16骨髓涂片检查Word格式文档下载.docx
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骨髓细胞学检查是对各种血液系统疾病诊断或辅助诊断所必不可少的项目之一。
检查工作的特点是对血液细胞数量与质量作一客观的、准确的评价,并作相应的结论,提供临床有价值的信息。
1.数量与临床
(1)有核细胞的多少可反映骨髓增生程度,目前应用的五级分类法可简单地了解骨髓的造血机能,增生的程度往往与疾病的类别和性质有很大的关联。
增生极度活跃,常见于各种类型急、慢性白血病,增生明显活跃常见于各类型白血病、增生性贫血、原发性血小板减少性紫癜、脾功能亢进等。
增生活跃除正常造血以外尚可见部分类型的增生性贫血、淋巴肉瘤早期、多发性骨髓瘤等疾病。
增生减低可见于再生障碍性贫血和部分低增生型白血病。
各种恶性肿瘤、白血病等在化疗过程中骨髓增生被抑制。
增生极度减低,常见于再生障碍性贫血。
(2)骨髓粒红比例反映出粒红两系各自增生的程度,若比例增大,表明粒细胞系增多或红细胞系减少,常见于各类型白血病、纯红再障、类白反应等;
若比例减少说明红细胞系增多或粒细胞减少,常见于粒细胞缺乏症、白细胞减少症、各种增生性贫血、脾功能亢进、真性红细胞增多症、骨髓异常增生综合征(MDS)等,除此以外,尚有许多疾病粒红比例无明显改变。
如,再生障碍性贫血、多发性骨髓瘤、恶性组织细胞病、骨髓瘤转移、淋巴肉瘤等。
(3)巨核细胞的数量下降通常见于再生障碍性贫血、纯巨核细胞再生障碍,而增多则常见于ITP、MDS慢性粒细胞性白血病、脾功能亢进。
注意事项:
由于计数方法上的缺陷,误差较大,若对同一份标本应至少观察2~3张骨髓涂片,取其均值。
2.质量与临床
(1)血液细胞质量的改变:
应该包括细胞形态学、细胞组织化学、细胞组织免疫化学、细胞超微结构、细胞生物遗传及分子生物学等。
但是对细胞形态学的观察和分析的是一项最基本的较实用的项目,也是在目前尚无法用其它手段所能替代。
在观察时应根据细胞的形态、大小、胞浆、胞核等对其进行仔细的分析和比较。
(2)细胞大小与形态异常:
较正常细胞体积大的病理改变为巨幼细胞性贫血、骨髓增生异常综合征、白血病和白血病化疗期间、重症感染等;
反之细胞体积变小的疾病有:
缺铁性贫血、骨髓增生异常综合征、白血病等,细胞外形变化可见伪足形、手镜形、多毛形、不规则形以及成熟红细胞的椭圆形、球形、靶形、滴形、棘形等。
胞浆异常主要体现在染色性、颗粒、空泡等。
染色性异常可见于:
缺铁性贫皿、遗传性球形红细胞增多症、巨幼细胞性贫血、急性白血病中常见的内外浆、多发性骨髓瘤、传染性单核细胞增多症、各种严重病毒感染。
颗粒异常可见于:
感染、类白血病、急性髓系白血病AML—M1.M2.M3.M4.M5.M6中的粒细胞减少和缺乏症、重金属中毒、白血病化疗期间、MDS、脾亢、各种类型贫血。
空泡异常出现可见于:
中毒、感染、灼伤、ITP、MDS、ALL-L3.和AML-M3和M5淋巴瘤等。
(3)胞核的变化主要体现在核形和成熟度,常见核形异常的疾病:
感染、中毒、溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、MDS、白血病和白血病化疗期间、淋巴瘤、恶性组织细胞瘤、多发性骨髓瘤等。
核成熟度异常可见于病毒感染、巨幼红细胞性贫血、MDS、慢性感染、先天性Pelger-
Hiiet畸形、脾亢、白血病、多发性骨髓瘤等疾病。
(4)在对血液细胞形态进行检测时,如能结合其它检测方法和检测结果,将进一步有助于对细胞形态的全面分析与辨认,如:
增生性骨髓依据形态学:
结合铁染色和有关铁代谢检测对缺铁性贫血作出诊断。
