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3、斐林试剂甲、乙两液的使用方法?
混合的目的?
为何要现混现用?
混合后使用;
产生氢氧化铜;
氢氧化铜不稳定。
4、还原性糖中加入斐林试剂后,溶液颜色变化的顺序为:
白色→浅蓝色→棕色→砖红色
5、花生种子切片为何要薄?
只有很薄的切片,才能透光,而用于显微镜的观察。
6、转动细准焦螺旋时,若花生切片的细胞总有一部分清晰,另一部分模糊,其原因一般是什么?
切片的厚薄不均匀。
7、脂肪鉴定中乙醇作用?
洗去浮色。
8、双缩脲试剂A、B两液是否混合后用?
先加A液的目的。
怎样通过对比看颜色变化?
不能混合;
先加A液的目的是使溶液呈碱性;
先留出一些大豆组织样液做对比。
实验二:
观察DNA和RNA在细胞中的分布
一、实验原理:
1、真核细胞的DNA主要分布在细胞核内,RNA主要分布在细胞质中。
2、甲基绿对DNA亲和力强,使DNA显现出绿色,而吡罗红对RNA的亲和力强,使RNA呈现出红色。
用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。
3、盐酸的作用
①改变细胞膜的通透性,加速染色剂的跨膜运输;
②使染色体中的DNA与蛋白质分离,便于DNA与染色剂的结合
二、实验材料:
人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶内表皮细胞
三、方法步骤:
1、取材
①滴:
在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液;
②刮:
用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下;
③涂:
将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中;
④烘:
将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。
2、水解
①解:
将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中,进行材料的水解;
②保:
将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。
3、冲洗涂片
①冲:
用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟;
②吸:
用吸水纸吸去载玻片上的水分。
4、染色
①染:
用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上,染色5分钟;
吸去多余染色剂;
③盖:
盖上盖玻片。
5、观察
①低:
在低倍物镜下,寻找染色均匀,色泽浅的区域,移至视野中央,将物像调节清晰;
②高:
转到高倍物镜,调节细准焦螺旋,观察细胞核和细胞质的染色情况。
四、考点提示:
1、为什么取口腔上皮细胞之前,应先漱口?
答:
以避免装片中出现太多的杂质;
(防止混杂食物碎屑)
2、为什么取洋葱表皮细胞时,尽量避免材料上带有叶肉组织细胞?
防止颜色干扰。
3、为什么冲洗载玻片时水的流速要用缓水流?
防止冲走细胞。
切忌直接用水龙头冲洗。
4、为什么用酒精灯烘烤载玻片时,不能只集中于材料处,而应将载玻片在火焰上来回移动?
使载玻片均匀受热,以免破裂;
实验三:
体验制备细胞膜的方法
细胞膜的流动性和选择透过性
哺乳动物成熟的红细胞稀释液(血液加适量的生理盐水)
1、用试管吸取少量红细胞稀释液,滴一小滴在载玻片上,盖上盖玻片,制成临时装片
2、在高倍镜下观察,待观察清晰时,在盖玻片的一侧滴一滴蒸馏水,同时在另一侧用吸水纸小心吸引,注意不要把细胞吸跑。
上述操作均在载物台上进行,并持续观察细胞的变化。
可以看到近水的部分红细胞发生变化;
凹陷消失,细胞体积增大,很快细胞破裂,内容物流出。
1、选择动物细胞进行实验的原因:
动物细胞无细胞壁。
2、选择哺乳动物成熟红细胞进行实验的原因:
哺乳动物成熟红细胞无细胞核和众多的细胞器(膜),可以得到较纯净的细胞膜。
3、细胞破裂后,用什么方法获得较纯的细胞膜:
将涨破的细胞溶液,经过离心分离得到细胞膜。
4、稀释及稀释的时候用生理盐水的原因:
稀释后,可以减少血液中的血浆蛋白等杂物。
用生理盐水是为了保持渗透压,防止在稀释的时候就发生细胞破裂。
实验四:
用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体和细胞质的流动
一.实验目的:
使用高倍镜观察叶绿体(原色观察)和线粒体的形态分布。
二.实验材料:
观察叶绿体时选用:
藓类的叶、黑藻的叶;
取材原因:
叶子薄而小,叶绿体清楚,可取整个小叶直接制片,所以作为实验的首选材料。
若用菠菜叶作实验材料,要取菠菜叶的下表皮并稍带些叶肉。
因为表皮细胞不含叶绿体。
观察线粒体用:
口腔上皮细胞或洋葱内表皮细胞。
三.方法步骤:
1.制片。
用镊子取一片黑藻的小叶,放入载玻片的水滴中,盖上盖玻片。
制片和镜检时,临时装片中的叶片不能放干了,要随时保持有水状态
否则细胞或叶绿体失水收缩,将影响对叶绿体形态和分布的观察。
2.低倍镜下找到叶片细胞
3.高倍镜下观察叶绿体的形态和分布
4.制作人的口腔上皮细胞临时装片
在洁净载玻片中央滴一滴健那绿染液→用牙签取碎屑→盖盖玻片
5.观察线粒体:
蓝绿色的是线粒体,细胞质接近无色。
四.考点提示
1.为什么可直接取用藓类的小叶,而不能直接取用菠菜叶?
