阻碍油菜菌核菌菌核形成的因素及菌查对金属离子的富集作用Word格式.docx
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油菜菌核病是世界范围内的一种农作物病害,也是我国油菜种植中病害之首,是由油菜菌核菌侵染引发的。
在病原体侵染油菜的循环进程中,菌核是越冬越夏及抗击不良环境的休眠体。
因此研究阻碍菌核形成的因素显得十分必要。
郑雯等“培育条件春油菜菌核病产生菌核阻碍的研究”中对菌核产生菌核最适温度,最适pH,最适碳源,最适氮源,最适培育基等作初步研究。
倪守延“油菜菌核病菌营养生理研究”中也对上述内容作过相关研究。
另外史建荣等的“油菜菌核病菌生物学特性研究”对pH和温度作了系统研究。
除另外,还有一些相关论文,但以上研究都未涉及到油菜菌核菌关于多元醇碳源的利用情形及对无机离子吸收和富集情形,本文那么对这些方面进行了初步探讨
1材料与方式
菌种
油菜菌核菌(Sclerotiniasclerotiorum)由鲁东大学生命科学学院微生物实验室保藏。
试剂
所用试剂为国产分析纯或化学纯试剂。
碳源种类和浓度对菌丝生长及菌核形成的阻碍
以%蛋白胨,%营养琼脂作为基础培育基,在基础培育基中再别离添加葡萄糖、淀粉、甘油、甘露醇、乙醇五种碳源。
每种碳源作质量分数为2%、4%、8%、16%、20%和空白对照七个处置,每一个处置浓度均设3个重复。
在每一个培育皿中加入培育基25ml,平板中央接大小一致的菌核,接种后置30℃恒温培育,每隔12小时观看一次,测量菌落直径,并观看菌核是不是形成,记录形成菌核时刻。
测定每一个培育皿中形成菌核的数量及干重(以105℃干燥至恒重)。
无机离子种类及浓度对菌丝生长和菌核形成的阻碍
以%蛋白胨,%营养琼脂和2%的葡萄糖为基础培育基,在基础培育基上别离添加KCl、MgSO4、CaCl2,其中每一种无机盐别离作%、%、%和空白对照组四个处置,遍地理均设3个重复。
在每一个培育皿中加入培育基25ml,平板中央接大小一致的菌核,接种后置30℃恒温培育,每隔12小时观看一次,测量菌丝直径,观看菌核是不是形成,并记录形成菌核的时刻。
测定每一个培育皿形成的菌核数量及干重质量(105℃干燥至恒重)。
Pb++和Hg++对菌丝生长和菌核形成的阻碍
别离以%、%、%的已酸铅、氯化汞加入2%的葡萄糖,%蛋白胨,2%琼脂培育基中。
每隔12小时观看一次,测量记录菌落直径,观看菌核是不是生长。
菌查对K+、Ga++和Mg++的富集作用
1.6.1仪器和工作条件
AA320N型原子吸收分光光度计(上海周密科学仪器,附带微机和打印机),3种元素空心阴极灯。
测试条件见表1。
表1原子吸收光谱法测定的工作条件
元素
波长(nm)
狭缝(mm)
灯电流(mA)
PMT电压(V)
空气流量(L/min)
乙炔流量(L/min)
Ca
Mg
K
1.6.2试剂和标准溶液
3种元素(Mg、Ca、K)的标准溶液购自国家标准物质研究中心(储蓄液的浓度均为100µ
g/ml)。
HNO3(A.R.,济南试剂总厂),HClO4(A.R.,上海桃浦化工厂),H2SO4(A.R.,北京化学试剂厂),HCl(A.R.,青岛化学试剂总厂)。
实验用水为双蒸水。
1.6.3样品溶液的制备
取适量的菌核置于电热干燥箱中,在105℃下烘干至恒重。
准确称取克的烘干菌核于100ml的小烧杯中,加入混酸HNO3-HClO4(3:
