条件下灭菌15～30min。

经灭菌后的试管棉塞上沾有培养基后，易被杂菌污染，所以应废弃。

（4）高压蒸汽灭菌时，必须先加入水，待加热至排出全部冷空气后才能密闭高压蒸汽灭菌锅。

（5）酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。

接种环经灼烧灭菌后要先冷却再蘸取菌种，否则会烫死菌种，导致实验失败。

答案：

（1）牛肉膏　蛋白胨　蒸馏水　NaCl　琼脂　蛋白胨、牛肉膏　

（2）比例　搅拌　琼脂糊底引起烧杯破裂　（3）高压蒸汽灭菌锅　100　121℃　15～30min　废弃　（4）适量水　（5）外　冷却　4

2．有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。

某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。

请分析回答问题：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以______为唯一碳源的固体培养基上。

从功能上讲，该培养基属于________培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________和________。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小。

分解圈大，说明该菌株的降解能力________。

（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和________。

无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

（1）从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株，使用的培养基应是以原油为唯一碳源的选择培养基，通过控制碳源这种营养成分，来促进能高效降解原油的菌株的生长，抑制其他微生物的生长。

（2）菌种纯化培养时，常采用平板划线法和稀释涂布平板法接种。

（3）当固体培养基上长出单菌落后，可通过比较菌落周围分解圈的大小，来判断菌株降解原油能力的大小。

一般来说，分解圈越大说明该菌株的降解能力越强，反之则越弱。

（4）实验室培养微生物的过程中，常用灼烧灭菌法对接种环、接种针、试管口、瓶口等进行灭菌；

用高压蒸汽灭菌法对培养基、试管等进行灭菌；

用干热灭菌法对玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等进行灭菌。

实验操作应在酒精灯火焰旁进行，因为酒精灯火焰旁可形成一个无菌环境，可防止微生物的污染。

（1）原油　选择　

（2）平板划线法　稀释涂布平板法　（3）强　（4）干热灭菌　高压蒸汽灭菌　火焰

3．急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的。

因此检验饮用水中细菌、病毒的量是有效监控疾病发生的必要措施。

请回答下列与检验饮用水有关的问题：

（1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为________________________________________________________________________。

上图所示的四种菌落分布中，不可能由该方法得到的是________。

（2）用该方法统计样本菌落数时是否需要对照组？

________。

为什么？

_______________。

（3）有三种材料或用具需要消毒或灭菌：

①培养细菌用的培养基与培养皿；

②玻璃棒、试管、烧瓶和吸管；

③实验操作者的双手。

其中，需要消毒的是________，需要灭菌的是________。

（4）已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸、产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具有塞子的试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

（1）平板划线法所得菌落集中呈线状，D的菌落分布情况可判断为平板划线法接种。

（2）为判断培养基灭菌是否合格，本实验需要对照。

（3）消毒是指使用较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。

灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

对人的手不能进行灭菌。

（4）根据题意，大肠杆菌能发酵乳糖产生气体，故可观察有无气泡产生来判断大肠杆菌的有无。

（1）稀释涂布平板法　D　

（2）需要　因为需要判断培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格）　（3）③　①②　（4）通过无菌操作向试管内注入一定量待测水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37℃恒温箱培养24h。

若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌，否则，说明水样中无大肠杆菌

4　（2016·

江西联考）无菌操作是微生物接种技术的关键；

传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。

回答下列相关问题：

（1）消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。

消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。

下列哪些事物适用于消毒处理________。

①皮肤　②饮用水　③牛奶　④注射器　⑤培养皿　⑥接种环　⑦培养基　⑧果汁　⑨酱油⑩手术刀

A．①②③⑧⑨　　　　　　　B．④⑤⑥⑦⑩

C．①②③④⑤⑥⑧D．以上全部

（2）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行________________，接种前要进行________，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。

（3）在微生物的实验室培养中，获得纯净培养物的关键是________。

如图是利用________法进行大肠杆菌接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

为达到这一目的，操作上应注意：

①每次划线前要____________________________________________________________；

②冷却后从上一区划线末端开始划；

③首尾区________。

（4）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。

对固体培养基应采用的检测方法是________________________________，观察培养基上是否有菌落产生。

（5）利用培养基不仅可以分离培养大肠杆菌，也可以进行植物组织培养。

与大肠杆菌培养明显不同的是，用于组织培养的培养基中还需要加入_______________________________。

（6）有位同学在家制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是_________________________________________。

