血凝实验实验报告.docx
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血凝实验实验报告.docx
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血凝实验实验报告
影响血液凝固原因
(一)试验目:
经过本试验来了解血液凝固基础过程及了解影响血液凝固部分原因。
(二)试验对象:
家兔
(三)试验步骤:
(略)
(四)试验结果:
1、观察纤维蛋白原在凝血过程中作用:
试验中可见到静置杯内血液发生凝固。
搅拌杯内血液不凝固,但在毛刷上见到红色血凝块,经水冲洗后毛刷上缠绕有白色丝状物。
2、观察影响血凝部分理化原因:
以下表9-1所表示。
表9-3影响血凝部分理化原因试验条件
1.加少许棉花
2.用石蜡油均匀涂试管内壁
3.放置37℃水浴
4.放置冰水水浴
5.加肝素10个单位
6.加草酸钾2mg
(表9-3文字说明:
略)
3、观察内源性及外源性凝血过程:
以下表9-2所表示
表9-2内源性和外源性凝血过程观察
试剂
1、富血小板血浆
2、少血小板血浆
3、生理盐水
4、羊肺悬液
5、0.025mol/lcacl2
血液凝固时间
(表9-2文字说明:
略)
(五)讨论:
血液凝固是指血液由流动液体状态变为不流动冻胶状态血液凝固过程大致分为三个关键阶段:
①凝血酶原激活物形成;②凝血酶原激活成凝血酶,③纤维蛋白原转变为纤维蛋白。
在凝血酶原激活物形成过程中分有两种不一样路径:
内源性凝血路径和外源性凝血路径。
内源性凝血路径是由凝血因子?
开启,参与血凝全部凝血因子都在血浆内。
凝血因子?
可被多种带负电荷物质等所激活,如血管内膜暴露胶原纤维、玻璃、陶器等。
外源性凝血路径是由存在于血管外组织中凝血因子ⅲ所开启,其它参与凝血因子也在血管内。
凝血因子ⅲ在脑、肺、胎盘组织含量很丰富。
不管是内源性凝血路径或外源性凝血路径,她们最终是使血纤维蛋白形成而使血液发生凝固。
在观察纤维蛋白原在凝血过程中作用试验中,因为参与凝血全部凝血因子都在血浆中,所以其凝血过程是属于内源性凝血。
因为玻璃和毛刷表面都带有负电荷,后者可激活凝血因子?
开启内源性凝血过程。
凝血到最终阶段时,在凝血酶作用下,把纤维蛋白原水解成血纤维蛋白;形成纤维蛋白不停地交叉成网状结构,把血液中全部血细胞网凝血时间50’’8’15’’2’15’’6’45’’不凝不凝试管10.2ml0.2ml0.2ml2’15’’试管20.2ml0.2ml0.2ml3’45’’试管30.2ml0.2ml0.2ml45’’
罗于其中,从而使血液发生凝固。
静置杯中血液,因为发生了上述血液凝固过程,所形成纤维蛋白没有被破坏,所以杯中血液凝固。
而搅拌过杯内血液,虽也发生血液凝固过程,但所形成纤维蛋白却不停缠绕到毛刷上,当杯内血液纤维蛋白原全部水解掉后,形成纤维蛋白也全部缠绕在毛刷上,这时血纤维只能网罗毛刷周围部分血细胞,在毛刷上见有血凝块。
经水漂洗后,血细胞被冲走,毛刷上剩下是白色细丝状纤维蛋白。
搅拌后杯内血液因纤维蛋白原全部被耗尽,无法再形成纤维蛋白,则搅拌后杯内血液不发生凝固。
由此可见,血液凝固过程实际上是纤维蛋白形成过程,任何一个步骤被破坏,就不会引发血液凝固。
在血液凝固两个过程中,它们是有所不一样。
二者关键区分以下表9-3所表示:
表9-3内源性和外源性凝血关键区分
区分点
开启凝血因子
x因子激活
参与凝血凝血因子
凝血过程
凝血时间内源性凝血?
需要?