因为藓类的小叶很薄,只有一层细胞组成,而菠菜叶由很多层细胞构成。
2.取用菠菜叶的下表皮时,为何要稍带些叶肉?
表皮细胞除保卫细胞外,一般不含叶绿体,而叶肉细胞含较多的叶绿体。
3.怎样加快黑藻细胞质的流动速度?
最适温度是多少?
进行光照、提高水温、切伤部分叶片;
25℃左右。
4.若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针,则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是怎样的?
仍为顺时针。
5.是否一般细胞的细胞质不流动,只有黑藻等少数植物的细胞质才流动?
否,活细胞的细胞质都是流动的。
6.若观察植物根毛细胞细胞质的流动,则对显微镜的视野亮度应如何调节?
视野应适当调暗一些,可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。
7.细胞质基质中的叶绿体,是不是静止不动的?
为什么?
不是。
呈椭球体形的叶绿体在不同光照条件下可以运动,这种运动能随时改变椭球体的方向,使叶绿体既能接受较多光照,又不至于被强光灼伤。
8.叶绿体的形态和分布,与叶绿体的功能有什么关系?
叶绿体的形态和分布都有利于接受光照,完成光合作用。
如叶绿体在不同光照条件下改变方向。
又如叶子上面的叶肉细胞中的叶绿体比下面的多,这可以接受更多的光照。
实验五:
植物细胞的吸水和失水
1、条件:
细胞内外溶液具有浓度差,活细胞,大液泡
2、材料:
紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞(具紫色大液泡),质量浓度0.3g/mL的蔗糖溶液,清水等。
制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一侧滴蔗糖溶液,另一侧用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小,颜色由浅变深,原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一侧滴清水,另一侧用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原)
4、结论:
细胞外溶液浓度>细胞内溶液浓度,细胞失水质壁分离
细胞外溶液浓度<细胞内溶液浓度,细胞吸水质壁分离复原
5、考点提示
(1)洋葱为何要选紫色的?
若紫色过淡怎么办?
紫色的洋葱有紫色的大液泡,便于观察液泡的大小变化;
缩小光圈,使视野变暗些。
(2)洋葱表皮应撕还是削?
为何?
表皮应撕不能削,因为削的表皮往往太厚。
(3)植物细胞为何会出现质壁分离?
动物细胞会吗?
当细胞失去水分时,其原生质层的伸缩性大于细胞壁的伸缩性;
动物细胞不会发生质壁分离,因为动物细胞没有细胞壁。
(4)质壁分离时,液泡大小和颜色的变化?
复原时呢?
细胞发生质壁分离时,液泡变小,紫色加深;
当细胞质壁分离复原时,液泡变大,紫色变浅。
(5)若发生质壁分离后的细胞,不能发生质壁分离复原,其原因是什么?
细胞已经死亡(可能是外界溶液浓度过大,细胞失水过多或质壁分离时间过长)
(6)高倍镜使用前,装片如何移动?
若要把视野中上方的物像移到视野的正中心,则要将装片继续向上移动。
若要把视野中左方的物像移到视野的正中心,则要将装片继续向左方移动,因为显微镜视野中看到的是倒像。
(7)换高倍物镜后,怎样使物像清晰?
视野明暗度会怎样变化?
如何调亮?
换高倍物镜后,应调节细准焦螺旋使物像变得清晰;
视野会变暗,可调大光圈或改用反光镜的凹面镜来使视野变亮。
(8)所用目镜、物镜的长度与放大倍数的关系?
目镜越长,放大倍数越小;
物镜越长,放大倍数越大。
(9)物像清晰后,物镜与载玻片之间的距离和放大倍数的关系?
物镜与载玻片之间的距离越小,放大倍数越大。
(10)总放大倍数的计算方法?
放大倍数具体指面积的放大倍数还是长度的放大倍数?
总放大倍数等于目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积;
放大倍数是指长度或宽度的放大倍数。
(11)放大倍数与视野中细胞大小、多少、视野明暗的关系?
放大倍数越大,视野中细胞越大、数目越少、视野越暗。
(12)更换目镜,若异物消失,则异物在目镜上;
更换物镜,若异物消失,则异物在物镜上、移动载玻片,若异物移动,则异物在载玻片上。
(13)怎样利用质壁分离现象来测定植物细胞液的浓度?
①配制一系列浓度从小到大的蔗糖溶液②分别用以上不同浓度的溶液制成某植物细胞的临时装片③用显微镜观察某植物细胞是否发生质壁分离。
某植物细胞液的浓度就介于不能引起质壁分离的浓度和能引起质壁分离的浓度之间。
实验六:
比较过氧化氢在不同条件下的分解
一、实验目的:
通过比较过氧化氢在不同条件下分解的快慢,了解过氧化氢酶的作用和意义
二、实验原理:
新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶,根据酶的专一性,可知其可以催化过氧化氢分解成水和氧。
1、取4支洁净试管,分别编号1,2,3,4,向试管内分别加入2ml过氧化氢溶液。
2、将2号试管放在90℃左右的水浴中加热,观察气泡情况,并与1号试管作比较。
3、向3号试管内滴入2滴FeCl3溶液,4号试管内滴入2滴肝脏研磨液,观察哪支试管产生的气泡多。
4、2至3min后,将点燃的卫生香分别放在3、4号试管内液面的上方,观察哪支试管中的卫生香燃烧更猛烈。
四、实验结论:
1、加热能促进H2O2的分解,提高反应速率;
2、酶有催化作用,与无机催化剂相比,酶具有高效性。
考点提示:
(1)为何要选新鲜的肝脏?
因为在不新鲜的肝脏中,过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。
(2)该实验中所用试管应选较粗的还是较细的?
应选用较粗的,因为在较细的试管中容易形成大量的气泡,而影响卫生香的复燃。
(3)为何要选动物的肝脏组织来做实验,其他动植物的组织的研磨液能替代吗?
因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富;
其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶,所以能够替代(如新鲜的马铃薯)。
(4)相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液,哪一个催化效果好?
研磨液效果好;
因为它增加过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积。
(5)滴入肝脏研磨液和氯化铁溶液时,可否共用1个吸管?
不可共用,防止过氧化氢酶与氯化铁混合,而影响实验效果。
实验七:
影响酶活性的条件
1.温度对酶活性的影响
(1)原理
①淀粉
麦芽糖
↓↓
蓝色 无蓝色出现
②温度影响酶的活性,从而影响淀粉的水解,滴加碘液,根据是否出现蓝色及蓝色的深浅来判断酶的活性。
(2)实验设计思路
(3)实验设计程序
淀粉 淀粉酶
↓ ↓
各自在所控制的温度下处理一段时间
↓
淀粉与相应温度的淀粉酶混合
在各自所控制的温度下保温一段时间
滴加碘液,观察颜色变化
(4)实验的变量分析
自变量
因变量
无关变量
温度
淀粉分解量的多少(用是否出现蓝色及蓝色深浅表示)
淀粉和淀粉酶的量、溶液的pH、反应时间等
(5)注意事项
本实验不宜选用斐林试剂,因为斐林试剂与还原糖只有在加热的条件下才有砖红色沉淀生成,而该实验需严格控制不同的温度。
本实验不宜选用H2O2酶,因为H2O2本身在不同的温度下的分解速度不同。
2.pH对酶活性的影响
①H2O2
H2O+O2
②pH影响酶的活性,从而影响O2的生成量,可用点燃但无火焰的卫生香燃烧的情况来检验O2生成量的多少。
(2)实验设计
检测
(3)实验设计程序
取n支试管→分别加入等量的质量分数为3%的过氧化氢溶液→用盐酸或NaOH溶液调整出不同的pH(如5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0)→分别滴加等量的同种新鲜的质量分数为20%的肝脏研磨液→用点燃但无火焰的卫生香来检验氧气的生成情况。
(4)注意事项
本实验中也可将H2O2酶和H2O2分别调至相应pH,再混合,以保证反应一开始便达到预设pH。
本实验不宜用淀粉酶,因为强酸强碱能影响淀粉水解。
实验八:
叶绿体中色素的提取和分离
1、初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。
2、探索叶绿体中有几种色素。
1、叶绿体中的色素能溶解在丙酮(无水乙醇等)中,所以用丙酮可提取叶绿体中色素。
2、色素在层析液中溶解度不同,溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得快,溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢,因而可用层析液将不同的色素分离。
(1)称取5g绿色叶片并剪碎研钵→研磨→漏斗过滤→
提取色素收集到试管内并塞紧管口
(2)加入少量SiO2、CaCO3和5ml丙酮
(1)将干燥的滤纸剪成6cm长,1cm宽的纸条,剪去一端两角
制滤纸条
(2)在距剪角一端1cm处用铅笔画线
(1)用毛细吸管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线
滤液划线
(2)干燥后重复划2-3次
(1)向烧杯中倒入3ml层析液(以层析液不没及滤液细线为准)
纸上层析
(2)将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁,轻轻插入层析液中
(3)用培养皿盖盖上烧杯
观察结果:
滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带(如下图)
(1)对叶片的要求?
