过柱子Word文件下载.docx

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因为是schlenk操作，所以点板是个问题，如果样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。

如果样品无色，只好准备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。

像我以无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。

因为硅胶中有大量的羟基裸露在外，很容易是样品分解，特别是金属有机化合物和含磷化合物。

而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。

听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。

哪位做过可以提出来大家参详参详。

关于湿法、干法上样。

湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。

很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。

可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，如果不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。

有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。

样品和硅胶的量有一种说法是1：

1，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样品没有吸附在硅胶上）。

溶剂的选择。

当然是最便宜，最安全，最环保的了。

所以大多选用石油醚，乙酸乙酯。

文献中有写用正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因为极性很小，有时还是非它不可。

乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒别让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。

二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。

甲醇，据说能溶解部分的硅胶，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等。

其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了

。

由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是用10升或25升的塑料桶装的，就要注意这些工业品的纯度是较低的。

经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质，其他的杂质就可想而知了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。

当然过原料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。

另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点是要消耗一定的人工。

这里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大了。

在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了。

关于操作问题。

1装柱。

柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。

干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。

装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。

书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了。

当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。

但是柱子更忌讳的是开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！

2加样。

用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。

加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm就够了），再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。

3淋洗剂的选择。

感觉上要使所需点在rf0.2～0.3左右的比较好。

不要认为在板上爬高了分的比较开，过柱子就用那种极性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：

0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。

4样品的收集。

用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。

所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话，就不容易流出。

这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。

这时可以采用氧化铝作固定相。

另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果用大试管，可能一根就收到了三个样品，wuwu。

如果都用小试管那工作量又太大。

5最后的处理。

柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本了，必要时进行重结晶。

补充

自然沉降法制备常压色谱柱

常压柱色谱，又称柱层析，是色谱法中最常见的一种。

它的突出优点是，分离效率比经典的化学分离方法高的多，与其他色谱法相比，不需要昂贵的仪器设备，更换流动相和吸附剂方便，消耗材料少，成本低，适合分离取样量从克到微克级范围很宽的各种样品，因此在化学实验室中至今仍被广泛应用。

为了保证色谱柱良好的分离效果，色谱柱应装填得尽可能紧密和均匀，在柱中没有气泡、裂缝或沟槽，也不发生柱的径向或轴向固定相的粒度不均匀分布。

传统常压色谱柱的填装分为干法装柱和湿法装柱（也称浆法装柱）两种，这两种方法均存在操作不易掌握、易出现气泡和裂缝，装柱时间长等不足之处。

本文提出的新的装柱方法介入干装法和湿装法之间，称之为自然沉降法。

自然沉降法通过对固定相和溶剂的选择，并辅以新的色谱柱，可对常压色谱柱进行简便、高效的填装。

用所述装柱技术制备的色谱柱对多种未知组成样品进行分离[1]，分离效果明显优于传统装柱法。

此外，该法装柱快速，易掌握，不会出现断层和气泡等常见问题，装柱成功率高，具有很好的实际应用价值。

柱层析技术要点

极性小的用乙酸乙酯：

石油醚系统

极性较大的用甲醇：

氯仿系统

极性大的用甲醇：

水：

正丁醇：

醋酸系统

拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸

硅胶柱层析

下面介绍我现在惯用的方法：

匀浆法。

1。

称量。

200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；

如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。

干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。

2。

搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；

如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3。

装柱。

将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。

随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。

4。

压实。

沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。

柱床约被压缩至9/10体积。

无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

5。

上样。

干法湿法都可以。

海沙是没必要的。

上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。

然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

6。

过柱和收集。

柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。

太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。

收集的例子：

10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；

1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。

7。

检测。

要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。

8。

送谱。

收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。

如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。

可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。

1.先根据TLC方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质Rf值之差最大化

2.将柱子必须装平整、均匀

3.考虑有限柱填料的吸附量

4.可考虑用剃度法分开并洗脱

柱子长了，相应的塔板数就高。

柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是

样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。

试想如果柱子十厘米，而样品就有二

厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。

而如果样品层只

有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。

当然采用粗大的柱子要牺牲比较多

的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，

不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。

现在见到的柱子径高比一般在1：

5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选

择要具体分析。

如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质

相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×

20cm的柱子

）；

如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也

可以减小淋洗剂的极性等等。

真空液相层析即vacuumliquidchromatography（VLC）,即用真空代替压力进行层析，具体方法可见Synthesis,2001,No,16,2431-,andJchemedu,1997,10,1222-

