水稻的发育生物学实验报告.docx
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水稻的发育生物学实验报告
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水稻的发育生物学实验报告
篇一:
发育生物学实验
发育生物学实验指导
20XX-20XX学年
第二学期
20XX年4月2日
实验一
1原理
卵巢表面为单层立方或扁平的表面上皮,上皮下方为薄层致密结缔组织构成的白膜。
卵巢实质分为皮质和髓质。
皮质含不同发育阶段的卵泡、黄体和白体,卵泡间结缔组织由低分化的梭形的基质细胞、网状纤维及散在的平滑肌纤维构成。
髓质有血管和淋巴管。
近卵巢门处有少量门细胞,其结构和功能类似睾丸间质细胞,可分泌雄激素,
在Fsh和Lh刺激下,每个周期有一批卵泡发育,其中之一发育成熟并排卵。
卵泡的发育分为原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡四个阶段。
①原始卵泡体积小,由一个初级卵母细胞和一层扁平的卵泡细胞构成。
初级卵母细胞为圆形,直径约40μm,核大而圆,染色浅,核仁明显,胞质嗜酸性。
初级卵母细胞是在胚胎时期由卵原细胞分裂分化形成,并停滞在第一次减数分裂前期,直至排卵前才完成分裂。
②初级卵泡为原始卵泡在Fsh的作用下发育形成。
初级卵母细胞增大,在靠近质膜的胞质中出现电子致密的溶酶体,称皮质颗粒。
卵泡细胞增生,由扁平变为立方形或柱状,由单层变为多层;最内一层卵泡细胞为柱状,呈放射状排列,称放射冠。
在初级卵母细胞与放射冠的卵泡细胞之间出现一层均质状、嗜酸性的透明带。
构成透明带的蛋白中,Zp3为精子受体。
③次级卵泡其内出现卵泡腔,腔内充满卵泡液;初级卵母细胞、透明带、放射冠及部分卵泡细胞突入卵泡腔内形成卵丘;卵泡腔周围的数层卵泡细胞形成卵泡壁,称颗粒层,卵泡细胞改称颗粒细胞。
初级卵泡和次级卵泡合称生长卵泡,其周围形成卵泡膜。
卵泡膜内层有多边形或梭形的膜细胞,具有分泌类固醇激素细胞的特征;外层有胶原纤维和平滑肌纤维,膜细胞合成雄激素,雄激素进入颗粒细胞,转化为雌激素,故雌激素由两种细胞联合产生。
④成熟卵泡在Lh刺激下,次级卵泡发育为成熟卵泡。
初级卵母细胞直径可达150μm。
由于卵泡液急剧增多卵泡体积显著增大,直径可超过2cm,并向卵巢表面突出。
在排卵前36~48小时,初级卵母细胞完成第一次减数分裂,形成次级卵母细胞和第一极体。
第一极体很小,含极少量胞质。
次级卵母细胞迅速进入第二次减数分裂,停滞在分裂中期。
绝大多数卵泡不能发育成熟,它们在发育的各个阶段停止生长并退化,退化的卵泡称闭锁卵泡。
精子的发生
精子发生的全过程是在精巢内进行的。
各种动物的精巢结构不同,精子的形态也各种各样,但是精子发生的规律基本相似。
精子发生都必须经历增殖(:
水稻的发育生物学实验报告)期、生长期、成熟期和精子形成期这几个阶段。
生精细胞包括精原细胞(spermatogonium)、初级精母细胞(primaryspermatocyte)、次级精母细胞(secondaryspermatocyte)、精子细胞(spematid)和精子(sperm)。
在生精细胞之间还分布着一种称之为支持细胞(sertolicell)的体细胞。
它对生精细胞具有支持、营养和分解残余物质的作用,也具有调节精子发生和诱导精子形成的作用。
精子的发生是一个连续的过程。
在哺乳类精巢中有许许多多的生精细管,在生精细管上有规律地分布着各期生精细胞。
而在两栖类或鱼类,精子的发生有着明显的季节性变化。
在精巢中生精细胞分布在精小叶中,各期生精细胞以精小囊为单位。
在同一个精小囊中的生精细胞往往为同一发育期的生精细胞,不同精小囊的生精细胞发育不同步。
本实验以哺乳类、蛙的精巢为材料,观察精子的发生过程和精子的形态特征。
一、精子的发生
