生物安全手册内容doc之欧阳体创编Word格式.docx
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一、定义8
二、化学杀菌剂9
氯(次氯酸钠)10
乙醇10
碘和碘伏11
三、清除局部环境的污染12
四、洗手/清除手部污染12
五、高压灭菌12
高压灭菌参数12
高压灭菌器的装载13
高压灭菌器使用注意事项13
附录114
设备的安全性14
表A1-1可能产生危害的仪器设备及其操作14
表A1-2仪器设备相关事故的原因8
表A1-3生物安全设备9
表A1-4个体防护装备10
第一部分基本规范
根据感染性微生物的相对危害程度(危险度2级,病原体能够对人致病,但对实验室工作人员或环境不易导致严重危害),本实验室为基础实验室,属于二级生物安全水平。
进入规定
1、在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志(图1)。
2、只有经批准的人员方可进入实验室工作区域。
3、实验室的门应保持关闭。
4、儿童不应被批准或允许进入实验室工作区域。
5、与实验室工作无关的动物不得带入实验室。
人员防护
1、在HIV实验室工作时,任何时候都必须穿着工作服。
2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料的操作时,应戴上合适的手套。
手套用完后,应先消毒再摘除,随后必须洗手。
3、在处理完感染性实验材料后,以及在离开实验室工作区域前,都必须洗手。
4、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害,必须戴安全眼镜、面罩(面具)或其他防护设备。
5、严禁穿着实验室工作服离开实验室,(如去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员工休息室和卫生间)。
6、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。
7、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。
8、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。
9、在实验室内用过的工作服不得和日常服装放在同一柜子内。
实验室工作区
1、实验室应保持清洁整齐,严禁摆放和实验无关的物品。
2、发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作结束之后,都必须清除工作台面的污染。
3、所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前,必须清除污染。
4、在进行包装和运输时必须遵循国家和∕或国际的相关规定。
5、如果窗户可以打开,则应安装防止节肢动物进入的纱窗。
生物安全管理
1、实验室主任(对实验室直接负责的人员)负责制订和采用生物安全管理计划以及安全或操作手册。
2、实验室主管(向实验室主任汇报)应当保证提供常规的实验室安全培训。
3、要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员,同时要求他们阅读生物安全或操作手册,并遵循标准的操作和规程。
实验室主管应当确保所有实验室人员都了解这些要求。
实验室内应备有可供取阅的安全或操作手册。
4、应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。
5、如有必要,应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗,并应妥善保存相应的医学记录。
第二部分实验室技术
实验室伤害以及与工作有关的感染主要是由于人为失误﹑不良实验技术以及仪器使用不当造成的。
本部分概要介绍了避免或尽量减少这类常见问
题的技术和方法。
移液管和移液辅助器的使用
1、应用移液辅助器,严禁用口吸取。
2、所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。
3、不能向含有感染性物质的溶液中吹入气体。
4、感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合。
5、不能将液体从移液管内用力吹出。
6、污染的移液管应完全浸入适当的消毒液中,并在消毒液中浸泡适当时间后再进行处理。
7、盛放废弃移液管的容器应当放在生物安全柜内。
8、为了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散,在工作台面应当放置一块吸有消毒液的纸,使用后将其按感染性废弃物处理。
生物安全柜的使用
1、生物安全柜运行正常时才能使用。
2、生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。
3、安全柜内应尽量少放置器材或标本,不能影响后部压力排风系统的气流循环。
4、所有工作必须在工作台面的中后部进行,并能够通过玻璃观察挡板看到。
5、尽量减少操作者身后的人员活动。
6、操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。
7、不要使实验记录本﹑移液管以及其他物品阻挡空气格栅,因为这将干扰气体流动,引起物品的潜在污染和操作者的暴露。
8、工作完成后以及每天下班前,应使用70%的酒精对生物安全柜的台面进行擦拭,但切忌用酒精擦拭玻璃挡板。
9、在安全柜内的工作开始前和结束后,安全柜的风机应至少运行5min。
10、在生物安全柜内操作时,不能进行文字工作。
血清的分离
1、只有经过严格培训的人员才能进行这项工作。
2、操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置。
3、血液和血清应当小心吸取,而不能倾倒。
严禁用口吸液。
4、移液管使用后应完全浸入适当的消毒液中,并在消毒液中浸泡适当的时间,然后再丢弃或灭菌清洗后重复使用。
5、带有血凝块等的废弃标本管,在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌。
离心机的使用
1、应按照操作手册来操作离心机。
2、离心管在使用前应检查是否破损。
3、用于离心的离心管应当始终牢固盖紧。
4、离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。