干法上样，一般用于固体或粘度大的液体样品。

样品用低沸点易溶溶剂溶解，加入1-3倍的粗硅胶，晾干或旋干，干燥的标准是硅胶成细粉而不粘在瓶壁上。

装好的柱子上留一段溶剂，把吸附了样品的硅胶慢慢到进去，震动柱子或再加一些溶剂，把粘在柱壁上的硅胶洗下

常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。

我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相

的吸附柱。

由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望

能有所帮助。

压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。

所

以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分

离，一个柱子几个月也是有的。

减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过

硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得

不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。

以前曾经大量的过

减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念

头了。

压力

的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。

特别是在容易分解

的样品的分离中适用。

压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。

个人觉得

加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。

关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品。

不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅

胶饱和时放出的热量有可能是产品分解，毕竟要分离的是敏感的东东，小心不为过。

也

是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。

至于是

加压、常压、减压，随需而定。

因为是schlenk操作，所以点板是个问题，如果样品是显

色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。

如果样品无色，只好准备几十

个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。

像我以

前过一根无水无氧柱，需要六个schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。

无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。

因为硅胶中有大量的羟基裸露在外，

很容易是样品分解，特别是金属有机化合物和含磷化合物。

而氧化铝可以做成碱性、中

性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。

听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一

照就知道产品在哪里了，没有验证过。

湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好

，不然溶剂就成了淋洗剂了。

可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一

般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较

好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，如果不能重结晶

那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。

有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起走，

显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。

1，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样

品没有吸附在硅胶上）。

当然是最便宜，最安全，最环保的了。

文献中有写用

正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因

为极性很小，有时还是非它不可。

乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒别

让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。

二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸

附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些

甲醇，据说能溶解部分的硅胶，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后

继处理，比如说重结晶等。

其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。

由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是用10升或25升的塑

料桶装的，就要注意这些工业品的纯度是较低的。

经常能够从送来的大桶底部看见有色

的杂质，其他的杂质就可想而知了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。

当然过

原料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。

另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点

是要消耗一定的人工。

这里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和

乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋

洗时比较合适，正好极性越来越大了。

在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为

在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和

你下面要过的样品有反应那就惨了。

柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。

装完的柱子应该要适度的紧

密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。

书中写

的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就

全下来了。

当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。

但是柱子更忌讳的是

开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！

用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再

加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。

加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm就够了）

，再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。

不要认为在板上爬高了分的比较开，过

柱子就用那种极性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分开，因为柱子是一

个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：

0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3

）的三次方或四次方大。

用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。

所以如果样品与硅胶的吸附比

较强的话，就不容易流出。

这时可以

采用氧化铝作固定相。

另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果用大试管，可能一根就

收到了三个样品，wuwu。

如果都用小试管那工作量又太大。

柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以如果想送

分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没

了，必要时进行重结晶。

实验室常用的正向柱分离有加压、常压和减压等，我原是做天然产物全合成的，也做过少量天然产物分离工作。

还常用到反向柱。

正向柱分离

1.TLC

1）加压、常压柱

主点Rf0.5左右，相近的组份要能分开。

2）减压柱

主点Rf0.1左右，相近的组份要能分开，或次组份在原点。

2.硅胶或氧化铝等

60到200目

300目以上

大空树脂挺好，但自己用得少。

硅藻土很多时侯也很好。

3.柱径

好分、量大，柱径可大些；

难分、量小，柱径可小些。

4.柱长

与柱径相似，好分、量大，柱长可短些。

5.制样

减压一般是干法拌样；

加压、常压可干法拌样，也可湿法备样。

6.洗脱液

老板科研经费多，用加压、常压耗溶剂太多；

要想给老板省钱，给自己省时间，就用减压。

7.接液

主点未出，多接；

主点快出来及快出完，少接。

8.收率

对同一样品且同量减压一般收率低；

加压、常压一般收率高。

9.备柱

无论减压、加压、常压；

无论干法、湿法备柱。

填料要想法压实，且备柱或过柱时均不可有气泡、断层、干柱（减压除外。

），否则一切从头开始。

柱层析和TLC操作关键

柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。

这两项技术掌握与否，对于提高实验的效率至关重要。

常见的例子是：

在柱层析时，由于层析柱中的硅胶填料装得不均匀（没有填严实），使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花，导致分离效果不好。

更常见的例子是：

层析柱虽然装得不错，但是由于淋洗剂选择不恰当，结果导致几十毫克产品，用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。

分离同样的东西，熟手可能只需要半个小时，而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。

由此可见，这两项技术掌握与否，对于提高工作效率，减轻工作量，减少有机溶剂的使用，从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。

柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。

而淋洗剂的选择则是通过TLC确定。

这里要指出的一点是：

TLC的作用除了跟踪反应进程，检测试剂和原料纯度外，一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。

首先谈柱层析：

1：

装柱子（添硅胶）时，有两种方法：

即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。

不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。

湿法装柱：

是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂“走柱子”，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。

干法装柱：

则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。

接着是用淋洗剂“走柱子”，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。

通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。

干法装柱较方便，但最大的缺陷在于“走柱子”时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。

虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。

解决的办法是：

第一、硅胶一定要天结实；

第二、一定要用较多的溶剂“走柱子”，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。

也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。

但我的感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必要。

2：

上样也有干法和湿法之分：

干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀后