高效液相色谱法检测食品添加剂Word下载.docx
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标准混合液:
取各组分标准储备液各1ml,混合均匀后备用。
样品处理
选择市售饮料三种(科力福、醒目、非常甜橙)充分混匀后用虹吸法分层取样,每层各取50ml左右,装入小口瓶中混和均匀后超声波除气15min,用1:
9氨水调节pH,经μm水相滤膜过滤后,备用。
科力福:
取原样品液用原子水稀释5倍后,进行以上操作。
1.3色谱条件
C18柱颗粒度10um、柱温16摄氏度、检测波长230nm、流动相甲醇—乙酸氨(L)—溴化四丁铵L)配比35:
65:
4,pH,流速min,微量进样器定量进样20μl,实验以保留时间定性,外表物法定量。
2结果与讨论
2..1检测波长选择
用紫外—可见光分光光度计检测器,检测9种物质发现其在200nm—300nm范围内敏感波长分别为
山梨酸
糖精
咖啡因
苯甲酸
胭脂红
苋菜红
柠檬黄
VC
日落黄
260nm
202nm
206,273nm
229nm
215nm
216nm
257nm
262nm
234nm
兼顾九种组分在200nm—300nm的紫外吸收值,选择230nm为检测波长。
2..2流动相选择
实验:
以甲醇—乙酸氨作为流动相[1]对[组分进行分离,如图:
(1)甲醇—乙酸氨L=30:
70
图1添加剂组分拟合图
胭脂红和苯甲酸分离不开,且六种组分(VC、柠檬黄、日落黄、胭脂红、山梨酸、苯甲酸)出峰时间集中在范围内,不易于最终分离测定。
(2)甲醇—乙酸氨L=40:
60
图2添加剂组分拟合图
柠檬黄与苋菜红,出峰重叠;
胭脂红与日落黄,出峰重叠,分离效果不好,且组分峰比较集中,不易分离测定。
(3)甲醇—乙酸氨L=44:
56
图3添加剂组分拟合图
柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄四种物质出峰重叠;
苯甲酸、山梨酸出峰干扰,且各
组分出峰时间相对集中,不易于最终分离测定。
结论:
由以上三个图形显示,最佳流动相配比,介于甲醇—乙酸氨L[30:
70]至甲醇—乙酸氨L[40:
60]中间的一个配比,经实验摸索最终选择甲醇—乙酸氨L[35:
65]为最佳配比。
(4)甲醇—乙酸氨L=35:
65
图4添加剂组分拟合图
1-柠檬黄2-苋菜红3-日落黄4-VC5-胭脂红6-苯甲酸7-山梨酸8-咖啡因
由图4可知七种组分(1-柠檬黄2-苋菜红3-日落黄5-胭脂红6-苯甲酸7-山梨酸8-咖啡因)基本分离,但是出峰时间接近,易发生干扰。
拟解决方案:
添加改性剂
2..3添加改性剂溴化四丁铵,选择最佳添加量。
(1)甲醇—乙酸氨L)—溴化四丁铵L)配比35:
4
图5九种组分分离图
由图5知,加入改性剂后基本上能将九种物质分离。
(2)甲醇—乙酸氨L)—溴化四丁铵L)配比35:
图6九种组分分离图
由图6知,糖精与苋菜红峰重叠,分离效果不佳。
(3)甲醇—乙酸氨L)—溴化四丁铵L)配比35:
图7九种组分分离图
由图7知,糖精与苋菜红峰重叠且与苯甲酸峰重叠趋势增加
添加改性剂----溴化四丁铵能初步将九种物质分离,原因[2]:
由于中性条件下(pH=6左右)溴化四丁铵带有正电荷,可以促进带负电荷的日落黄、胭脂红出峰时间增长,从而达到分离组分的要求。
溴化四丁铵量不宜过多,否则日落黄与胭脂红峰重叠,糖精、苋菜红、苯甲酸峰重叠,因此远择流动相配比为:
甲醇-乙酸氨L)-溴化四丁铵L)=35:
问题:
9种组分,出峰时间相对比较集中。
调节流动相pH值
2..4流动相pH值选择
pH值主要决定流动相极性,调节9种组分出峰时间,能更好的将9种物质分离
(1)pH=7
图8九种组分分离图
由图8知,进混合样发现糖精与胭脂红峰重叠且与苯甲酸峰有重叠趋势,日落黄与胭脂红重叠,完全出峰时间13分钟
(2)pH=
图9九种组分分离图
苋菜红与糖精分离不好,完全出峰时间14分钟
(3)pH=6
图10九种组分分离图
苋菜红与糖精基本分离,完全出峰时间15分钟
(4)pH=
图11九种组分分离图
苋菜红与糖精基本分离,胭脂红与咖啡因重叠,完全出峰时间18分钟
(5)pH=5
图12九种组分分离图
苋菜红与糖精分离不开,苯甲酸与日落黄重叠,完全出峰时间20分钟
考虑到分离效果、检测时间与重现性,选择pH=,为最佳pH值。
对以上三个条件综合考虑,流动相最终确定为:
甲醇—乙酸氨(L)—溴化四丁铵L)配比为35:
4,pH=
2..5线性关系考察
将配制好的以下一系列标准溶液,以C(g/L)对相应的
(mv)作外标物曲线(表一),得到相应的回归方程及相关系数(表二):
表一
C(g/L)、
(mv)
C
1
363411
362352
109753
212817
214293
2
214830
224927
54592
120675
113185
3
148002
157982
29547
81527
78148
117203
115982
23535
68367
61791
5
92047
92123
54423
42905
6
75741
47039
37104
7
29398
241437
112758
288726
156085
181938
35519
218377
79184
137484
2400
169867
55293
114908
145554
39093
79938
32471
27649
22460
表2线性回归方程、相关系数
添加剂
线性回归方程LRE
相关系数(r)
Y=++005X
Y=++005x
注:
Y:
计算机给出的峰高响应值;
X:
组分质量浓度(g/L)
九种组分线形工作曲线图谱
2..6本方法准确度测试
取科力福、非常甜橙、醒目、绿茶样品,每个样品精确移取5ml置于10ml离心试管中,按本实验的方法处理及测定(n=3),以标准样品的测定结果作为本底值,结果见表4
表4样品中食品添加剂加标回收率(单位g/L)
食品添加剂
非常甜橙
本底值(g/L)
加标量(g/L)
测得值(g/L)
回收率(%)
RDS(%)
科力福(稀释液)
醒目
绿茶
2..7样品的测定结果
四种饮料按本实验的色谱条件进样分析,得到四种样品的添加剂含量如表5
表5四种样品中添加剂含量测定结果(n=3)单位(g/L)
样品
未检出
科力福原液
检出
非常甜橙分离图科力福浓缩橙汁分离图
醒目分离图绿茶分离图
3原因讨论:
实验过程中发现糖精、咖啡因、胭脂红、苋菜红的峰型有脱尾、前瞻现象,分析原因:
(1):
苯甲酸、山梨酸中混有杂质对分离峰型有影响。
(2):
在紫外吸收带(200nm~400nm)以外有最大吸收峰在不加入改性剂溴化四丁铵情况下,对本实验的九种组分出峰情况不产生干扰(附表2)。
但加入溴化四丁铵后,造成甲醇吸收峰红移结果导致流动相甲醇—乙酸氨L)—溴化四丁铵L)在205nm处有最大吸收峰值(附表3)其紫外吸收带宽度为200nm~250nm而九种被测组分紫外吸收波长范围均集中203nm~262nm处,其结果导致九种组分尤其是糖精、咖啡因、胭脂红、苋菜红(其最大吸收波长分别为203nm、213nm、215nm、216nm)影响较大,并在分离过程中造成分离峰脱尾、前瞻,造成分离峰形效果不佳。
本实验参考文献,均未考虑改性剂-溴化四丁铵的紫外吸收峰值对被测组分的干扰,因此造成本实验定量部分与实际值有所偏差,由于本人实验水平有限和实验时间的限制,未对本实验条件下最佳波长加以深入研究。
经过比较九种被测物质最大吸收波长及流动相吸收波长,得出结论:
在本实验条件下最佳波长范围为240nm~245nm处。
4结论:
采用HPLC法同时测定饮料中防腐剂、甜味剂、色素、VC、咖啡因含量,其重现性好、准确度较高,同时操作简便、快捷,能在15min内将九种添加剂基本分离,达到测定饮料样品的要求。
参考文献:
[1]反相高效液相色谱法同时快速测定食品中常见的8种食品添加剂:
张秀尧(浙江平阳县卫生防疫站)
[2]反相高效液相色谱法同时测定果汁中8种添加剂:
陈卫东,邵景东,邹建宏(张家港出入境检疫局)
[3]高效液相色谱法同时测定多种食品添加剂:
陈青川,于文莲,王静(中国进出口商品检验技术研究所②
[4]高效液相色谱法测定食品中防腐剂时样液PH值探讨:
马越峰(浙江省疾病预防控制中心)
[5]21世纪的分析化学:
科学出版社,汪尔康主编
[6]高效液相色谱方法及应用:
化学工业出版社,于世林主编
[7]高效液相色谱方法:
科学出版社,邹汉法等编着
[8]液相色谱检测方法:
化学工业出版社,张晓彤等编
致谢:
本论文是在指导教师孙欣老师悉心指导下完成的,从论文的选题、论文的写作、修改到校正,都得到了孙欣老师的帮助和关心。
在论文实验期间,孙欣老师在繁忙的情况下,给了我们无私、无限、无量的关怀和指导。
当我们在实验中碰到困难时,孙欣老师耐心与我们反复讨论研究。
孙欣老师饱满的工作热情、严谨的治学态度在指导实验过程中给了我们极大的鼓舞,使我们受益、值得我们学习。
另外,张兵建和刘铮两位同学也给了我很大帮助,在此一并感谢!
DeterminationofNighFoodAdditivesinFoodsbyHighPerformanceLiquidChromatographySimultaneously
Author:
2005NanQi
ThechemicaldepartmentofLangfangnormalcollege
tutor:
XinSun
Abstract:
ItisdescribedasimpleandrapidmethodforthedeterminationofnighfoodadditivesbyHPLC,Theyaresaccharin,benzoicacid,sorbicacid,VC,caffeine,sunsetyellow,ponceautartrazine,andamaranth.TheexperimentswerecarriedonC18withmethanol–20mmol/LNH4Ac-7mmoltetrabutylammoniumbromide(35:
4v/vasaflowrateofml/min.TheUVdetectionwavelengthwasfixedataveragerecoveriesofallthenighadditiveswerebetween%-101%,andtheRSDwerelowerthan9%(n=3).Theanalysisofasinglesamplerequired15min.Themethodhasbeensuccessfullyappliedtotheroutineanalysisoftheadditivesinfoods
Keyword:
highperformanceliquidchromatography(HPLC);
saccharin;
benzoicacid;
sorbicacid;
VC;
caffeine;
sunsetyellow;
ponceau;
tartrazine,andamaranth.
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- 高效 色谱 检测 食品添加剂