细胞培养基础知识资料下载.pdf
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Gibco品牌品牌InvitrogenProprietary&
Confidential3细胞培养相关设备细胞培养相关设备CO2培养箱,水浴,离心机,液氮罐,显微镜InvitrogenProprietary&
Confidential4细胞培养基本流程细胞培养基本流程基础培养基基础培养基+FBS+添加剂添加剂+抗生素抗生素去除去除Media用用PBS清洗清洗加入加入Trypsin以分离贴壁以分离贴壁细胞细胞将部分细胞将部分细胞传代到新的传代到新的Media中中InvitrogenProprietary&
Confidential51.细胞培养主要成分细胞培养主要成分基本培养基血清细胞培养试剂(抗生素、细胞解离,生长因子等)平衡盐溶液真核细胞InvitrogenProprietary&
Confidential6培养基必须提供所有基本的营养培养基必须提供所有基本的营养InvitrogenProprietary&
Confidential7经典培养基的应用经典培养基的应用BME(BasalMediumEagle):
是由是由Eagle发明的,是最简单的培养基,只有发明的,是最简单的培养基,只有11种氨基酸和盐及一些维生种氨基酸和盐及一些维生素。
最先用于培养小鼠的素。
最先用于培养小鼠的L细胞和人类细胞和人类HeLa细胞,现在广泛用于各种细胞细胞,现在广泛用于各种细胞的培养的培养EMEMorMEM(EaglesMinimumEssentialMedium):
是是BME的升级版,氨基酸浓度是的升级版,氨基酸浓度是BME的两倍,适用于更多的细胞的两倍,适用于更多的细胞DMEMorDME(DulbeccosModificationofEaglesMedium)是是Dulbecco改进的改进的MEM.氨基酸和维生素浓度是氨基酸和维生素浓度是BME的的4倍倍.最先葡最先葡萄糖的浓度是萄糖的浓度是1g/L,称为低糖称为低糖DMEM,后来增加到后来增加到4.5g/L,称为高糖称为高糖DMEM,广泛用于各种细胞培养。
广泛用于各种细胞培养。
InvitrogenProprietary&
Confidential8经典培养基的应用经典培养基的应用M199(Medium199):
是一种比较古老的,配方复杂的,含有核苷酸,核酸等成分的培养基。
最初是一种比较古老的,配方复杂的,含有核苷酸,核酸等成分的培养基。
最初用于鸡胚肌细胞的培养,还用于各种细胞的维持和病毒生产用于鸡胚肌细胞的培养,还用于各种细胞的维持和病毒生产RPMI1640(RoswellParkMemorialInstitute#1640):
是是McCoys5A的改进版,含有高浓度的肌醇。
广泛用于悬浮细胞的培养。
的改进版,含有高浓度的肌醇。
如人类白细胞,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞等血液来源的细胞如人类白细胞,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞等血液来源的细胞HamsF10(HamsNutrientMixtureF10):
由由Ham发明,用于人类发明,用于人类2倍体细胞和仓鼠细胞的培养。
倍体细胞和仓鼠细胞的培养。
HamsF12(HamsNutrientMixtureF12):
F10的升级版,含有更多的维生素,肌醇,氨基酸。
用于培养大鼠,兔子和的升级版,含有更多的维生素,肌醇,氨基酸。
用于培养大鼠,兔子和鸡胚细胞,还用于中国仓鼠卵巢细胞以及肺细胞的培养鸡胚细胞,还用于中国仓鼠卵巢细胞以及肺细胞的培养InvitrogenProprietary&
Confidential9基本培养基用途基本培养基用途InvitrogenProprietary&
Confidential10GIBCO培养基的培养基的4种形式种形式即用型即用型(1X)液体培养基液体培养基:
直接用直接用培养基浓缩液培养基浓缩液(10Xor50X):
用前需要稀释成用前需要稀释成1干粉培养基干粉培养基DPM(DryPowderMedia):
需要在水中溶解需要在水中溶解,加入碳酸氢钠加入碳酸氢钠,调调pH值值,然后过滤才可以用然后过滤才可以用高级颗粒技术培养基高级颗粒技术培养基AGT(AdvancedGranulationTechnologyTM):
比比DPM形式的培养基更容易溶解的颗粒状的培养基形式的培养基更容易溶解的颗粒状的培养基.AGT是完全为工业产量的用户开发的是完全为工业产量的用户开发的,pH提前调好了提前调好了,所有的成分都所有的成分都提前混合好了提前混合好了,只需要加水溶解和过滤。
只需要加水溶解和过滤。
Confidential11优点优点:
节省空间节省空间特性特性:
干粉状形式节省空间需要在超纯水中溶解需要加入碳酸氢钠需要调节pH需要用0.22um的滤膜过滤缺点缺点:
耗时耗时干粉培养干粉培养基基液体培养基液体培养基液体形式直接可以使用不需要另外加入其他成分不需调pH不需过滤什么东西都不需要自己准备不需调pH高价值费空间高价格InvitrogenProprietary&
Confidential12培养基的保存及运输培养基的保存及运输干粉:
干粉:
22年年液体:
液体:
1010个月个月浓缩液体:
浓缩液体:
1212个月个月所有的培养基都必须在所有的培养基都必须在2288,避光避光保存保存,不能冷冻不能冷冻,干粉培养基可在室干粉培养基可在室温情况下运输。