结合维生素BⅢ与叶酸检测对巨幼红细胞性贫血作出诊断。
结合对红细胞膜有关检测,对红细胞酶有关检测,对红细胞中异常血红蛋白有关检测,对破坏红细胞的抗体和补体有关检测,可对各种原因所致的溶血性贫血作出诊断,并加以分型。
结合幼红细胞PAS、NAP铁染色和免疫组化PCN等有关检测,对骨髓增生异常综合征和铁粒幼红细胞贫血作出诊断和鉴别诊断。
结合临床,外周血检查、细胞化学染色、细胞遗传学、骨髓活检等可对骨髓增生性疾病作出诊断和鉴别诊断。
结合临床和有关血小板膜糖蛋白自身抗体测定,血小板计数、出血时间、血小板寿命测定等,可对ITP作出诊断。
结合外周血检测,细胞免疫表型检测,血清学(EB病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒等)检测,可对传染性单核细胞增多症和传染性淋巴细胞增多症作出诊断。
结合细胞化学染色、细胞免疫表型检测、细胞遗传学、分子生物学等。
可对各型急、慢性白血病作出诊断和鉴别诊断。
结合细胞化学染色、X一线摄片、血清免疫球蛋白测定、细胞免疫表型检测,可对原发性巨球蛋白血症和多发性骨髓瘤作出诊断和鉴别诊断。
结合临床,细胞化学染色、骨髓病理活检、细胞免疫表型检测、分子生物学检测等可对淋巴肉瘤和恶性组织细胞病作出诊断和鉴别诊断。
增生减低型骨髓象依据形态学结合临床,外周血检查、细胞化学染色、骨髓病理活检等,可对再生障碍性贫血作出诊断。
结合临床,外周血检查、同位素标记、血浆溶菌酶等检测,可对白细胞减少和粒细胞缺乏症作出诊断。
结合临床,细胞化学染色、免疫表型检测、细胞遗传学、分子生物学等检测,可对各型低增生型白血病作出诊断和分型。
3.影响因素
(1)良好的涂片,满意的染色效果是骨髓涂片检查的首要条件,涂片要求头、体、尾分明,髓小体丰富,脂肪滴可见,染色勿偏酸和硷,染液冲洗要干净,勿留残渣于涂片上,如标本量允许可染色2~3张涂片,以利观察时挑选。
(2)观察涂片要求全面、仔细,对整张涂片用低或高倍镜认真地观察,特别对尾部和边缘部分用油镜分类时须选择细胞分布均匀、互不重叠、结构清楚的区域以不重复走向进行。
(3)在辨认细胞过程中,对每个细胞均应由表及里、全面分析,分清系列、阶段有否异
常,如遇分类不明细胞时,要多观察几张涂片,并结合其它辅助检测手段,直至搞清。
(4)根据形态出报告时,应十分慎重,在下结论以前,要了解患者的临床情况,外周血各项指数,结合有关检测报告结果,特别是对各科类型的恶性疾病如:
白血病、淋巴瘤、再障、癌转移等,一定要综合考虑,不能单凭经验和主观推断。
骨髓活检
正常骨髓活检切片中包括造血组织,骨质以及间质等三大类组织形态结构。
其中造血组织主要是指红系、粒系和巨核细胞系,外加淋巴细胞、浆细胞、单核细胞,肥大细胞和网状细胞所组成的混合体。
幼红细胞簇(岛)常定位于小梁间区内静脉窦窦壁四周,粒系细胞主要位于远离脉窦之造血索状组织深部,一般为原粒及早幼粒细胞,常单个(不超过2个)分布于小梁旁以及小动脉和微动脉四周,较成熟时定位于小梁间区,巨核细胞一般聚集于静脉窦窦壁外,也常分布于全骨髓切片的不同部位,淋巴细胞和单核细胞定位于造血骨质小动脉的四周。
活检切片中的骨质即有皮质骨和网状骨质两种构形的骨小梁,切片内的脂肪细胞,血管系统,神经纤维,结缔组织间充质(基质)、网状纤维支架以及网状一巨噬细胞实体共同构成造血组织周围的间质。
骨髓活组织切片能提供较为完整的骨髓组织学结构比抽取物涂片更为精确地决定骨髓全面增生度,判断血细胞,脂肪细胞,骨小梁,血管构形和结缔组织基质问的解剖学关系,对临床诊断很有帮助。
如对某些仅能导致骨髓局灶型病变为特征的疾患,诸如何杰金病和非何杰金淋巴瘤,多发性骨髓瘤,淀粉样变性转移瘤和肉芽肿病时,骨髓活检尤为重要。