因子复合物数量多,且全部在血管中复杂慢、约数分钟外源性凝血ⅲ需要ⅲ因子复合物数量少,ⅲ因子在血管外,其它在血管内简单快、约几十秒钟
由上可知,外源性凝血比内源性凝血所需时间短。
在试验结果表9-2中,第1、2试管都是由血小板、生理盐水和cacl2溶液组成,参与凝血凝血因子都在血浆中,故其凝血过程为内源性凝血。
而第3试管是由血小板、羊肺悬液和cacl2溶液组成。
在第3试管中含有羊肺悬液,其内含有丰富第ⅲ凝血因子。
显然第3试管发生血液凝固过程关键是外源性凝血路径。
所以第3试管凝血时间最快。
在第1、2试管中即使所含成份相同,但血小板含量不一样,第1试管血小板含量高于第2试管。
血小板对血液凝固含有促进作用,表现为:
①血小板质膜上吸附有很多凝血因子,如纤维蛋白原、因子v、因子xi等。
②其α颗粒中也含有很多凝血因子以及血小板因子。
③血小板因子为血液凝固过程提供磷脂表面,其激活后能加速血凝;同时其能对部分血凝因子含有保护作用,免受抗凝血酶ⅲ和肝素破坏。
可见,第1试管内因含有丰富血小板,故其凝血时间比第2试管快。
血液凝固受很多原因影响,如凝血因子质和量、多种理化原因等。
棉花给血液凝固提供一个粗糙表面,轻易使血小板发生粘着、聚集,然后发生解体,释放很多凝血因子和血小板因子;另外,棉花含很多带负电荷植物纤维,也能激活凝血因子?
开启内源性凝血路径。
所以放有棉花试管内血液凝固加紧。
试管内壁涂上一层石蜡油时,因为石蜡油表面光滑,不易引发血小板粘着,即不易使血小板发挥促进凝血作用。
另外石蜡油为绝缘体,其把试管表面所带负电荷覆盖,不利于凝血因子?
激活,所以血液凝固变慢。
血液凝固实际上是一系列蛋白酶水解过程。
参与血液凝固凝血因子大多数是蛋白质酶原,其水解后变成有活性蛋白质酶,如因子ii、因子xi、因子xii等(因子vii是有活性)。
这些蛋白质酶含有酶随温度升高催化活性加强特征,也含有蛋白质受热变性特点。
当温度低时,蛋白质酶活性下降,而当温度升高到42~45℃以上时,因为蛋白质发生变性,蛋白质空间结构被破坏,从而使蛋白质功效受损,蛋白质酶活性下降或失活。
所以,把血液放入37℃水浴时血液凝固时间就比放入冰冻水浴时所需时间短。
体内关键抗凝物质是抗凝血酶ⅲ和肝素。
抗凝血酶ⅲ与凝血酶等多个凝血因子活性中心------丝氨酸残基结合,使这些凝血因子活性受到抑制或失活,从而达成抗凝作用。
肝素则关键经过与血浆中部分抗凝蛋白,如抗凝血酶ⅲ结合,加强后者抗凝作用。
另外,肝素还能使血管内壁细胞释放凝血抑制物和纤溶酶原激活物,增强纤溶作用。
所以在试管内
放入肝素时血液不会发生凝固。
血凝过程中,ca是关键凝血因子,其参与了血液凝固很多步骤,当血液中没有ca2+时血液就不会发生凝固。
在试管内放有草酸钾时,因为草酸钾与血液中ca2+发生化学
2+反应,生成草酸钙沉淀,使血液中没有ca,故血液不会发生凝固。
(六)结论:
经过本试验可知:
①血液凝固过程可分为三个相互联络关键阶段,任何一个阶段被破坏,凝血过程就终止,而血液凝固过程实际上是纤维蛋白形成过程。
②依据凝血酶原激活物形成路径不一样,可把血液凝固分为内源性和外源性两条凝血路径,内源性凝血路径所消耗时间比外源性凝血路径长。
③血小板在血液凝固过程中含有发挥促进作用。
④血液凝固除受凝血因子质和量影响外,还受接触面、温度等理化原因影响。
血液接触面粗糙、合适加温能加速血凝,而血中加肝素等抗凝剂、以及除去血中游离钙离子等可延缓血液凝固。
2+篇二:
血凝血凝抑制试验总结
1、假如是立即要做试验,先把试验所需抗原、标准阳性血清、阴性血清、待检血清取出
回温,假如待检血清已冷藏,可取出放入37℃恒温培养箱中回温,待血清析出后取出(时间大约看具体情况而定)。
2、试验准备阶段:
a准备好清洗洁净血清离心管(要有刻度装血液)。
b采血:
注射器内先加入二分之一体积阿氏液(预防血液凝集,当所需红细胞较多时,加入注射器量程二分之一阿氏液,当所需红细胞较少时,加入1.5ml~2ml阿氏液)。
