槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定实验报告Word文档格式.docx
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30;
冷甲醇1:
100;
热甲醇1:
10.
槲皮素:
黄色结晶,mp313?
-314?
(2分子结晶水),能溶解于冷乙醇(1:
650),易溶于沸乙醇(1:
60),可溶于甲醇、乙酸乙酯等;
难溶于水,实验室以稀硫酸水解,乙醇重结晶制得。
本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基,显弱酸性,可溶于碱中,加酸酸化后又可析出结晶的性质,采用碱溶酸沉法提取,并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
三、药品材料
槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸
四、实验操作
芦丁的的提取和精制
芦丁的提取:
取槐米20g置500ml烧杯中,加入沸水400ml及1g硼砂,搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟(注意保持PH8-9),
并随时补充蒸发掉的水分,趁热用双层纱布滤过,收集滤液,药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟,合并两次滤液。
浓缩至1/2体积,滤液在60?
-70?
再用盐酸调至PH4-5,静置一周,析出芦丁。
五、实验说明及注意事项
1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁,收率稳定,且操作简便。
在提取前应注意将槐米捣碎,使芦丁易于被热水溶出。
槐花中含有大量粘液质,加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。
PH应严格控制8-9,不得超过10,。
因为在强碱条件下煮沸,时间稍长可促使芦丁水解破坏,使提取率明显下降。
酸沉淀时PH4-5,不宜过低,否则会使芸香苷成烊盐溶于水,降低了收率。
2、提取过程中加入硼砂作用:
保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化,亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合,使芦丁不受损失。
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定
(二)
一、实验目的
1、掌握芦丁水解生成苷元的方法及二者之间的分离。
2、熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方
法。
二实验原理
芦丁粗品可利用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
芦丁可被稀酸水解,生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖,并能通过纸层析鉴定。
芦丁及槲皮素还可以通过化学反应及紫外光谱鉴定。
芦丁粗品、硫酸、盐酸、氢氧化钠、镁粉、α-萘酚、三氯化铝、葡萄糖溶液、鼠李糖溶液、95%乙醇、碳酸钡、广泛PH试纸、层析滤纸等。
(一)芦丁的提取和精制
1、芦丁的提取:
取前次操作芦丁沉淀液,慢慢倾去上清液后,抽滤,沉淀用少量冷水洗涤2-3次,抽干,得到芦丁的粗产物。
2、重结晶:
称定粗品芦丁的重量,按约1:
200的比例悬浮于蒸馏水中,煮沸10分钟使芦丁全部溶解,趁热抽滤,冷却滤液,静置析晶。
抽滤,置于空气中晾干或60?
干燥,得精制芦丁,称重,计算收率。
3、芦丁的水解:
取芦丁1g,置于250ml圆底烧瓶中,加入2%硫酸溶液80ml直火微沸回流1小时,至析出的黄色沉淀不再增加为止,放冷抽滤,滤液保留作糖检查,沉淀用少量水洗去酸,抽干水分,晾
干称重,得粗制槲皮素,然后用乙醇(95%乙醇约15ml)重结晶即得精制槲皮素。
取水解后的母液20ml,加入碳酸钡细粉中和至PH7,滤除生成的碳酸钡沉淀。
滤液置水浴上浓缩至1-2ml,供纸色谱用。
(二)鉴定
1、性质实验
(1)盐酸-镁粉反应:
取芦丁少量置于试管中,加1ml乙醇使溶解,加5滴浓盐酸,再加少许镁粉,注意观察颜色变化的情况。
(2)Molisch反应:
取芦丁和槲皮素少量,分别置试管中各加1ml乙醇使溶解,加几滴α-萘酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁加浓硫酸10滴,注意观察两液面间产生的颜色变化,并比较芦丁和槲皮素的区别。
2、色谱鉴定
(1)芦丁及槲皮素的纸色谱检识
点样:
取新华1号滤纸;
距下端3cm处用铅笔划线,为起始线,隔
1.5cm处点样品。
将点好的样品的滤纸挂在层析杠中饱和半个小时,再上行展开。
支持剂:
层析滤液(5cm*10cm)
展开剂:
正丁醇-醋酸-水(4:
5)上层
样品:
自制槲皮素的乙醇溶液
自制芦丁的乙醇溶液
对照品:
芦丁标准的乙醇溶液
显色剂:
a、可见光下观察色斑,紫外灯下观察荧光斑点
b、喷雾三氯化铝乙醇溶液,紫外灯下观察荧光斑点
(2)糖的纸色谱检识
层析滤纸(5cm*10cm)
水溶液
1%葡萄糖标准品醇溶液及1%鼠李糖标准品溶液
喷以邻苯二甲酸苯胺溶液,105?
烘焙5分钟至斑点显色清晰
(3)芦丁及槲皮素的薄层色谱鉴定
吸附剂:
硅胶G板,105?
-110?