1、取哺乳类精巢切片,置显微镜下先用低倍镜观察,可见在整个精巢外表有一层较厚的结缔组织膜,称白膜(tunicaalbuginea),白膜的结缔组织伸到精巢内形成一些结缔组织小隔,称精巢小隔(septulatestis),把精巢分隔成许多锥形小叶,每个小叶有1-4条生精细管。
在切片中可见生精细管多呈横切面,每个生精细管外有一薄层的结缔组织。
选一生精细管置高倍镜及油镜下仔细观察,注意生精细管的管壁由数层发育不同时期的生精细胞所构成,自管壁向管腔依次排列如下:
精原细胞为生精细管管壁上最外层的生精细胞,紧附于结缔组织之内,通常为一层细胞,呈圆形,胞核染色深。
精原细胞经过若干次有丝分裂后,最后一代的细胞长大为精母细胞。
初级精母细胞初级精母细胞位于精原细胞的内方,为生精细管上各期生精细胞中体积最大的细胞,有二、三层。
核非常明显,可见到处于减数分裂前期不同时期的变化,有时还可见到正在进行第一次成熟分裂。
次级精母细胞初级精母细胞经第一次成熟分裂后形成次级精母细胞,大小为初级精母细胞的一半,位于初级精母细胞的内方。
次级精母细胞的染色体已减少一半,为单倍体,细胞染色较浅。
由于次级精母细胞存在的时间很短,所以在切片中数目有时也少,通常为一、二层。
精子细胞次级精母细胞经过第二次成熟分裂,形成精子细胞。
精子细胞位于次级精母细胞的内方,接近生精细管的管腔。
精子细胞较次级精母细胞小,细胞呈卵圆形,细胞核染色深,有的可见到精子细胞在精子形成中的不同形态变化。
精子精子细胞完成分化过程形成精子。
精子位于生精细管的管腔中,精子聚集成束,一般头部朝向管壁或深埋在支持细胞的细胞质中。
精子具有染色很深的头部和鞭毛状的尾部。
4.实验步骤
调节光源——放置标片——观察——绘图
5.作业:
1)卵巢和精巢的组织构成(描述)
2)各阶段卵母细胞和精巢细胞的形态特征(描述或绘图)
实验二精子获能的鉴定实验
1.实验器材
冻置装置水浴锅培养皿5ml注射器1ml移液枪枪头倒置显微镜载玻片ph试纸,
2.实验试剂
生理盐水、bo培养基、双抗、e2、p4、无水乙醇、95%乙醇、考马斯亮蓝g250染液、nahco3、hcl、肝素
3.材料
冷冻精液
4.原理
精子在离开雄性生殖系统时,虽有完整的形态和独立运动能力,但不能立
刻与卵子受精,必须在雌性生殖道或在体外的特定介质中进行最后成熟,即“获能”(spermcapacitation),才能与同种动物的卵子受精,这是受精过程最基本的一步,特别在体外受精技术中是相当关键的一步。
精卵结合之前,精子应该具备如下能力:
①有能力到达卵母细胞并穿过透明带;②有能力进行获能和顶体反应;成熟过程中获得的蛋白结合位点,能适时暴露给卵母细胞以结合透明带;④可以与卵母细胞膜融合并且将遗传物质注入到卵子的细胞质中。
精子通过附睾时已经获得上述大部分能力。
但精子必须在雌性生殖道或体外培养液中停留一段时间获能以后才具备完整的授精条件。
精子获能的理想场所是一新近交配的雌性生殖道。
精子体外获能的实质是模仿体内获能,但体内获能的效率远远比体外获能的高。
精子获能是一个十分复杂的生理现象,它是顶体反应的前奏,顶体反应是获能的必然结果,是授精的必要条件。
精子获能与顶体反应是使精子穿过卵细胞的透明带,发动授精过程的必需生理事件。
一般认为精子获能的意义在于使精子准备发生顶体反应和超激化,促使精子穿透卵子。
精子在若干生殖道获能因子的作用下,精膜发生一系列变化(吸附于精子膜表面精清蛋白的去除和膜表面蛋白重组等),进而产生生化和运动方式的改变。
获能后精子穿越卵母细胞周围的滤泡细胞和透明带的能力提高,是精子发生顶体反应的前奏。
精子一旦获能,其运动类型发生显著改变,精子头部侧摆幅度和频率明显增加,尾部振幅加大,频率加快,呈现一种特殊的超激活运动(hAm)或鞭打样运动。
hAm是精子为适应受精而形成的一种特殊的运动类型,所反映的是精子运动能力和方式的改变。
