胶体金法生产工艺规程文档格式.docx
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3.2.2.类型:
三类6840体外诊断试剂。
3.2.3.规格:
100T/盒(25T/筒*4筒)(无卡);
25袋/盒(1支/袋)、50袋/盒(1支/袋)
3.3.产品概述
乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂(胶体金法)采用胶体金免疫层析分析原理、双抗原夹心法,在玻璃纤维纸上预包埋金标记重组乙型肝炎病毒表面抗原,在硝酸纤维素膜上检测线(T)和质控线(C)分别包被重组的乙型肝炎病毒表面抗原和羊抗兔IgG。
当检测样本为阳性时,样本中的乙肝病毒表面抗体与胶体金标记的重组乙肝病毒表面抗原结合形成复合物,由于层析作用复合物沿纸条向前移动,经过检测线(T)时与预包被的重组乙肝表面抗原反应,形成免疫复合物而显现红色条带,游离金标记的兔IgG则在质控线(C)与羊抗兔IgG结合显现红色条带。
阴性样本则仅在质控线(C)显色。
3.4.试剂盒组成、储存、有效期
3.4.1.试剂盒组成:
组件
100T/盒
25袋/盒(1支/袋)
50袋/盒(1支/袋)
装量
数量
试纸条
25条/筒
4筒
无
试纸卡
1支/袋
25袋
50袋
样品稀释液
2ml
4瓶
1瓶
2瓶
说明书
1份
3.4.2储存条件:
2-30℃保存。
3.4.3.有效期:
24个月。
3.5.生产工艺流程图文件末(23页)。
3.6.生产工艺过程及工艺条件
根据以下各配方,按各相关试剂配制作业指导书进行配制。
(1)
原料名称
用量
配制环境:
(2)
(3)
按照《液体分装作业指导书》,根据相应规格的装量要求进行分装,分装量=规格+附加量。
如下表所示(单位:
ml/瓶):
标示量
附加量
15ml
0ml
3.6.3胶体金制备
烧金溶液A
烧金溶液B
超纯水
制备环境:
金标车间配料间(十万级洁净区)
(1)量取ml超纯水到适当大小的烧瓶中;
(2)量取ml烧金溶液A并加入烧瓶中;
(3)水沸腾后,加入已经平衡的烧金溶液Bml;
(4)水继续沸腾5分钟关闭加热搅拌器,并将烧瓶移至桌面,用铝箔纸盖住瓶口,让胶体金自然冷却。
(5)胶体金的储存:
2~8℃;
有效期6个月。
2CO3液,混匀后,快速搅拌中加入相应量的乙肝抗原或兔IgG(乙肝抗原和兔IgG分开标记),混合均匀后,反应30分钟。
℃,有效期6个月。
3.6.5铺金液配制
用工作液将1/10体积的乙肝病毒表面抗原金标记物沉淀放大10倍;
兔IgG金标记物沉淀按1/3乙肝病毒表面抗原沉淀的量,加至上述乙肝金标工作液中(即兔IgG金标记物沉淀为乙肝的1/3)
按0.2mg/ml的量加入抗RBC到铺金液中;
3.6.6小样试验:
在铺金和划膜之前,应首先将待铺的基因重组抗原-胶体金复合物溶液,先铺一条玻纤(6mm×
310mm)上,用配好的质控线液、检测线液划膜一张,与其他组分组合在一起,进行检测,要求:
阴性参考品符合率:
20份阴性参考品符合率(-/-)应为20/20。
灵敏度:
灵敏度参考血清,呈阳性反应。
精密性:
连续重复测定精密性参考品10次,反应结果应均为阳性,且显色度均一。
3.6.7铺金
按每张玻纤可以铺金36ml计算金标液的体积
℃干燥18~24小时,如不立即使用,加干燥剂铝箔袋封存。
保存过程中严格防潮,以后打开和使用一定要在30%湿度以下。
按照《划膜机标准操作规程》,以“252”泵速(对应速度2.7ul/cm),将质控线液和检测线液均匀地划在膜上,质控线划在距膜顶端12.1±
0.1cm处,检测线划在距膜顶端12.5cm±
0.1cm处,质控线与检测线相距5mm±
1mm。
3.6.8样品垫的准备
按每张玻纤可以铺液36ml计算全血样品垫处理液的体积
金标垫:
6mm×
310mm样品垫:
15mm×
310mm吸水垫:
20mm×
310mm
不干胶纸:
13mm×
310mm
将上述切割好的材料进行贴膜制成乙型肝炎表面抗体胶体金试纸条,各膜层叠关系如下:
1)
2)
T线
C线
3)
3)
5)
(4)
6)
1)不干胶纸
2)样品垫
3)金结合物垫
4)包被有检测线(T线)和质控线(C线)的硝酸纤维素膜
5)吸水垫
6)塑料衬片