1)20ml后加热消化40min,定量转移并定容至100ml。
取上层清液进行测定。
1.6.4标准曲线
将3种元素的储蓄液稀释成浓度适宜的系列标准溶液。
按表1所列仪器测试条件选取已配好的系列标准溶液进行测试,所得标准曲线均为直线,相关系数均大于,说明工作曲线线性条件良好。
2.结果与分析
碳源种类核浓度对菌核形成的阻碍
葡萄糖浓度在2%—12%范围内都适合于菌丝生长和菌核形成,结果见表2,菌核质量较大。
与其它碳源相较菌核形成时刻短。
表2不同浓度葡萄糖对菌核形成的阻碍(培育10天)
葡萄糖浓度
(%)
天菌落直径(cm)
开始形成菌核的时间(d)
菌核数
(个/皿)
菌核干重
(g/皿)
0%
2%
4%
6%
12%
16%
20%
-
4
5
6
41
31
29
25
3
在所试浓度下,淀粉浓度在2%时菌核形成数量最多,质量最重,浓度高的淀粉有利于菌丝生长,但并非增进菌核产生。
见表3。
表3不同浓度淀粉对菌核形成的阻碍(培育11天)
淀粉浓度
4天菌落直径(cm)
8%
61
39
36
35
22
丙三醇2%—20%范围内随着其浓度的升高菌核生成数量也增多,质量数增大。
和其他碳源相较,在甘油培育基上形成的菌核专门大,有的可达,这种庞大菌核的形成机制和意义有待进一步研究。
菌丝可在20%的丙三醇上仍能生长较好,说明该菌株耐高渗透压的能力较强。
见表4。
表4不同丙三醇浓度对菌核形成的阻碍(培育32天)
丙三醇浓度
6天菌落直径
(cm)
14
12
1
11
74
以甘露醇为碳源时,在20%浓度下菌核形成数量最多,质量最大,见表5。
表5不同浓度甘露醇对菌核形成的阻碍(培育32天)
甘露醇浓度
8天菌落直径
开始形成菌核的时间(d)
23
21
油菜菌核菌对乙醇的利用速度极慢,在2%—20%的浓度范围内,随着浓度升高菌丝生长速度越快,培育16天,20%浓度组菌核形成。
见表6。
表6不同浓度乙醇对菌核形成的阻碍(培育32天)
乙醇浓度
15天菌落直径
开始形成菌核的时间(d)
08
16
无机离子种类及浓度对菌核形成的阻碍
K+、Ca2+和Mg2+离子对菌丝的生长及菌核的形成均有增进作用。
KCl为%、CaCl2为%和MgSO4为%的浓度下,都能显著增进菌核形成,菌核干重别离比对照提高%、%和%,菌核形成时刻缩短。
表7不同浓度离子对菌核形成的阻碍(培育11天)
离子类型及浓度
菌核干重(g/皿)
KCl
CaCl2
MgSO4
对照
%
%
66
65
95
76
68
79
70
菌查对K+、Ca2+、Mg2+离子具有较强的富集能力,菌核在%K+、%Ca2+、%Mg2+生长富集各离子别离是对照的、、倍。
随着K+、Ca2+、Mg2+离子浓度的升高菌查对离子富集也进一步提高。
见表8和图1。
表8菌查对不同离子的富集
离子浓度
菌核K+含量(mg/g)
菌核Ca2+含量(mg/g)
菌核Mg2+含量(mg/g)
图1菌查对不同离子的富集
两种重金属对菌丝生长和菌核形成的阻碍
%的乙酸铅浓度下,菌丝生长和菌核形成都受到抑制。
见表9。
表9菌核在乙酸铅上生长情形
96小时菌丝直径(cm)
菌核能否形成
能
否
%以上浓度的的氯化汞抑制菌丝生长和菌核的形成,见表10。
表10菌核在氯化汞上生长情形
氯化汞浓度
菌核能否生长
2
长满并产生菌核
3.讨论:
葡萄糖,甘露醇,乙醇,淀粉对油菜菌核
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