培养基实验报告Word文档下载推荐.docx
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待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀.继续加热,此时由于蒸气不能道出,而增加了灭菌器内的压力,从而使沸点增高,得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供作微生物生长繁殖之用。
基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素,而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂,琼脂在常用浓度下96℃时溶化,实际应用时,一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌,因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:
牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000mlpH7.4—7.6实验仪器与药品1.溶液或试剂:
牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/LNaOH、1mol/LHCl。
2.仪器或其他用具:
试管、三角瓶、1000ml烧杯(或1000ml刻度搪瓷杯)、量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(pH5.5-9.0)、普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。
实验步骤
(一)牛肉膏蛋白胨培养基的制备1.称量(假定配制1000ml培养基)按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯(或1000ml刻度搪瓷杯)中.牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上,称量后直接放人水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。
2.溶化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量(如约700ml),用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解,将药品完全溶解后,补充水到所需的总体积(1000ml);
如果配制固体培养基时,将称好的琼脂放人已溶的药品中,再加热溶化,最后补足所损失的水分。
3.调pH在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH,如果偏酸.用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其PH,直至pH达7.4-7.6。
反之,用1mol/LHCl进行调节。
4.过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利某些实验结果的观察。
可以省去(本实验勿需过滤)。
5.分装液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
分装三角瓶的虽则根据需要而定,一般以不超过三角瓶容积的一半为宜,如果是用于振荡培养用,则根据通气量的要求酌情减少;
有的液体培养基在灭菌后,需要补加一定量的其他无菌成分,如抗生素等,则装量一定要准确。
固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面。
分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
半固体分装一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
6.加塞培养基分装完毕后,在试管口或三角瓶口上塞上棉塞(或硅胶塞、金属或高温塑料试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内面造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。
7.包扎加塞后,将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、配制日期。
8.灭菌将上述培养基以0.103MPa,l21℃,20min高压蒸气灭菌。
9.摆斜面将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜l0.无菌检查将灭菌培养基放入37℃的恒温箱中培养24-48h.以捡查灭菌是否彻底。
注意事项1.蛋白胨很容易吸湿,在称取时动作要迅速,另外,称量时严防药品混杂.一把牛角匙用于一种药品.或称取一种药品后,洗净——擦干——再称职另一药品——瓶盖也不要盖错。
2.在琼脂溶化过程中.应控制火力,以免培养基因沸腾而溢出容器。
同时,需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦,制培养基时,不可用铜或铁锅加热溶化,以免离子进入培养基中,影响细菌生长。
3.对于有些要求PH较精确的微生物,其PH的调节可用酸度计进行(使用方法、可参考有关说明书)。
pH不要调过头,以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。
配制pH低的琼脂培养基时.若预先记好PH并在高压蒸汽下灭菌,则琼脂因水解不能凝固。
因此,应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合,或在中性pH条件下灭菌,再调整pH。
4.分装过程中,注意不要使培养基沾在管(瓶)口上,以免沾污面塞而引起污染。
(二)高压蒸汽灭菌法步骤1.加水使用前在锅内加入适量的水,加水不可过少,以防将灭菌锅烧干,引起炸裂事故。
加水过多有可能引起灭菌物积水。
水面与三角架相平为宜2.装料将灭菌物品放在灭菌桶中,不要装得过满。
3.加盖盖好锅盖,按对称方法旋紧四周固定螺旋,打开排气阀。
4.加热排气加热后水蒸气与空气一起从排气孔排出,待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时,排出的气流很强并有嘘声时,维持2—3min以排除冷空气。
如灭菌物品较大或不易透气,应适当延长排气时间,务必使空气充分排除,然后将排气阀关闭。
5.加压将排气阀关闭6.保压当压力升至0.1MPa时,温度达121℃,此时应注意观察,控制热源。
保持压力稳定,维持20-30min后,切断热源。
7.自然降压当压力表降至“0”处,稍停,使温度继续降至100℃以下后,打开排气阀,旋开固定螺旋,开盖,取出灭菌物。
注意:
切勿在锅内压力尚在“0”点以上,温度也在100℃以上时开启排气阀,否则会因压力骤然降低,而造成培养基剧烈沸腾冲出管口或瓶口,污染棉塞,以后培养时引起杂菌污染。
压力降到“0”时,方可打开排气阀。
8.保养灭菌完毕取出物品后,将锅内余水倒出,以保持内壁及内胆干燥,盖好锅盖。
9.培养基无菌检查五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧,注意温度的时间控制,70oC以下放物、取物。
4.高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物。
5.过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快,滤膜要注意清洗保存。
陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目《培养基的制备与消毒灭菌》姓名学号专业批次/层次指导教师学习中心实验报告篇二:
培养基配制及灭菌实验报告单培养基配制及灭菌实验报告单班级名字小组成员时间指导老师一、实验目的了解培养基的配制原理;
掌握配制培养基的一般方法和步骤;
了解常见灭菌、清毒基本原理及方法;
掌握高压蒸汽灭菌操作方法。
二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。
培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。
根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法。
马铃薯培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
平板划线接种法(分离培养法):
是将细菌分离培养的常用技术,其目的是将混有多种细菌的培养物,或标本中不同的细菌(病原菌与非病原菌)使其分散生长,形成单个菌落或分离出单一菌株,便于识别鉴定。
平板划线接种方法较多,其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。
三、试剂与器材1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、镊子等。
2.试剂马铃薯、葡萄糖、琼脂、水等四、实验内容1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2高压蒸汽灭菌:
加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排气→取物→无菌检查五、关键步骤及注意事1.要严格按配方配制。
3.高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物。
六.讨论1.如何检验灭菌后培养基是否合格?
2.高压蒸气灭菌开始之前,为什么要将锅内冷空气排尽?
灭菌完毕后,为什么要待降到0时才能打开排气阀,开盖取物?
篇三:
微生物实验报告学号:
微生物学大实验班级:
姓名:
1.培养基的配置及消毒灭菌1.1通用培养基的配制(液体、固体、半固体三种)1.1.1实验目的
(1)了解配制微生物培养基的原理和培养基的种类。
(2)掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤。
1.1.2实验原理培养异养细菌最常用的培养基?
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、胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物,因此完全能满足大多数异养细菌对营养的需要。
1.1.3材料和器皿
(1)试剂:
牛肉膏、蛋白胨,NaCl,1mol/LNaOH,1mol/LHCl。
(2)器皿:
台秤,玻璃烧杯,搪瓷烧杯,三角瓶,量筒,漏斗,试管,玻璃棒等。
(3)其他:
pH试纸,牛角匙,牛皮纸,棉花,纱绳,灭菌锅等。
1.1.4方法和步骤1.配制牛肉膏蛋白胨培养基
(1)配方及配量:
牛肉膏1.5g,蛋白胨5g,NaCl2.5g,琼脂(固体6g半固体0.4g液体不加)蒸馏水500ml
(2)称取药品:
按照营养基配方与配量分别称取各药品,取少于总量的水于烧杯中,将培养基成分(琼脂除外)逐一加入水中待溶。
(3)加热溶解:
将烧杯放在石棉网上,用文火加热,并不断用玻璃棒搅拌,使各药品快速溶解,然后补水至500ml。
(4)调节pH:
用1mol/lNaOH调pH至7.2—7.4.避免调过碱,应缓慢加入,边加入边搅拌,并用pH试纸测酸碱度值。
(5)分装:
将配制好的培养基分装到相应的玻璃器皿中,并在固体和半固体培养基中加入琼脂,贴好标签,待灭菌。
1.2加压蒸汽灭菌法1.2.1实验目的懂得加压蒸汽灭菌
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