再则,为明确“干抽”的原因,探讨血细胞减少患者是真性增生低下(再障),或是骨髓纤维组织增生,还是髓腔因增生极度活跃而致的“塞实"
,所致骨髓活检在这当中具有独到作用。
实践证明,当遇到非技术原因的骨髓涂片细胞增生低下者,骨髓活检有助于再障、骨纤、骨髓增生异常综合征(MDS)以及部分急性白血病的鉴别。
如再障:
切片造血组织占<
20%,脂肪组织比例增高,且切片内“Hotsport(热点)"
消失,网硬蛋白银染色为阴性;
而骨纤:
切片造血组织占>
80%,网硬蛋白银染色(++~++++),Masson三元染色呈弱阳性或阳性;
MDS患者的切片造血组织大部分占50%以上,少部分(约10%)为<
30%,且切片内可见幼稚前体细胞异常定位(ALIP)网硬蛋白银染色(+)以上。
急性白血病:
由于白血病细胞与基质粘着力强,且有纤维组织增生,不易抽吸出,此时活检切片可见造血组织占90%以上,见大量白血病细胞弥漫分布,脂肪组织几乎消失。
除此以外,骨髓活检对急性髓细胞性白血病化疗效果的评价以及骨髓移植前后的动态观察均有重要意义。
当同时获得涂片与活检双标本时,经过观察,涂片达完全缓解(CR)标准,但切片可检出数量不等的髓系幼稚前体细胞异常定位(ALIP),涂片与切片相矛盾,以切片法为准,应继续给予巩固性化疗,直至切片法中此种异常定位消失,即真正达到5~6个对数级白血病细胞杀伤为止,才可断定AMI。
进入真正而充分的缓解期。
此外,骨髓活检可判断AML有无早期复发,切片比涂片更有指标作用。
同时获取的双标本,涂片细胞计数未达复发标准,而切片内出现ALIP提示已进入早期复发,应及时作再诱导处理。
随着标本制作方法的改良,新技术的应用,对临床诊断价值越来越受到临床医生的关注,如AML,涂片达CR标准,切片残留ALIP,此时用免疫组化法证实CD34+的ALIP比CD33+的ALIP达CR慢,愈后差,复发快。
另外,通过免疫组化法对Hb糖蛋白检测,有利鉴别切片上的幼红细胞簇和淋巴小结,为临床提供诊断依据。
此外骨髓活检在判断骨髓铁的贮存及骨病本身都能提供有意义的资料。
在实际操作中,取材部位以髂后为好,因髂后的髓腔>
髂前,以保证标本可靠性。
在一步法取双标本时,当抽取髓液涂片后,应将活检针稍退后,另换角度取活检,避免标本出血和人为的造血组织增生度减低。
另外,在标本的处理过程中,注意固定的时间,脱水时乙醇的浓度、温度、时间;
包埋液的混匀,切片刀的角度等,以免组织脱落,而无法提供活检标本的构型。
骨髓涂片细胞化学染色
细胞化学染色是将形态和功能相结合的细胞科学。
它是在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下,运用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构及生理活性物质原位地显示。
因而对于探索化学成分、生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要的意义。
组织细胞染色的范围一般可分为:
蛋白质类(氨基酸)、核酸类、多糖类、脂类、盐类或金属类,采用的方法通常为化学结合物理溶解显示及酶一底物反应。
1.细胞化学染色的开展,已有数十年的历史。
其在结合细胞形态学的基础上对各类白血病的确诊,对许多血液疾病鉴别诊断中的帮助,对各种良、恶性血液系统疾病疗效和预后估计提供一定的信息。
2.血液系统各种恶性疾病,特别是急性白血病,因其多为早期分化较差的病理细胞增殖,客观上存在着形态变异、畸形发育,即使是有经验的检验人员,如单凭细胞形态也难以避免错误的诊断,如将细胞形态和细胞化学染色相结合,能提高急性白血病的诊断和较正确地对其分型及亚型分型,即为急性白血病FAB分型。