[解析]　

（1）题中皮肤、饮用水、牛奶、果汁、酱油应做消毒处理，注射器、培养皿、接种环、培养基、手术刀应做灭菌处理。

（2）配制培养基时，各种成分在溶化后分装前必须进行调整pH，接种前要进行高压蒸汽灭菌，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。

（3）在微生物的实验室培养中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。

微生物的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。

进行平板划线时应每次划线前都要灼烧接种环，冷却后从上一区划线末端开始划，首尾区不连接。

（4）接种前检测培养基是否被污染的方法为将未接种（接种等量无菌水）的培养基在适宜的温度下放置适当时间，观察培养基上是否有菌落产生。

（5）与大肠杆菌培养明显不同的是，用于植物组织培养的培养基中还需要加入植物激素（生长素和细胞分裂素）。

（6）制作泡菜利用的是乳酸菌的乳酸发酵，但乳酸菌对青霉素敏感，加入青霉素会导致乳酸菌死亡，使发酵失败。

[答案]　

（1）A　

（2）调整pH　高压蒸汽灭菌

（3）防止外来杂菌的入侵　平板划线　灼烧接种环　不连接（不重叠）

（4）将未接种（接种等量无菌水）的培养基在适宜的温度下放置适当时间

（5）植物激素（或生长素和细胞分裂素）

（6）青霉素杀死了乳酸菌

5、　研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。

为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。

（1）配制好的培养基通常可以使用________法灭菌。

与步骤②中培养基成分相比，步骤③中培养基成分的最大区别是________。

（2）接种细菌常用的方法有___________________________________________________。

若经过④过程后获得的结果为图B所示，则所操作方法如图________所示。

（3）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是_______________________________________

对步骤⑤某瓶中细菌计数的方法有两种，一种方法是________________，其菌落数可代表活菌数；

另一种方法是________________，该方法需要借助一块特殊的载玻片，其名称为________________。

[解析]　

（1）培养基灭菌用高压蒸汽灭菌法，为筛选出能分解石油的细菌，所以石油是唯一碳源。

（2）接种细菌常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。

图B为平板划线法获得的结果，则操作方法如图甲所示。

（3）步骤⑤进一步操作是为了筛选出分解石油能力最好的细菌，微生物计数可用稀释涂布平板法和显微镜直接计数法（血细胞计数板计数法）。

[答案]　

（1）高压蒸汽灭菌　石油是唯一碳源

（2）平板划线法和稀释涂布平板法　甲

（3）筛选出分解石油能力最好的细菌　稀释涂布平板法　显微镜直接计数（血细胞计数板计数法）　血细胞计数板（血球计数板）

6．（2015·

高考全国卷Ⅰ）已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。

脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。

回答有关问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用________染色。

微生物A产生的油脂不易挥发，可选用________（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。

（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用________直接计数；

若要测定其活菌数量，可选用________法进行计数。

（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，________℃条件下该酶活力最小。

为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________℃设计后续实验。

本题主要考查了植物油脂的染色和提取方法、选择培养基的配制、微生物的计数以及确定酶的最适温度的实验设计等。

（1）脂肪可用苏丹Ⅲ染液（或苏丹Ⅳ染液）进行染色。

微生物A产生的油脂不易挥发，不能用水蒸气蒸馏法提取，应用萃取法加以提取。

（2）能产生脂肪酶的微生物B可存在于含有油料作物种子的腐烂物的土壤中，为了选择培养，固体培养基上应以油脂作为唯一碳源。

（3）测定培养液中的微生物的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数；

而要测定活菌数，则可利用稀释涂布平板法进行计数。

（4）酶量需要最多的温度下，其酶活力最小，即酶活力最小的温度应为45℃。

三个温度下酶活力最大的温度是40℃，但40℃不一定是该酶的最适温度，故应围绕40℃设计后续实验。

（1）苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）　萃取法

（2）油脂

（3）血细胞计数板　稀释涂布平板

（4）45　40

7．（2014·

高考新课标全国卷Ⅰ）植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。

回答下列问题：

（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将________分解成________。

（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成________色复合物。

用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的________。

（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分如表）：

酵母膏

无机盐

淀粉

纤维素粉

CR溶液

水

培养基甲

＋

－

培养基乙

注：

“＋”表示有，“－”表示无。

据表判断，培养基甲________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是__________________________________________________________________________