温情况下运输。
Confidential13含有含有L-Glutamine的液体培养基的液体培养基12个月个月不含不含L-Glutamine的液体培养基的液体培养基18个月个月干粉培养基,干粉培养基,3年年培养基的保质期培养基的保质期InvitrogenProprietary&
Confidential14GIBCO培养基的类型培养基的类型传统培养基传统培养基要添加血清要添加血清(5-10%)的培养基的培养基高级培养基高级培养基(Advancedmedium)浓缩了营养物质和其他成分的培养基浓缩了营养物质和其他成分的培养基,只需要只需要2%的血清的血清(减少减少50-90%)减少不同批次血清带来的差异和试血清的麻烦减少不同批次血清带来的差异和试血清的麻烦,节省时间和花费节省时间和花费无血清培养基无血清培养基(无血清培养基无血清培养基/无蛋白培养基无蛋白培养基/化学定义的培养基化学定义的培养基)使用时无须再填加血清使用时无须再填加血清,主要用于生物产品生产主要用于生物产品生产,干细胞研究等干细胞研究等专用培养基专用培养基针对角质细胞、淋巴细胞、造血细胞、内皮细胞、肝细胞、神经元细胞、针对角质细胞、淋巴细胞、造血细胞、内皮细胞、肝细胞、神经元细胞、胚胎干细胞、胚胎干细胞、CHO细胞、细胞、293细胞、各类昆虫细胞、杂交瘤细胞、细胞、各类昆虫细胞、杂交瘤细胞、羊水细胞等的无血清培养基羊水细胞等的无血清培养基InvitrogenProprietary&
Confidential15血清血清的作用血清血清的作用附着因子纤连蛋白,提高粘性增殖、分化所需的激素和生长因子调节膜的渗透性生长因子、脂类、酶和微量元素的载体缓冲液毒素灭活作用保护作用:
pH波动,蛋白酶,有毒试剂,机械损伤InvitrogenProprietary&
Confidential16GIBCO动物血清的动物血清的种类种类胎牛血清(FBS):
-原产地(美国;
澳大利亚;
巴西;
新西兰等)原产地(美国;
新西兰等)-经过鉴定的经过鉴定的(certified)vs质量有保证的质量有保证的(qualified)新生牛血清(NBS):
-出生少于十四天出生少于十四天小牛血清:
-出生少于一年出生少于一年捐献血清:
-特殊饲养的,专门用来进行血清提取的牛特殊饲养的,专门用来进行血清提取的牛其他血清:
-horse,chicken,goat,lamb(羊)(羊),porcine(猪)(猪),rabbitInvitrogenProprietary&
Confidential17血清血清的类型血清血清的类型热灭活:
(在56水浴30min)热灭活一些可以产生免疫应答反应的物质(补体等)在昆虫细胞培养和胚胎干细胞培养中需要透析:
透析掉小分子量的物质离子,氨基酸用于标记低IgG:
我们有自己独特的层析技术去除球蛋白经过处理将IgG去除用于免疫学研究及其生产生物制品胚胎干细胞专用:
胚胎/间充质干细胞专用维持干细胞处于为分化状态-射线照射处理的血清(客户订制)InvitrogenProprietary&
Confidential18血清血清CertifiedFBSVsQualifiedFBSCertifiedFBS和和QualifiedFBS都通过以下测试都通过以下测试无菌,醋酸纤维素介质中的电泳图谱,渗透压,pH值,总蛋白,病毒检测,内毒素和支原体对对Certified胎牛血清,除以上检测外,还进行如下检测:
胎牛血清,除以上检测外,还进行如下检测:
噬菌体检测;
生物化学检测(碱性磷酸酶等21项内容);
激素检测(雌二醇等5项内容);
Sf9细胞生长InvitrogenProprietary&
Confidential19血清可追踪性:
血清品质的证据血清可追踪性:
血清品质的证据GIBCO收集并保留从采血、处理、检测到发运的全部文件供追踪之用血清通常具有3-5年的保质期血清的性能可能会随着每批,和季节的不同而不同在拿到每一批血清前应该进行验证通常,购买一次血清最好足够1-2年使用,确保每一瓶都一样,而不需要每次都进行验证InvitrogenProprietary&
Confidential20培养效能检测培养效能检测对所有的胎牛血清,GIBCO都进行以下培养效能检测。
选择胎牛血清的最重要的标准是其支持特殊的细胞生长的能力,因此,除了保证血清通过严格的品质控制,GIBCO也同时在实验室条件下对血清的三个重要的培养效能进行检测:
集落效率检定:
分析每一批胎牛血清促成单一细胞集落的能力,及促进老鼠骨髓瘤细胞及其衍生的融合瘤细胞的生长能力。
实际应用在低密度非贴附性细胞的集落形成、融合瘤发育以及单克隆抗体的制造。
贴附效率检定:
利用一贴附的、已转型的人类细胞株来检测每一批血清促使低密度细胞贴附及分裂的能力。
实际应用在低密度或正常密度、转型细胞株及细胞株的繁殖。
二倍体成纤维细胞生长促进检定:
评估每一批血清能维持难培养的贴附细胞长期生长的能力。
培养数代WI-38人类二倍体成纤维细胞,计算每一代培养的细胞总数。
此项检测所挑选出的胎牛血清批号能维持难以生长的细胞、贴附性细胞、正常的细胞株的生长及存活。
此外,对部分胎牛血清,我们也进行昆虫细胞生长促进检定:
昆虫细胞生长促进检定:
评估每一批Certified等级胎牛血清,及特定批号的Qualified等级的胎牛血清其促进SF9昆虫细胞生长的能力。
此项测试为选择适合昆虫细胞生长及BEVS实验的胎牛血清最佳指标。
Confidential21其它检测其它
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