3.近年来,由于细胞免疫学、细胞遗传学、分子生物学和细胞超微结构等迅速发展,进一步推动了细胞化学染色这一领域的进展,并出现了细胞免疫组织化学染色、细胞超微化学染色等更新、更准确的检验方法与手段,对探讨各类血液疾病发病原理和观察治疗反应及预后起了极其重要的作用。
如将细胞免疫化学、细胞遗传学、分子生物学这三者与细胞化学染色及细胞形态学相结合,对各种白血病进行分型,即成为白血病的MICM分型诊断。
4.细胞化学染色方法分门别类有许多种,结果的显示也不尽相同,有时即使是检测同一物质,因采取的方法不同,其结果有可能存在一定的偏差,另一些是由于方法学上本身的缺陷,其结果也可能产生误差,所以我们应注意选择结果稳定、方法简便(操作步骤越繁复,结果出现误差的可能性就越多),阳性显示明显的细胞化学染色方法或者采用同工酶组合观察(非特异性酯酶类),如果条件允许可与细胞免疫化学、细胞遗传学、分子生物学等相结合,使细胞化学染色发挥最大、最准确的作用。
过氧化物酶
参考范围:
正常阳性细胞:
1.中性粒细胞呈均匀颗粒状蓝黑色阳性。
2.嗜酸性粒细胞呈均匀粗大颗粒状蓝色阳性。
3.单核细胞呈弥散细颗粒状蓝色阳性。
1.血细胞中的过氧化物酶主要为髓过氧化物酶,在血液和骨髓细胞中,在粒细胞系和单核细胞系的嗜苯胺蓝颗粒(“A"
颗粒)内的溶酶体中存在有过氧化物酶。
此酶的活性和多少与溶酶体的数量有关,而与“A”颗粒的多少无关。
因淋巴细胞浆中也有嗜苯胺蓝颗粒,但因为此颗粒中不存在溶酶体,所以过氧化酶染色呈阴性反应,正常人群中性粒细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞呈阳性反应。
淋巴细胞、巨核细胞、红细胞等均呈阴性反应。
2.病理变化.
(1)酶活性增高可见于再生障碍性贫血、急性粒细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、放射病、嗜硷粒细胞在慢性粒细胞性白血病时可出现阳性。
(2)酶活性减低可见于某些肿瘤、MDS、链球菌感染、风湿热等。
(3)酶活性缺乏可见于:
a.(MPO)髓过氧化物酶缺乏引起中性粒细胞和单核细胞POX呈阴性,仅在涂片中见少数早幼粒细胞呈弱阳性反应。
b.乳过氧化物酶缺乏引起的嗜酸粒细胞POX呈阴性。
3.POX染色在对各种类型急性白血病的分型中极具意义
(1)通常将其染色阳性率3%作为淋与非淋的分界标准。
但需注意在淋巴细胞白血病时原始粒和单核细胞有时也会超过3%,此时应慎重考虑,结合形态反复观察。
(2)若POX染色阳性且强度较高可结合细胞化学染色、细胞免疫表型检测,遗传学和分子生物学检测对各种急性髓性白血病进行分型或亚型间的区别,特别有助于M1与M5a、M2b与M3b及M4型亚型的鉴别。
(3)若POX染色呈阴性反应,必须结合其它细胞化学染色、细胞免疫表型,遗传学和分子生物学,首先分清淋和非淋系统的恶性增生,或者是双表型及干细胞型。
另外需鉴别M0、M5a、M7、L2等白血病,特别需搞清的是M0与L3、M5a与L2、干细胞与L3等之间的区别。
4.注意事项
(1)标本要求新鲜,亦可使用某些抗凝血剂(肝素、EDTA)。
(2)溶血的标本不宜使用,因涂片中含大量游离血红蛋白易使背景产生许多难以去除的杂质颗粒。
(3)标本在未染色前不能沾有甲醇和氧化剂类试剂,以免细胞内的过氧化物酶被抑制和破坏。
(4)过氧化物酶属弱酸性水解酶,其酶反应的最佳pH一般在6.5左右,试剂若将应用液控制在此pH则染色效果较佳。
