LightCycler480系统操作快速指南21Word格式.docx
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6.Troubleshooting
本指南用于本指南用于简要说明简要说明LightCycler®
480系统软件系统软件的界面及操作要点的界面及操作要点的界面及操作要点,,对初学者了解系统软件有所帮助统软件有所帮助。
。
但荧光定量PCR是一个相对较为复杂和精确的定量方法是一个相对较为复杂和精确的定量方法,,要求使用者对仪器仪器、、软件和实验设计有比较系统深入的了解软件和实验设计有比较系统深入的了解,,方能对方能对实验的设计实验的设计实验的设计、、操作及分析运用自如操作及分析运用自如。
因此请各位使用者在初步了解本软件的操作要点后因此请各位使用者在初步了解本软件的操作要点后,,尽快通过完整的操作手册尽快通过完整的操作手册,,熟悉系统相关软件和实验设计关软件和实验设计、、分析分析。
版本历史
版本号
修订时间1.02007-3-272.0
2007-8-22
第一部分基本基本界面及界面及界面及图标图标
概述概述:
:
一、Overview界面
Exit:
关闭LC480软件
Logoff:
从目前使用的数据库中退出并可登陆其他的数据库
Overview:
点击该图标进入点击该图标进入““Overview”界面
Navigator:
点击该图标进入点击该图标进入““Navigator”界面界面,,可进行数据的导入导出等操作可进行数据的导入导出等操作,,
详见详见。
Save:
点击该图标进行保存
Export:
导出当前打开的文件Close:
关闭当前打开的文件
Print:
打印当前打开的窗口
Tools:
打开打开““Tools”界面界面,,可进行密码修改可进行密码修改,,建立和编辑用户建立和编辑用户,,系统设置系统设置,,查看
数据库状态数据库状态、、仪器状态仪器状态、、滤光片组合等操作
Help:
查看软件版本查看软件版本,,操作说明书等
二、NewExperiment界面
SummaryModule:
查看实验的总体概况查看实验的总体概况,,包括实验名称包括实验名称,,所用的程序所用的程序,,检测模式检测模式,,
滤光片组合等滤光片组合等。
概况的内容由系统自动生成
RunModule:
编辑编辑、、运行或查看PCR程序及查看PCR实时数据
SubsetEditor:
点击该模块后可进行子集的编辑
SampleEditor:
点击后进行样品信息的编辑
AnalysisModule:
点击进行结果分析或查看已保存的分析结果
ReportModule:
选择需要的内容以报告的形式给出结果
三、Navigator界面
Import:
导入一个文件
导出一个文件
BatchImport:
导入一批数据
BatchExport:
导出一批数据
New:
新建一个实验或文新建一个实验或文件夹件夹
NewFolder:
新建一个文件夹
Open:
打开一个文件
Rename:
重命名
Delete:
删除选中的目标
Copy:
拷贝选中的目标
Note:
所有上述图标在深蓝色时为激活状态所有上述图标在深蓝色时为激活状态,,灰色时为灭活状态也就是不可用状态灰色时为灭活状态也就是不可用状态。
各图
标的功能在不同状态下以颜色来区分是否具备标的功能在不同状态下以颜色来区分是否具备。
第二部分PCR及结果分析
一、开机
(一打开LightCycler480仪器
(二打开电脑
(三登陆WindowsXP
(四双击图标,打开LightCycler480软件,输入用户名、密码后登陆。
Note:
打开480仪器后,将有一个仪器自动初始化的过程:
SampleLoader自动出来一次,并复位。
二、运行一次PCR实验
(一PCR程序的设定
1、打开软件后,自动进入如下界面
2、点击软件主界面中的“NewExperiment”,进入程序设定界面
3、根据实验所用的检测模式选择“DetectionFormat”,“BlockType”,“Plate
ID,(optional”和“ReactionVolume”
3.1从DetectionFormat的下拉框中选择分析模式:
SYBRGreenI;
SimpleProbe;
MonoColorHydrolysisProbe;
MultiColorHydrolysisProbe;
MonoColorHybProbe;
MultiColorHybProbe
3.2‘Customizes’模块中选择合适的滤片组合
3.3选择合适的模块
3.4PlateID:
Optional,可以手工输入或通过扫描仪扫描
3.5输入反应体积:
96模块10-100µ
l;
384模块5-20µ
l
4、定义PCR程序中的每个步骤(ProgramName及循环数(Cycles和分析模式
(AnalysisMode。
利用“+”和“-”增加或删除步骤。
5、设定每个步骤的温度,时间,变温速率及信号获取模式。
利用“+”和“-”
增加或删除步骤。
RampRate(°
C/sHeatingupCoolingdown
96-wellblock:
1.0–4.4°
C/s1.0-2.2°
C/s
384-wellblock:
1.0-4.8°
C/s1.0-2.5°
设定降温速率时的注意事项:
96模块:
目标温度在50°
C及以上,变温速率为2.2°
C/s.目标温度低于50°
C,变温速率为1.5°
C/s!