c1%红细胞悬液制备
采集最少3只spf(无特定病原体)公鸡或无禽流感和新城疫等抗体健康公鸡血液与等体积阿氏液混合,用ph7.2、0.01mol/lpbs液洗涤3次,每次去掉上层清液后加入少许pbs用注射器反复抽吸使之混匀,再加至所要刻度,放入离心。
每次均以1000r/min离心10min,洗涤后用pbs配成体积分数为1%红细胞悬液,4℃保留备用(实际pbs液用1%生理盐水替换)。
d所需1%红细胞悬液体积≥4hau+1ml(本例中为30ml+1ml=31ml),不然配置1%红细胞悬液不够用(理论计算为30.1ml,取31ml以防万一)。
e阿氏液(alsevers)制备
葡萄糖2.05g
柠檬酸钠0.80g
柠檬酸0.055g
氯化钠0.42g
加蒸馏水至100ml,散热溶解后调ph值至6.1,69kpa高压灭菌15min,4℃保留备用。
3、血凝试验
目:
检测试验所用标准抗原血凝滴度,如检测结果血凝滴度为210=1024,表示标准抗原稀释1024倍仍能与红细胞发生凝集反应。
注意:
一瓶新未使用抗原(禽流感或新城疫为粉状),需要加入(用注射器)2ml稀释液(0.9%生理盐水,通常瓶身上有标注加入体积2ml)
a反应板要同时做三排(每排12孔),原因:
依据三排多数结果来确定血凝滴度。
比如:
10999三个结果为:
2、2、2,则此次试验标准抗原血凝滴度为2。
b加入1%红细胞悬液后放到微量震荡器上震荡混合1min,室温20℃~25℃下静置40min,放4℃静置60min。
当pbs对照孔红细胞呈显著纽扣状沉到孔底时判定结果。
4、4hau抗原
比如:
标准抗原血凝滴度为210=1024,则4hau抗原=(1:
210)/4=1:
256,稀释时,将1ml抗原加入到255mlpbs中即为4hau。
5、计算配置4hau所需稀释液体积v和标准抗原体积x
假设:
待检血清100份每排12个孔(实际只需要11孔,但多计算部分,以防不够)
每孔加入25ul4hau抗原体积=25ul×12×100=30000ul=30ml
设标准抗原体积为x
则有:
1:
256=x:
30000
标准抗原体积x=3000/256=117.1875ul=0.117ml
稀释液体积v=30-0.117=29.883ml
但实际量取时稀释液体积直接用30ml计算,因为0.117ml数量很小,能够忽略不计。
6、血凝抑制试验
a红细胞在使用过程中应常常摇匀。
b加入1%红细胞悬液后放到微量震荡器上震荡混合1min,室温20℃~25℃下静置40min,若环境温度过高,放4℃静置60min。
当pbs对照孔红细胞呈显著纽扣状沉到孔底时判定结果。
7、结果判定
血凝试验:
将反应板倾斜,看是否呈泪滴状,不呈泪滴状说明发生血凝
血凝抑制:
将反应板倾斜,看是否呈泪滴状,呈泪滴状说明未发生血凝或血凝不完全即血凝抑制
8、篇三:
血凝试验检验影响原因分析
血凝试验检验影响原因分析
【关键词】血凝试验
血凝试验是临床工作中常见检测项目,血凝试验结果正确性是指导临床正确诊疗保障。
作为血凝功效异常筛查试验,在出血性疾病诊疗、抗凝诊疗监测,术前检验中含相关键作用,且应用广泛。
因为凝血试验与通常检验项目测定不一样,其影响原因含有特殊性。
当其开启因子被一些原因激活后,就会发生一系列连锁反应,造成检测结果极大误差。
所以,对于检验人员和临床医生掌握和了解影响血凝试验相关原因显得尤为关键。
血凝试验原因有以下多个方面。
1.血样采集与处理
1.1.采血技术
1.1.1.患者应处于平静状态。
因为情绪担心,猛烈运动会激活或干扰血小板、凝血因子和纤溶酶原等成份。
1.1.2.患者应空腹。
进餐后,血中乳糜微粒等将对血凝试验结果造成干扰。
1.1.3.采血前不应拍打采
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