(5)过氧化氢液体的浓度过高和过低均将使阳性程度减弱。
特别是过高能抑制和破坏酶的活性,细胞中的强阳性反应只显示出淡黄色、且成熟红细胞呈青灰色,无法正确判断结果。
(6)每次染色均应设阴、阳性标本对照,如有疑问,需要复测。
(7)有关苯胺的致癌作用,在试剂配制时应注意在通风柜内称量。
目前市售国产联苯胺,因难溶于水,随着配制时溶解时间的延长,部分会被氧化,影响反应的敏感性。
如采用95%乙醇作溶剂,即可快速溶解联苯时,又可省却固定这一步。
苏丹黑B
粒细胞除原粒细胞外,均可见颗粒状黑色阳性,其中中性粒细胞阳性颗粒与S颗粒的分布相一致,嗜酸粒细胞呈泡状阳性。
单核细胞大多呈弱阳性反应,其颗粒细小,散在分布。
巨核细胞和血小板呈黑色阳性反应。
1.苏丹黑是对脂类物质进行染色,而脂类物质所包括的种类较为广泛,如中性脂肪、糖脂、磷脂和胆固醇等,脂质除构成单位膜结构外,亦具有与过氧化酶一起构成防卫功能,一般认为SB染色与POX结果相似,但因二者染色原理不同,SB较POX更敏感。
所以POX染色尚不能完全替代SB染色。
2.SB染色主要应用于各种急性白血病鉴别,如与PAS染色相结合特别有助于急淋与急非淋之间的区别,比POX染色更敏感,如与免疫表型检测有助于Mo、M1、M5a等急性白血病的鉴别。
慢性粒细胞性白血病可见反应减弱;
何杰金病可见阳性减弱;
恶性贫血呈阳性减弱;
高雪细胞呈弱阳性;
尼曼-匹克细胞呈中等阳性。
再生障碍性贫血时阳性增多。
3.注意事项
(1)本实验是测定胞浆内的含脂类物质,故陈旧涂片也可使用。
(2)为避免部分脂肪溶解,涂片在染色前勿沾上丙酮、乙醚、氯仿等溶剂。
(3)苯酚极易潮解,称量非常困难,可将石炭酸先置60℃水浴溶化,再用烧杯称取16g,但慎防苯酚烧伤皮肤。
(4)苏丹黑B贮存液为无水乙醇所配,易挥发,所以容器封闭性能要好,并置4℃冰箱保存。
(5)缓冲液配置后为乳白色混合液,静置后会产生上下分层现象,但在临用前混匀即可,对结果无影响。
(6)复染如采用瑞氏染色液可与POX染色相结合观察结果,但此染色的复染要求时间较长,一般室温需染20~30分钟,冬天可适当延长。
中性粒细胞碱性磷酸酶
中性粒细胞碱性磷酸酶活力正常范围2%~56%,积分4~80分/100个中性粒细胞
1.中性粒细胞碱性磷酸酶是中性粒细胞中的特异性颗粒(“S"
颗粒)所释放的一种酶,存在于细胞浆内的三级颗粒中呈不规则形的管状结构,该酶的活力与积分受到体内许多因素的影响。
如中性粒细胞的成熟程度、HbF、内分泌功能等均能使NAP的积分产生一定的差异,但正常人群中性粒细胞的阳性程度一般很少达到3分,绝对达不到4分。
2.NAP积分增高多见于
(1)细菌感染,凡革兰阳性球菌感染、NAP活力显著升高。
(2)真性红细胞增多症,NAP活力持续增加,且治疗后未见能恢复正常。
(3)再生障碍性贫血,NAP活力持续增加,经治疗缓解时可有下降趋势。
(4)类白血病,由化脓性球菌引起的类白反应,NAP活力明显升高。
(5)急性淋巴细胞性白血病可见NAP中度增加,而多发性骨髓瘤则活力显著提高。
(6)其它类型如烧伤、中毒、手术后、外伤等均可使NAP活力升高。
3.NAP积分降低
(1)粒细胞缺乏症、脾亢等疾病时NAP活力下降。
(2)感染,由革兰阴性杆菌、结核、病毒、立克次体病等NAP活力可明显或重度减低。
(3)白血病,单核细胞和粒细胞系统白血病,特别是慢性粒细胞白血病NAP活力明显减低甚至消失。
4.若配合染色体检查及分子生物学诊断技术可提高慢性粒细胞白血病的诊断;
配合酸溶血试验,尿含铁血黄素试验可提高PNH的诊断及有利于PNH与再生障碍性贫血的鉴别;
配合其它细胞化学染色可辅助鉴别急性淋巴细胞性白血病与急性非淋巴细胞性白血病。