384模块:
C及以上,变温速率为2.5°
C,变温速率为2.0°
屏幕下方的Overview一栏中,将同步出现温度变化的曲线,并以绿色圆点标识荧光的获取位置。
(二样本的编辑
1、点击“SampleEditor”模块
2、点击“General”样品列表,可输入样品的基本信息。
3、选择以将要进行的分析命名的样品列表,输入相应的样品信息。
SampleType:
AbsQuant:
unknown,standard
Genotyping:
unknown,Positivecontrol,Negativecontrol,MeltingStandard
RelQuant:
targetunknown,targetcalibrator,targetstandard,targetnegative,referenceunknown,referencecalibrator,referencestandard,reference
negative
Colorcomp:
water,选定的检测通道
4、点击“SubsetEditor”可进行子集编辑
4.1点击‘New‘,命名一个子集,拖动鼠标选定区域后点击‘Apply’确认;
取
消选定区域时,先点击“Clear”再点击“Apply”完成。
4.2使用‘Copy’、‘Rename’、‘Delete’模块复制,重命名或删除一个子集。
*编辑时可用CtrlC和CtrlV进行复制和粘贴
*可使用“PropertyEditor”功能进行子集样品信息的快速编辑。
*样品信息的编辑可在程序运行前,运行中或结束后进行
(三程序的运行
1、点击“Experiment”模块,回到程序设定界面。
2、如果已经加载样本,则窗口右下方的“StartRun”为可点击状态,点击即开始
运行。
若未加载样本,则该模块显示为灰色,只有在加载样本后才变成激活状
态。
3、结果保存窗口自动跳出,输入文件名并选择一个合适的路径保存。
4、自动进入程序运行界面。
程序运行过程中可随时中止当前的program进入下一个program,或者以10
的倍次增加循环数。
三、实验结果的分析
1、点击左侧“Analysis”模块
2、在“Creatnewanalysis”下拉框中选择分析的类型并双击:
AbsQuant/2nd
DerivativeMax,AbsQuant/FitPoints,ColorCompensation、Genotyping,Relative
Quantification或TmCalling
序,并可命名该分析。
4、分析:
4.1绝对定量分析:
自动法(2ndDerivativeMaximum二次最大导数法
点击“Calculate”查看结果
4.2绝对定量分析:
手动法(FitPoints
4.2.1选定分析范围。
默认为第一个至最后一个循环
4.2.2点击“NoiseBand”,调整噪音线位置,推荐采用“Noiseband(Fluro”
方法以上下移动噪音线位置的方式调整,调整时遵循以下四条原则:
(1在阴性线之上;
(2与所有曲线相交;
(3相交在平滑区;
(4
符合上述三条原则的情况下,噪音线的位置尽可能地低
4.2.3点击“Analysis”进行结果分析
4.2.4点击“Calculate”进行Cp值及标准曲线计算。
4.3相对定量分析
4.3.1在跳出的对话框中选择合适的选项:
推荐在AutoPair选择框前打勾
4.3.2如果是在同一RUN中包含有Reference,则直接进入后一
的界面;
如果Reference和Target不在同一块板上运行,
则调用外部Reference数据后进入后一界面。
4.3.3结果图中默认扩增效率为“2”;
如果要进行效率校准的相
对定量分析,并且relativestandard包含在本实验中,点
击“Calculate”进行标准曲线的计算。
4.3.4可分别点击‘Target’、‘Reference’、‘Paring’、‘Charts’
和‘Result’模块查看目标基因,参考基因,配对(如果
在4.3.1中没有选择AutoPair,则在此模块中进行手动配
对,图表和最后相对定量的结果。
(notes:
点击‘Result’、
‘Paring’或‘Charts’模块中任意一个‘Calculate’就可
得到计算结果
4.4.1根据实际情况,选择Standards
Saveasext:
将本次实验的标准曲线存为外标准曲线
AutoGroup:
自动分组
In-run:
标准品包含在本次实验中
External:
调用外标准曲线
4.4.2点击‘Calculate’进行结果计算
4.5Tmcalling
4.5.1确认熔解曲线峰的数目
4.5.2选择所用的检测模式
4.5.3点击“Calculate”进行结果计算,并通过选择下述各项查
看各熔解峰的详细情况
四、结果报告
a保存实验数据后,在链接有打印机的情况下,“Report”模块变成激活状态
b点击“Report”
c在树形folder中选择报告所需的内容
d点击“Generate”产生报告并打印
第三部分数据管理及模块化操作
一、历史数据的处理
(一查看
1、选择窗口右侧的“Navigator”
2、树形folder中选择需要打开的文件名
3、双击或点击下方的“Open”打开文件
(二数据的导入和导出
2、利用窗口下方的“Import”、“Export”、“Batchimport”、“Batchexport”分别完
成单个文件的导入、导出及多个文件的同时导入、导出。
二、应用Template和Macros简化实验流程
(一Template
“Analysis”,“Report”,“Experiment”,“SampleEditor”及“SubsetEditor”界面的左下方,有一“ApplyTemplate”的模块,点击其下拉框,出现“SaveAsTemplate”模块,点击该模块,跳出一个保存路径的对话框,输入文件名、选择合适的路径并确认,则相应界面的Template成功保存。
应用某一Templet,则点击“ApplyTemplate”,在跳出的对话框中选择相应的文件名并确认即可。
(二Macros
“Sum”界面中点击“Saveasmacro”,跳出的对话框中输入文件名,选择合适的
路径并确认。
应用某一Macros,则点击“Overview”
选择所需的Macros文件并点击“Run
macros”
第四部分用户管理
一、建立新的帐号
(一点击“Tools”
(二点击UserAccess文件夹中的UsersandGroups
(三点击“New”增加用户,并设定用户名、密码并选择用户等级
第五第五部分部分日常维护
仪器外壳,热循环模块及热盖可用70%的酒精清洁。
Notes:
务必在切断电源,关机状态下进行清洁工作。
第六第六部分部分Troubleshooting
可能出现的系统信息及出错代码信息请参考如下列表:
一、系统提示信息
二、软件报错代码信息
三、硬件报错代码信息
480系统快速操作指南注意:
未尽处请参考随仪器附赠英文版说明书。
注意未尽处请参考随仪器附赠英文版说明书。
未尽随仪器附赠英文版说明书R20罗氏诊断产品(上海)有限公司应用科学部/分子诊断部中国上海200031
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- 特殊限制:
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- LightCycler480 系统 操作 快速 指南 21