活化1小时
氯仿-甲醇-甲酸(15:
5:
1)
对照品芦丁标准品的乙醇溶液
b、喷雾三氯化铝乙醇溶液,紫外灯下观察荧光斑点
芦丁的提取方法较多,如碱提取酸沉法,是利用其具有酸性易溶于碱性水,加酸酸化后又析出沉淀的性质进行的。
篇二:
槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备
杨翊涵(2013级中药学一班)
【摘要】本文整理总结了两次实验的操作过程与实验结果。
包括从槐米中提取芦丁、芦丁的分离和检识,以及槲皮素的制备和检识。
通过碱溶酸沉的方法提取芦丁,再利用稀酸水解生成槲皮素。
通过芦丁的制备,掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。
熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用。
通过芦丁的结构检识,了解苷类结构研究的一般程序和方法熟悉重结晶技巧。
了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
【关键词】芦丁、槲皮素、提取分离、检识鉴定、结构、性质。
1.1芦丁的提取原理
利用芦丁结构中含有多个酚羟基,呈酚酸性,能在碱水中溶解的性质,可用碱性溶剂进行提取,提
取液加酸后可沉淀析出(碱溶酸沉
法)。
也可利用芦丁在冷水中溶解
度小,在热水中溶解度大的性质进
行提取。
1.2.芦丁的分离原理
利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小,在热乙醇中溶解度大,以及
在热水中溶解度大,在冷水中溶解度小的性质分离。
芦丁用溶剂加热
溶解后,趁热抽滤,滤液放冷后能析出而达到分离的目的(如不纯可再重复操作进行分离)。
也可采用醇溶水沉法进行精制。
1.3.芦丁的鉴定原理
(1)利用吸附薄层色谱的分离原理,芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开,显色,以达到鉴定芦丁的目的。
(2)通过专属的化学显色反应(如三氯化铝显色反应),确定芦丁的成分类型(黄酮类)。
1.4实验原理
芦丁浅黄色针状结晶,难溶于冷水,可溶于热水(1:
180,200),热甲醇(1:
10),冷甲醇(1:
100),热乙醇(1:
60),冷乙醇(1:
650);
难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等,易溶于碱液。
槲皮素黄色结晶,能溶于冷乙醇
(1:
290),易溶于沸乙醇(1:
23),
可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡
啶、丙酮等;
难溶于水、苯、石油醚
等溶剂。
芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出,可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶热水、热乙醇,较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖,依此进行制备槲皮素。
通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。
2.1粗芦丁的制备
槐米粗粉50g,加水800ml加热,加氢氧化钠调PH8-9,搅拌加热,95?
保温50min,趁热过滤,滤渣再如上提取一次。
合并滤液。
向滤液加入10%HCL调PH4-5,抽滤,至于80?
干燥得芦丁粗品。
所得粗品一半留备后用,另一半加热溶解,放臵过夜。
2.2槲皮素的制备
将放臵过夜的芦丁粗品滤液再次抽滤,滤渣干燥后取1g臵于500ml圆底烧瓶中,加入2%硫酸2.2ml和197.8ml蒸馏水,微沸回流至烧瓶内出现絮状结晶,静臵再次抽滤得槲皮素精品。
滤液用碳酸钡中和至中性,过滤,蒸发浓缩至干。
3.1槲皮素的定性实验
(1)锆-枸试验:
取样品液适量,然后加2,ZrOCl2的甲醇溶液,注意观察颜色变化,再加入2,枸椽酸的甲醇溶液,记录颜色变化。
(2)α-萘酚-浓硫酸反应:
取样品液适量,加等体积的l0,α-萘酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁缓加浓硫酸,注意观察两液界面的颜色。
3.2芦丁及槲皮素的色谱
聚酰胺层析板(5×
10cm)。
甲醇-丙酮-甲苯-乙酸(8:
2:
1)。
自制槲皮素的乙醇溶液,自制芦丁的乙醇溶液。
槲皮素标准品的乙醇溶液,芦丁标准品的乙醇溶液。
三氯化铝乙醇溶液喷雾,紫外光灯365nm下检识荧光。
3.3糖的纸色谱检识
中速层析滤纸(5×
20cm)
取水解后的滤液20ml,水浴加热,且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至PH中性,过滤,取滤液并浓缩至2mI左右,放冷后,供纸色谱点样用。
1,葡萄糖标准品醇溶液及1,鼠李糖标准品醇溶液。
展开剂:
5)。
烘烤5分钟至斑点显色清晰。
4.1注意事项
(1)用石灰水调节芦丁提取溶液的PH,既可以达到碱提取芦丁的目的,还可以除去槐米中含有的大量粘液质。
但钙离子浓度及pH值均不宜过高,否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀,同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。
(2)用HCl调PH时,应注意PH不要过低,因为PH过低会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解,同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏,导致收率下降。
(3)注意观察槲皮素制备过程中的实验现象。
4.2小结与讨论
本实验主要是利用芸香苷中含有较多的酚羟基,可溶于碱中,加酸酸化后又可析出芸香苷结晶的性质,采用碱溶酸沉法提取,
并用芸香苷对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱鉴定。
通过种种方法达到实验目的。
根据本次试验汲取经验教训,以后实验一定要认真预习,不是浮于表面,要真正学透、学懂,不能照本宣科,要有主观能动性,只有自己理解的、想通的才能真正记住,成为自己的东西。
我们要改变学习方法,多多发挥主动性,并将这种学习方法运用到以后的其他科目中,才会事半功倍。
【参考文献】
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[5]杨娜,朱开梅,顾生玖.从槐米中提取槲皮素方法的研究进展.时珍国医国药,2010,21(12);
3340-3341.
[6]赵文彬,刘金荣,樊莲莲,刘桂花.从槐米中提取槲皮素方法的研
篇三:
槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定
实验名称:
实验目的:
- 配套讲稿:
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