金标垫2片,第一片搭上NC膜2mm,第二片搭第一片3mm;
样品垫15mm,搭上金标垫2mm;
吸水垫20mm,搭上NC膜2mm,不干胶13mm,搭上露出的NC膜2mm。
(1)组装环境条件的控制在相对湿度30%以下,并所有组件拆封后暴露于空气中时间不超过2小时。
(2)按照《切条工序作业指导书》使用切条机,将组装好的乙肝病毒表面抗体检测试剂切割成宽度为2.5mm±
0.1mm试条,切条过程中应于前、后及过程中每30分钟对切条的宽度检查一次。
检测卡的装配
按照不同规格的要求,需要进行检测卡装配的试纸条先把切好的试条装配到完好的PVC卡中,再用压卡机进行压卡,装条时应注意检查条有无划痕污渍,宽度是否符合要求;
PVC卡外观应清洁,平整,无变形,底面配套性好,压卡应注意调节松紧度,避免将卡压破或变形。
(1)装卡:
单个卡和无水硅胶干燥剂一起放入铝箔袋中,卡印字方向应朝向铝箔袋开口方向,确保无漏装。
(2)密封。
密封时应检查密封的效果及铝箔袋上的效期印字是否正确,使用封口机进行封口。
装筒,将无卡试纸以25支/筒的规格装入筒中,放入干燥剂,然后封筒。
(1)不干胶标签批号、生产日期、有效期打印:
以试纸条组装日期为“生产日期”,并由此推算出“有效期至”,批号按照《批号管理规程》的规定设置。
按照《批号打印机使用、清洁、维护、保养标准操作规程》进行操作打印标签、包装盒上的“三期”。
(2)贴签:
在上述装好检测卡的铝箔袋及装好试纸条的筒上贴上标签。
(3)成品组装:
纸盒内组份:
按包装盒标准折叠方法折好包装盒,根据成品组分名称、规格及数量,分别装入检测卡铝箔袋或试纸筒、样品稀释液、说明书。
包装组组长每盒清点查看,合格后用封口签(合格证)封口。
(4)储存:
2~30℃,有效期24个月。
抽检量为3%,最小抽检量为500人份。
经质量管理部QC检测合格,QA做生产记录审核后开具《成品放行审核单》方可入库。
3.7质量标准
3.7.1.主要原辅料质量标准及依据:
(1)重组乙肝抗原
质量
标准
性状
肉眼观察不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒
蛋白浓度
用福林-酚法,以Sigma公司生产的牛血清白蛋白作对照,蛋白含量以毫克/毫升表示,浓度为0.5-10.0mg/ml;
纯度和分子量
用SDS-PAGE蛋白电泳法测定,每个泳道加样量10μg,电泳带显示无杂蛋白。
分子量:
效价
ELISA检测,效价应大于1∶10000
功能性试验
以本品制备三批小试样品,与其他合格组分组装后检测:
20份阴性参考品符合率(-/-)应为20/20;
最低检出量:
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml;
批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡,结果应全部呈阳性,且显色度均一。
批间精密度:
连续三批的小试样本,分别重复检测精密度参考品5次,结果应全部为阳性,且呈色度均一。
稳定性试验:
置37℃放置10天,进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测,应符合上述要求。
贮藏条件
-20℃冻存
依据
《抗原质量标准及检验操作规程》
(2)兔IgG抗体
经OD280方法检测浓度≥5mg/mL。
纯度
用SDS-PAGE蛋白电泳法测定,每个泳道加样量10μg,电泳带显示无杂蛋白
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。
;
置37℃放置10天,进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测,应符合要求。
且背景干净,质控线2分钟内显出,在10-30ug/ml包被时具有活性标记时具有活性。
《抗体质量标准及检验操作规程》
(3)羊抗兔IgG
且背景干净,质控线2分钟内显出,在0.5-2.0mg/ml包被时具有活性标记时具有活性。
(4)兔抗RBC
用
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- 关 键 词:
- 胶体 生产工艺 规程