为何要去掉叶柄和粗的叶脉?
绿色、最好是深绿色。
叶柄和叶脉中含色素少。
(2)二氧化硅的作用?
不加二氧化硅对实验有何影响?
为了使研磨充分。
不加二氧化硅,会使滤液和色素带的颜色变浅。
(3)丙酮的作用?
它可用什么来替代?
用水能替代吗?
溶解色素。
它可用无水乙醇等有机溶剂来代替,但不能用水来代替,因为色素不溶于水。
(4)碳酸钙的作用?
不加碳酸钙对实验有何影响?
保护色素,防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。
不加碳酸钙,滤液会变成黄绿色或褐色。
(5)研磨为何要迅速?
要充分?
过滤时为何用布不用滤纸?
研磨迅速,是为了防止丙酮大量挥发;
只有充分研磨,才能使大量色素溶解到丙酮中来。
色素不能通过滤纸,但能通过尼龙布。
(6)滤纸条为何要剪去两角?
防止两侧层析液扩散过快。
(7)为何不能用钢笔或圆珠笔画线?
因为钢笔水或圆珠笔油中含有其它色素,会影响色素的分离结果。
(8)滤液细线为何要直?
为何要重画几次?
防止色素带的重叠;
增加色素量,使色素带的颜色更深一些。
(9)滤液细线为何不能触到层析液?
防止色素溶解到层析液中。
(10)滤纸条上色素为何会分离?
由于不同的色素在层析液中的溶解度不同,因而它们随层析液在滤纸条上的扩散速度就不同。
(11)色素带最宽的是什么色素?
它在层析液中的溶解度比什么色素大一些?
最宽的色素带是叶绿素a,它的溶解度比叶绿素b大一些。
(12)滤纸条上相互间距最大的是哪两种色素?
胡萝卜素和叶黄素。
(13)色素带最窄的是第几条色素带?
第一条色素带,因为胡萝卜素在叶绿体的四种色素中含量最少。
(14)扩散最快的是?
胡萝卜素(橙黄色),扩散最慢的是?
叶绿素b(黄绿色)。
实验九:
探究酵母菌的呼吸方式
1、原理:
酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸,产生二氧化碳和水:
C6H12O6+6O2+6H2O6→6CO2+12H2O+能量(箭头上面标上“酶”)
在无氧条件下进行无氧呼吸,产生酒精和少量二氧化碳:
C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+少量能量(箭头上面标上“酶”)
2、装置:
下图为“探究酵母菌细胞呼吸的方式”的实验装置图,请据图分析
甲:
有氧呼吸装置 乙:
无氧呼吸装置
3、检测:
(1)检测CO2的产生:
使澄清石灰水变浑浊,或使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。
(2)检测酒精的产生:
橙色的重铬酸钾溶液,在酸性条件下与酒精发生反应,变成灰绿色。
实验十:
细胞大小与物质运输的关系
通过探究细胞大小,即细胞的表面积与体积之比(即细胞的相对表面积),与物质运输效率之间的关系,探讨细胞不能无限长大的原因
NaOH和酚酞相遇,呈紫红色。
1、用塑料餐刀将琼脂块切成三块边长分别为3cm、2cm、1cm的正方体
2、将三块琼脂块放在烧杯内,加入NaOH溶液,将琼脂块淹没,浸泡10min。
用塑料勺不时翻动琼脂块。
不要用勺子将琼脂块切开或挖动其表面
3、戴上手套,用塑料勺将琼脂块从NaOH溶液中取出,用纸巾把它们擦干,用塑料刀把琼脂块切成两半。
观察切面,测量每一块上NaOH扩散的深度。
纪录测量结果。
4、根据测量结果进行计算,并填写下表
琼脂块的边长/cm
表面积/cm2
体积/cm3
相对表面积
NaOH扩散的深度
比值(NaOH扩散的体积/整个琼脂块的体积)
3
2
1
琼脂块的表面积与体积之比随着琼脂块的增大而减小;
NaOH扩散的体积与整个琼脂块体积之比(扩散效率即物质运输速率)随着琼脂块的增大而减小
五、考点提示:
1、你认为细胞生长到一定程度时,采取什么办法可保证细胞代谢需要呢?