5、离心桶和十字轴应按重量配对,并在装载离心管后正确平衡。
6、操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。
7、空离心桶应当用蒸馏水来平衡。
8、每次使用后,要清除离心桶、转子和离心机腔的污染。
9、使用后应当将离心桶倒置存放使平衡液流干。
10、应当每天检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染或弄脏,如污染明显,应重新评估离心操作规范。
冰箱与冰柜的维护和使用
1、冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁,应清理出所有在储存
过程中破碎的安瓿和试管等物品。
清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护,清理后要对内表面进行消毒。
2、储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存者的姓名。
未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。
3、应当保存一份冻存物品的清单。
4、除非有防爆措施,否则冰箱内不能放置易燃溶液。
冰箱门上应注明这一点。
装有冻干物质安瓿的开启
1、首先清除安瓿外表面的污染。
2、如果管内有棉花或纤维塞,可以在管上靠近棉花或纤维塞的中部锉一痕迹。
3、用一团酒精浸泡的棉花将安瓿包起来以保护双手,然后手持安瓿从标记的锉痕处打开。
4、将顶部小心移去并按污染材料处理。
5、如果塞子仍然在安瓿上,用消毒镊子除去。
6、缓慢向安瓿中加入液体来重悬冻干物,避免出现泡沫。
第三部分消毒和灭菌
一、定义
关于消毒和灭菌有许多不同的术语,下面是生物安全中较常用的:
抗菌剂(antimicrobial)能够杀死微生物或抑制它们生长和繁殖的制剂。
防腐剂(antiseptic)能够抑制微生物生长和繁殖但不足将其杀灭的物质。
防腐剂经常应用于体表。
生物杀灭剂(biocide)所有能够杀死生物体的制剂的统称。
化学杀菌剂(chemicalgermcide)用于杀死微生物的化学品或化学混合物。
清除污染(decontamination)去除和/或杀死微生物的任何过程。
该词也用于去除或中和有危害的化学品和放射性物质。
消毒剂(disinfectant)用于杀死微生物的化学品或化学混合物,但不一定杀死其孢子。
消毒剂常用于非生命物体或其表面。
消毒(disinfection)杀死微生物的物理或化学手段,但不一定杀死其孢子。
灭菌剂(microbicide)能够杀死微生物的化学品或化学混合物。
该词常常可以代替“生物杀灭剂”、“化学杀菌剂”或“抗菌剂”。
杀孢子剂(sporocide)用于杀死微生物和孢子的化学品或化学混合物。
灭菌(sterilization)杀死和/或去除所有微生物及其孢子的过程。
二、化学杀菌剂
许多杀菌剂对人或环境有害,应当按生产商的说明小心地进行选择、贮存、操作、使用和废弃。
为了个人的安全,建议在稀释化学杀菌剂时应戴手套、围裙和保护眼睛的器具。
下面介绍一些常规使用的化学杀菌剂,并列出它们的一般用途和安全特征。
除非另外标注,杀菌剂的浓度用重量/体积(w/v)来表示。
表3-1汇总了含氯消毒剂的推荐使用浓度。
表1含氯消毒剂的推荐使用浓度
“清洁”情况下a
“污染”情况下b
所需的有效氯浓度
0.1%(1g/L)
0.5%(5g/L)
次氯酸钠溶液(含有5%的有效氯)
20mL/L
100mL/L
次氯酸钙(含有70%的有效氯)
1.4g/L
7.0g/L
二氯异氰尿酸钠粉剂(含60%的有效氯)
1.7g/L
8.5g/L
二氯异氰尿酸钠片剂(每片含1.5g有效氯)
每升1片
每升4片
氯胺(含有25%的有效氯)c
20g/L
a去除大部分污染材料后
b溢流情况(如血液)或大量污染材料没有除去时
c参见正文
氯(次氯酸钠)
1、氯属于快速作用的氧化剂,是一种可广泛应用的广谱化学杀菌剂。
它一般以次氯酸钠(NaOCl)溶液来作为漂白剂销售。
但氯的许多副产物可能对人体及环境有害,应该避免滥用含氯消毒剂,特别是漂白剂。
2、常规实验室消毒剂的有效氯浓度为1g/L。
处理生物危害性物质的溢出以及含有大量有机物的情况时用含有5g/L有效氯的更强作用的溶液。
家用漂白剂的次氯酸钠溶液含有50g/L的有效氯,工业用漂白剂的次氯酸钠溶液含有近120g/L的有效氯,因此必须进行相应的稀释来达到工作浓度。
3、次氯酸钙[Ca(ClO)2]的颗粒或片剂一般含有70%的有效氯。
用颗粒或片剂配制浓度1.4g/L或7.0g/L的溶液,其有效氯浓度分别为1g/L和5g/L。
4、不建议将漂白剂当作防腐剂使用,但可以用作普通目的的消毒剂以及用于浸泡非金属类的污染材料。
在紧急情况下也可以用终浓度含1~2mg/L有效氯的漂白剂来消毒饮用水。
5、氯气具有强毒性。
因此漂白剂只能在通风良好的地方储存和使用。
6、漂白剂不能与酸混合以避免氯气快速释放。
乙醇
1、乙醇(C2H5OH)对于繁殖的细菌、真菌和含脂病毒具有活性,但不能灭活孢子,而对非含脂病毒的作用则不确定。
2、其水溶液最有效的使用浓度约为70%(v/v);
更高或更低的浓度均不适宜杀菌。
3、醇类溶液的主要优点是处理后物品不会留下任何残留物。
4、将乙醇与其他试剂混合使用比单独使用更有效,如70%(v/v)乙醇和100g/L的甲醛混合使用,以及使用含有2g/L有效氯的乙醇。
5、70%(v/v)乙醇溶液可以用于消毒皮肤、实验台和生物安全柜的工作台面,以及浸泡小的外科手术器械。
6、由于乙醇可以使皮肤干燥,所以经常与润滑剂混合使用。
7、在不便于或不可能进行彻底洗手的情况下,推荐使用含乙醇的擦手液对轻度污染的手进行消毒。
但是必须记住,乙醇对孢子无效,而且不能杀死所有类型的非含脂类病毒。
8、乙醇是易挥发和易燃的,不能在明火附近使用。
9、其工作液应储存在适当的容器内以避免醇类挥发。
10、乙醇可以硬化橡胶并溶解某些胶质。
11、为了避免乙醇用于其他非灭菌目的,在实验室里对乙醇进行专门的清点和储存是非常重要的。
12、含有乙醇溶液的瓶子必须清楚标记以避免被意外高压灭菌。
碘和碘伏
1、这类消毒剂的作用与氯类似,只是有机质对它们的抑制作用略弱。
2、碘可以使纤维和环境表面着色,一般不适合作为消毒剂
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