________________________________________________________________________；

培养基乙________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_______________________________________________________________________________

（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分：

C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，葡萄糖苷酶将纤维二糖分解成葡萄糖。

（2）刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。

用含有刚果红的纤维素培养基培养纤维素分解菌时，由于纤维素被分解，红色复合物无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。

（3）培养基甲未使用琼脂，为液体培养基，不能用于分离单菌落。

含有纤维素和刚果红（CR）的培养基可分离和鉴别纤维素分解菌。

（1）纤维二糖　葡萄糖

（2）红　透明圈

（3）不能　液体培养基不能用于分离单菌落　不能　培养基中没有纤维素，不会形成CR—纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌

8．（2014·

高考新课标全国卷Ⅱ）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。

（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。

在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_______________________

___________________________________；

然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；

经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。

据此可得出每升水样中的活菌数为________。

（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。

操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。

这样做的目的是_____________

____________________________________________________。

（3）示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。

结果发现：

振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。

分析其原因是：

振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。

（1）取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，可依据是否产生菌落确定培养基的灭菌效果是否理想。

由样品中菌株数计算公式：

（C÷

V）×

M知：

1mL水样中菌株数为（38÷

0.1）×

100＝3.8×

104，故每升水样中的活菌数为3.8×

107。

（2）利用接种环接种时，接种环需灼烧灭菌。

利用平板划线法分离细菌时，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始，可以将聚集的菌体逐步稀释以便得到单个菌落。

（3）稀释涂布平板法是用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面，故培养后产生的菌落应随机分布在培养基表面，即B表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

（4）液体培养基通过振荡可提高溶氧量，同时使菌体与营养物质充分接触，提高营养物质的利用率，从而提高细菌的生长速度。

（1）检测培养基平板灭菌是否合格　3.8×

107

（2）灼烧　将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落

（3）B　（4）溶解氧　营养物质

9．（2013·

高考新课标全国卷Ⅱ）临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。

实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。

（1）为了从样本中获取致病菌单菌落，可用________法或________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。

（2）取该单菌落适当稀释，用________法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。

（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A________；

含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B________；

含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明_______________________

___________；

含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。

（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素________。

本题主要考查微生物培养的相关知识。

（1）将细菌接种到固体培养基上的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。

（2）由

（1）获取的致病菌单菌落，经过适当稀释，用涂布法接种至固体培养基表面进一步培养。

（3）在检测致病菌对抗生素的敏感性实验中，若含A种抗生素的滤纸片周围出现透明圈，说明周围的致病菌死亡，该致病菌对A种抗生素敏感；

若含B种抗生素的滤纸片周围没有出现透明圈，说明致病菌对B种抗生素不敏感；

若含C种抗生素的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明该致病菌对C的敏感性比对A的弱；

若含D种抗生素的滤纸片周围透明圈也比含A的小，说明A、B、C、D四种抗生素的杀菌效果最显著的为A。

透明圈中出现的菌落为耐药菌。

（4）根据（3）中分析，为达到抗菌目的最好选用抗生素A。

（1）划线　稀释涂布（或涂布）

（2）涂布

（3）敏感　不敏感　该致病菌对C的敏感性比对A的弱　耐药菌

（4）A

10．（2014·

高考四川卷，节选）有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。

研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。

分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、________________四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是______________________

_________________________________。

（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。

划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。

造成划线无菌落可能的操作失误有_________________________________________

______________________。

（3）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。

该实验的假设是________________________________，该实验设计是否合理？

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质包括水、碳源、氮源和无机盐；

在培养基中加入苯磺隆作为唯一碳源，可将只能利用此碳源的菌种筛选出来。

（2）纯化菌株时，通常用接种环进行划线操作；

第二区域划第一条线时，接种环灼烧后未冷却，致使所划第一条线上无菌落。

若第二次划线未从第一区域末端开始，则也会导致第二划线区域第一条线上无菌落。

（3）由图乙可知本实验的目的是探究能降解苯磺隆的物质是否是该菌种所产生的蛋白质。

为使实验设计更合理还需再设置一个对照组，将蛋白酶溶液改为等量的蒸