应用显微录像技术、连续分步曝光照相技术、计算机辅助精液分析(cAsA)技术对精子运动轨迹进行分析,可以从精子运动学本质来研究和相对客观的确定超激活精子。
cAsA分析系统可达到客观准确的量化精子运动状况,通过对精子头部运动轨迹摆动图型的分析可获得多项参数,使人们对精子运动有了更深层次的了解。
如人精子获能后表现为精子运动轨迹速度(VcL)的增加,线形度(LIn)和直线性(sTR)的降低,头部侧置量(ALh)的增加。
对于群体激活精子可用下列标准界定,即VcL>100μm/s,LIn≤65和ALh≥7.5μm/s。
然而,cAsA分析系统受诸多因素的影响,该仪器难以从非精子物质中识别精子因而测定值的准确性受精液中细胞成分和非细胞颗粒物质的干扰。
又因使用的仪器不
篇二:
小鼠发育生物学实验内容
小鼠发育生物学实验内容
实验一:
小鼠卵母细胞和精子的形态观察
一、实验目的:
掌握胚胎体外操作工具的制备、小鼠超数排卵方法以及小鼠精子和不同发育阶段观卵母细胞的收集方法,观察精子结构和运动状态,评估精子活力,观察卵母细胞结构,了解体外授精操作过程。
二、操作过程:
1胚胎体外操作工具制备
在酒精喷灯上将玻璃管拉成直径1mm的细管,连上乳胶管即可。
2小鼠的抓去与保定
3收集精子
断颈处死公鼠,打开腹腔,找到睾丸和附睾,剪取附睾尾,剪碎,置1.5ml离心管底部,加0.5ml生理盐水,置37度水浴锅20分钟,用吸管从离心管上部取50微升液体,置细胞计数板,观察精子结构、密度和活力。
精子活力计算公式:
精子活力=视野中直线运动的精子数/视野中总精子数
4收集卵母细胞
成熟卵母细胞的收集:
母鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素pmsg(每只10单位),48小时后再注射人类绒毛膜促性腺hcg(每只10单位),18小时后断颈处死母鼠,打开腹腔,剪下输卵管,用镊子刺破输卵管壶腹部,释放卵母细胞,用透明质酸酶溶液(10毫克/毫升生理盐水)处理卵母细胞以除去颗粒细胞,在实体显微镜下观察卵母细胞的结构。
未成熟卵母细胞的收集:
断颈处死性成熟前母鼠,打开腹腔,剪取卵巢,加入1毫升盐水,用刀片或镊子捣碎卵巢,寻找生发泡状态的卵母细胞,观察卵母细胞结构。
5体外授精
将卵母细胞与精子共培养(微滴培养法)(演示)
三、实验结果
各种精子和卵子的形态绘图;精子活力;精子密度
四、实验收获与体会,存在问题和改进意见。
实验二:
小鼠早期不同发育阶段胚胎的收集、观察以及胚胎移植
一、实验目的:
掌握小鼠附植前胚胎收集方法,观察不同发育阶段小鼠胚胎的结构,认识小鼠早期胚胎形态学,并了解体内发育阶段与所处生殖器官位置的关系,了解小鼠胚胎移植的基本原理和操作过程。
二、操作过程:
1小鼠超数排卵程序
中午12时腹腔注射pmsg,48小时后腹腔注射hcg并与公鼠合笼交配,次日清晨检查阴道栓,如果发现阴道栓则妊娠0.5天。
2收集胚胎
断颈处死妊娠0.5天、1.5天、2.5天、3.5天母鼠,剪取输卵管和子宫,将注射器针头插入输卵管开口或子宫角,用生理盐水冲洗输卵管或子宫角,收集受精卵、2-细胞胚胎、8-细胞胚胎以及囊胚,观察胚胎形态。
3小鼠胚胎移植
结扎公鼠准备(演示);
假孕母鼠准备(演示);
输卵管移植(演示)
子宫移植:
麻醉假孕2.5天母鼠,在右侧最后一根肋骨后沿打开腹壁,找到卵巢,用镊子夹住卵巢周围的脂肪组织,拉出子宫角,用小铁夹固定卵巢,用吸胚管吸取囊胚,移入子宫角,手术缝合腹壁,17天后观察母鼠分娩。
三、实验结果
各种胚胎的形态绘图
四、实验收获与体会,存在问题和改进意见。
篇三:
遗传学实验-果蝇杂交实验实验报告
传学设计性实验报告
实验名称果蝇杂交实验学院生命科学学院专业生物技术班级名称学生姓名学号任课教师
完成日期20XX年11月15日
教务处制
1前言
1.1实验目的
通过实验验证分离规律、自
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