戴安U-HPLC操作流程CM68_精品文档资料下载.pdf

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、溶剂选择：

使用感应笔调出常用功能菜单后，选择“MENU”，进入后再选择“CONTROL”功能，进入子菜单后，移动选项到相应的溶剂“A%、B%、C%、D%”进入后再调节相应的值即可。

在当前设置流动相比例不足100%，系统会自动与前一项进行分配，总和为100%。

C、流速的调节：

、流速的调节：

使用感应笔调出常用功能菜单后，直接选择“SETFLOW”然后通过移动选项进行流速的设置。

注，数值不能自动进位，故设置时应确认显示的值为最终的值。

D、PURGE：

使用感应笔调出常用功能菜单后，直接选择“PURGE”即执行，再次选择时即为关闭，当未做选择时系统会在执行5分钟后自动停止。

1.2.2、紫外检测器：

、紫外检测器：

A、灯开关：

、灯开关：

在使用感应笔调出常用功能菜单后，选择“MENU”进入子菜单后，再选择“GENERALSETTING”，进入后，再进入下一级子菜单，通过感应笔移动选择“UVLAMP”，进入后再选择“TOGGLE”则打开氘灯；

再选择“VisLAMP”时，相应的操作打开钨灯。

B、波长选择：

、波长选择：

在调出常用功能菜单后，选择“WAVELENGHT”选择，再选择“WAVELENGHT1”进入，通过感应笔移动光标选择修改检测波长。

C、自动调零：

、自动调零：

在调出常用功能菜单后，选择“AUTOZERO”即执行自动调零。

D、启动、启动/停止采集：

停止采集：

在调出常用功能菜单后，选择“RUN/STOP”启动或停止数据信号的采集（仅用于国产工作站，波长改变后必须重新执行一次启动）。

1.2.3、柱温箱：

、柱温箱：

A、温度控制：

、温度控制：

在调出常用功能菜单后，选择“TEMP.”即进入温度设置子菜单，其中可通过“ON/OFF”控制柱温箱的启动和停止，同时通过移动选择进行温度的值设置。

B、阀切换控制：

、阀切换控制：

在调出常用功能菜单后，选择“VAVLE”进入阀控制子菜单，设置流路连接及阀位置的切换。

1.2.4、自动进样器：

、自动进样器：

A、进样针清洗：

、进样针清洗：

在调出常用功能菜单后，选择“WASH”即执行针的清洗。

B、进样针排气泡：

、进样针排气泡：

在调出常用功能菜单后，选择“PRIME”即自动执行针的排气泡。

2、各部件的准备操作：

、各部件的准备操作：

2.1、泵：

A、流动相：

、流动相：

、流动相是否充足：

（主要是有机相或者是单一通道的缓冲盐体系），一般应在所预计的消耗量之上加150-200ml，以保证仪器运行过程中不会出现流动相短缺；

、流动相是否新鲜：

（主要是高纯水及缓冲盐流动相），一般情况下一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续的24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。

特殊情况至少应重新过滤并脱气。

B、柱塞清洗液：

清洗液是否新鲜及匹配：

对于常规的流动相（一般指不含盐或离子对等添加剂的流动相），配制50%甲醇作为清洗液，在连续不超过4天工作的情况下可以两周一换；

若超过4天，则一周一换。

对于含盐或其它添加剂的流动相，配制5%甲醇（或高纯水）作为清洗液，在连续使用时，应每日更换；

中间如有较长时间不用，则应将清洗液瓶清空（或改为50%甲醇作为保存液，并在下次使用时，根据所使用的流动相配制适宜的清洗液）。

*：

若泵超过半个月以上不用，应将柱塞清洗溶剂管（蠕动泵下压部分）抽出，清空清洗液瓶，再次使用时，将溶剂管放回原位并添加新的清洗液，以保证清洗管道的正常使用。

C、溶剂管道C、溶剂管道：

、管道中的气泡：

在泵长期不用时，由于脱气机停止工作，流动相会重新溶解环境中的气体，而产生的气泡会对柱、泵及检测器产生不同程度的影响，因此要求在停泵后重新使用时应先观察A、B、C、D四溶剂管道进比例阀部分是否存在气泡，如无，在泵启动后等待5分钟后（脱气机自动脱气），再启动泵流速；

若有，则选择相应的通道（软件中将相关通道比例设为100%），打开PURGE阀后，在软件中，点击泵面板上的“PurgeOn”命令执行流动相自动脱气（点击“PurgeOff”键命令关闭，或等待5分钟后仪器命令运行完成后自动停止）；

完成脱气后，先关闭PURGE阀，再启动泵并逐步升高流速流速。

、流动相快速替换：

由于流动相通道数量有限，当需要对通道中流动相进行更换时，应首先打开PURGE阀，选择相应通道比例为100%，执行“Purge”命令，等待命令自动执行完成后，关闭PURGE阀，按要求进行系统的过渡或平衡。

2.2、自动进样器2.2、自动进样器：

A、进样针排气及清洗：

、进样针排气及清洗：

当自动进样器非连续使用时（间隔一天或以上），应在仪器启动前（尤其是泵）先对进样针执行排气。

打开Chromeleon主程序后，选择自动进样器选项（相关图标下的“Settings”），在弹出菜单中进行相关的操作的设置（PrimeSyringe:

：

设置排气操作的循环次数，通常设置为35次；

Washbufferloop：

清洗定量环，按Start开始；

WashNeedleExternally：

进样针外壁冲洗，通常在当天（或批次）样品分析完成后执行）。

若使用针清洗液瓶中清洗液冲洗，则应确保此溶剂与流动相基本一致（一般与流动相一致；

如果流动相使用到盐等添加剂，清洗液中盐溶剂使用水代替盐即可）且有效脱气。

B、进样针清洗：

当连续使用中需要更换样品类型或流动相粘度较大时，应在每次进样完成后进行针（Bufferloop和Needle）清洗。

2.3、柱温箱：

柱温箱应在打开电源且柱连接好后，及时启动（ON）并设置方法要求的温度及平衡温度偏差（在温度到达设置温度的正负平衡温度偏差点时，系统会自动检测温度是否平衡，在达到稳定的平衡后，继续以0.1度的步进速度升温）。

2.4、检测器：

、检测器：

为减少灯能量浪费，通常检测器在样品准备工作完成后（或基本完成时，即样品准备工作能在30分钟以内完成）；

同时仪器按方法要求流动相比例及流速平衡至少30分钟以上后打开，在完成自检20分钟以后方可开始样品的进样分析。

二、仪器平衡：

1、泵：

应在完成准备工作后，以0.2ml/min的步进速度（每个平衡点保持0.5分钟以上时间）进行流速的升降，在达到0.6ml/min以上的流速时进行等度流动相比例或梯度流动相初始平衡比例调整；

根据准备样品的准备情况，及时将流速调整到方法要求的值，并等待压力稳定后平衡30分钟以上时间方可进样样品的分析。

当比例调整幅度大于40%的变化时，应进行过渡（选择两步或两步以上调整后达到需要的比例），通常，先调节待加入流动比例为510%，平衡约5分钟以上，后再调节比例到要求的浓度。

梯度泵开机时通常选择有机相调节平衡流速，再进逐步加入水相；

含盐流动相系统应以调节有机相比例510%平衡约30分钟以上，再逐步转换到盐通道。

2、检测器：

常规情况，设定方法要求的波长（UV/PDA）或激发及参比波长（RF）并调整检测器显示范围为-5100mV（/mAU），查看基线，考虑到在连续的20分钟，基线在设置的显示范围内基本平直即可开始样品进样分析。

3、柱温箱：

在方法要求使用柱温箱时，应在仪器电源打开后，及时将柱温箱温度设置到预定值并启动。

4、进样器：

、进样器：

手动进样在系统平衡过程中应扳至Inject位置，以保证系统充分平衡。

三、样品方法的编辑与运行：

1、己有方法的运行：

、己有方法的运行：

注：

通常在“通常在“Start”窗口添加样品时注意保持所做的样品“”窗口添加样品时注意保持所做的样品“Sequence”是唯一的；

”是唯一的；

如果有关机程序，则将关机程序置于样品序列下面（通过“如果有关机程序，则将关机程序置于样品序列下面（通过“MoveDown/MoveUp”功能键来调整）；

功能键来调整）；

对于有自动进样和柱切换功能的用户，可以添加多个序列，但需注意各序列之间需对于有自动进样和柱切换功能的用户，可以添加多个序列，但需注意各序列之间需添加平衡样品添加平衡样品/序列。

序列。

2、新建样品方法及方法的检查执行：

、新建样品方法及方法的检查执行：

四、数据分析方法：

1、数据的选择：

、数据的选择：

在资源管理中（点击Browser图标进入，如下图；

或在仪器控制面板中选择Files-Browser进入）找到数据保存（所要查看数据的Sequence）的位置，双击打开第一个对照品数据，即进入数据查看窗口，双击打开第一个对照品数据，即进入数据查看窗口，点击参比峰（一般为比主成分峰小但大于其它杂质峰做为参比峰，或主成分峰）查看并记录“Area”值，做为最小峰面积的设定参考。

2、数据分析、数据分析（流程图流程图）：

五、数据报告的编辑与数据备份：

1、选择报告模板：

、选择报告模板：

在数据查看窗口中，打开“View”菜单，选择“PrinterLayout”即进入报告界面，根据结果需要，选择合适的报告模板，常用模板如下：

“Intergration”单一样品的标准报告“Calibration（Curr.P）”单标准校正曲线报告“PeakAnalysis”峰分析报告“Calibration（Batch）”混标的校正曲线报告“Summary”数据统计分析报告2、报告模板的编辑、报告模板的编辑：

在报告界面下，打开“Edit”菜单，选择“LayoutMode”打开报告布局编辑功能；

A、标题及方法信息：

、标题及方法信息：

双击报告标题或方法信息部分对内容进行更改或替换（双击后会出现可更换内容的对话框，根据对话框中信息选择需要替换或更改的信息）。

B、报告结果内容：

、报告结果内容：

双击结果部分标题对相关信息进行更改或替换；

如果需要增加则在表下部的空白区右键，根据需要选择“Insert”插入表格或信息；

在双击出现的窗口第一行中可能进行数学组合（、）。

C、谱图：

、谱图：

双击谱图，在弹出的窗口中对相关信息及内容项进行修改和编辑；

“Overlay为谱图的叠加，当选择后点Add进行谱图的增加，选择过程注意检测通道的选择”；

“Comprasion为谱图的对比效果，Offset部分为谱图间距。

”3、数据的备份与输出：

、数据的备份与输出：

A、数据的备份：

、数据的备份：

在资源管理器中选择需要备份的文件源（根目录、文件夹、Sequence、或相应的样品数据），打开“File”菜单，选择“Export/Backup中的Backup”，在弹出窗口中选择数据保存的目标位置，点“Start”开始数据备份，最后点“Finish”完成。

B、数据的输出：

、数据的输出：

变色龙软件提供数据文件以“PDF、ASCII、EXECL、TXT、CMB”等文件形式输出，以满足不同的需要。

选择相就的数据文件（Sequence），打开“File”菜单，选择“BatchReport”项，在弹出窗口中选择报告方法，去除“Printout”标记，点击“Export”，在弹出窗口中选择文件所需的文件类型及所