5.影响因素
(1)年龄变化:
新生儿NAP活性较高,以后逐渐下降。
(2)应激状态:
紧张、恐惧、激烈运动等NAP积分可增高。
(3)妊娠和月经周期的变化也可使NAP的活力有所差异。
(4)药物所致,特别是激素类如肾上腺皮质激素、雌激素等均可使NAP积分增高。
(5)标本要求新鲜,若不及时染色,可先将涂片固定置三天左右结果无明显差异。
(6)固定液须低温(4℃)使用,否则易使细胞破碎、酶扩散,积分可下降。
(7)α-磷酸萘酚钠由于生产的厂商不同,其产品质量差异非常大,往往可达阳性反应的(+)级差以上,最好购买质量好的产品或每次实验均设阴、阳性对照。
非特异性酯酶
常用非特异性酯酶包括α-醋酸茶酚酯酶;
醋酸AS-D荼酚酯酶染色;
α-丁酸荼酚酯酶染色等。
在单核细胞、吞噬细胞中此类酶的含量较多且多数受到氟化钠(NaF)抑制;
粒细胞、淋巴细胞、部分幼红细胞、巨核细胞和血小板等含量较少(表2-3)。
表2—3阳性细胞反应
1.非特异性酯酶由于具有较多的同工酶,且不同种类的细胞内存有的同工酶也不尽相同,所以此类酶除了在单核-巨噬系统反应较强烈以外,其它细胞系统也可呈现出不同程度的阳性,所以对细胞中非特异性酯酶如能组合检测比单一检测更具价值和意义。
非特异性染色的主要意义在于结合细胞形态,结合细胞免疫表型检测,为临床急性非淋巴细胞性白血病的分型和亚型确定提供重要的依据。
2.α-醋酸荼酚酯酶因主要存在于单核细胞中,且为同工酶4、5,而中性粒细胞含有的同工酶为1、2、7、9,由于一定浓度的氟化钠能完全抑制酯酶3、5、6,此特点在对急性髓性白血病中M2、M4、M5等的分型和亚型分类有一定参考价值。
另由于巨核细胞此酶也可呈阳性反应,如结合酸性磷酸酶染色(ACP)和免疫表型检测,可对AML-M7作出诊断。
3.α-丁酸荼酚酯酶(α-NBE)在单核一巨噬细胞系统中反应强烈,亦被视作单核-巨噬细胞系统所特有的标志酶,同时此反应也能被NaF所抑制,在急性粒细胞性白血病中,M3可出现强阳性,但不被氟化钠所抑制。
4.醋酸ASD荼酚酯酶主要分布细胞浆中的初级溶酶体内,由于同工酶的不同,单核细胞和粒细胞虽均可呈现阳性反应,但前者受到氟化钠抑制,后者几乎不受抑制,此特性同α-NAE相似。
5.非特异性酯酶染色若结合POX染色和PAS染色来综合判断结果,特别是如能将POX染色与一种非特异性酯酶联合显示于一张标本片上,这比分别染色效果要更好,对M4的分型尤为突出。
6.将AS-DCE染色与一种非特异性酯酶染色同显示于一张标本片上,即双酯染色,可使单核细胞和粒细胞系分辨的更为清楚,并且能发现在同一个细胞上同时存在二种酯酶呈阳性反应,称酯酶双表现型细胞,为M4的诊断提供了有力依据。
注意事项:
1.酶的活性随标本采集后的时间而逐步下降,如无法立即染色,应先固定,否则将影响阳性结果。
2.涂片固定方法较多,但液体固定法比蒸气固定法背景清晰,不易脱膜。
3.各种基质试剂由于其产品衍生物较多,许多型号均可使用,使染色效果可随产地、生产厂商及不同批号等因素相差甚远,所以每次操作应设阴、阳性对照。
4.重氮盐的选择需根据酶反应中与基质的最佳配伍而定,以提高阳性率和阳性强度。
5.氟化钠的称量要求较高,为避免每次使用称量差异,可将氟化钠配制成一定浓度
水溶液,使用时吸取即可。
6.由于方法学关系,各地使用的基质液浓度差异较大,但在酯酶染色反应中切忌基质浓度过高,以防引起背景污染,冲洗困难,特别在冬天,易使涂片表面产生脂质沉淀,影响结果观察。
过碘酸-雪夫反应
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- 16 骨髓 涂片 检查