细胞生长到一定程度,将停止生长,转而进行细胞的分裂,这就摆脱了细胞生长带来相对表面积减小带来的困境,也是细胞增殖的原因之一。
2、除此以外,限制细胞长大的因素还有?
有核质比(细胞核与细胞质的体积比),外界的温度和营养物质的供应等条件
3、细胞为什么要分裂(或细胞为什么这么小)?
(1)增大细胞膜表面积与体积比,有利于物质的运输(营养吸收与废物排出)以保证细胞正常生命代谢需要。
(2)保证适宜的核质关系,使细胞质能在细胞核的控制范围内。
4、卵细胞是一种特殊的细胞,因为它含有许多供胚胎发育的营养物质——卵黄,而使细胞体积增大了许多倍。
但卵细胞一般与外界交换物质少,故表面积与体积的比例特殊。
实验十一:
观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
1、制作洋葱根尖细胞有丝分裂装片。
2、观察植物细胞有丝分裂的过程,识别有丝分裂的不同时期,比较细胞周期不同时期的时间长短。
3、绘制植物细胞有丝分裂简图。
1、高等植物的分生组织有丝分裂较旺盛。
2、有丝分裂各个时期细胞内染色体的形态和行为变化不同,可用高倍显微镜根据各个时期内染色体的变化情况,识别该细胞处于那个时期。
3、细胞核内的染色体易被碱性染料(如龙胆紫)染成深色。
1、洋葱根尖的培养在上实验课之前的3-4天,取洋葱一个,放在广口瓶上。
瓶内装满清水,让洋葱的底部接触到瓶内的水面。
把这个装置放在温暖的地方培养。
待根长约5cm,取生长健壮的根尖制成临时装片观察。
2、装片的制作
制作流程为:
解离—漂洗—染色—制片
过程
方法
时间
目的
解离
上午10时至下午2时,剪去洋葱根尖2-3mm,立即放入盛入有盐酸和酒精混合液(1:
1)的玻璃皿中,在温室下解离。
3-5min
用药液使组织中的细胞相互分离开来
漂洗
待根尖酥软后,用镊子取出,放入盛入清水的玻璃皿中漂洗。
约10min
洗去药液,防止解离过度
染色
把根尖放进盛有质量浓度为0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)的玻璃皿中染色。
染料能使染色体着色。
制片
用镊子将这段根尖取出来,放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子尖把根尖能碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片。
然后,用拇指轻轻的按压载玻片。
使细胞分散开来,有利于观察
3、观察
a低倍镜观察:
找到分生区细胞,其特点是细胞呈正方形,排列紧密,有的细胞正在分裂
b高倍镜观察:
在低倍镜观察的基础上换高倍镜,直到看清细胞的物象为止
c仔细观察:
先找中期,再找其余各期,注意染色体的特点
d移动观察:
慢慢移动装片,完整地观察各个时期,其中分裂间期的细胞数目最多。
(1)培养根尖时,为何要经常换水?
增加水中的氧气,防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。
(2)培养根尖时,应选用老洋葱还是新洋葱?
选用旧洋葱,新洋葱尚在休眠,不易生根。
(3)为何每条根只能用根尖?
取根尖的最佳时间是何时?
因为根尖分生区的细胞能进行有丝分裂;
上午10时到下午2时;
因为此时细胞分裂活跃。
(4)解离和压片的目的分别是什么?
压片时为何要再加一块载玻片?
解离是为了使细胞相互分离开来,压片是为了使细胞相互分散开来;
再加一块载玻片是为了受力
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