药学生物技术概论总结最新版Word文件下载.docx
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分为罐式连续发酵和管道式连续发酵。
11.动物组织培养从体内取出组织,模拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下,使之生存和生长,并维持其结构和功能的方法。
习惯上又泛指所有体外培养,即:
器官培养、组织培养和细胞培养。
12.接触抑制细胞从接种到长满底物表面后,由于细胞繁殖数量增多相互接触,不再增加。
13.细胞克隆即单细胞分离培养,把一个单细胞从一个群体中分离出来单独培养,使之重新繁衍成为一个新的细胞群体的培养技术。
14.克隆形成率细胞群中单个细胞形成的克隆百分数称为克隆形成率,用来表示细胞生活力和独立生长能力。
15.克隆接种率
16.植物组织培养在无菌条件下,利用人工培养基对植物组织的培养,包括原生质体、悬浮细胞和植物器官等的培养。
17.细胞全能性任何有完整的细胞核的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的遗传信息,理论上都能发育成为一颗植株。
18.外植体从活植物体上切下进行培养的那部分组织或器官。
19.愈伤组织在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
20.原生质体植物细胞除去细胞壁后剩下的球形细胞。
21.单克隆抗体单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗原分子。
22.抗体酶又称催化抗体,结合了酶与抗体的优点,既可以起酶促催化作用,又可以起抗体的选择性和专一性结合抗原作用。
简答
1.育种选育目的(生产方面)a.提高发酵产量b.改进菌种性能c.产生新的发酵产物d.去除多余组分
2.自然选育方法及一般过程
出发菌株--斜面培养--单孢子悬浮液--单菌落分离--初筛--复筛--高产菌株稳定性试验和菌种特性考察--放大生产--随时留种保藏,做好菌种保藏工作
3.诱变选育方法及一般过程
出发菌株--斜面培养--单孢子悬浮液--诱变处理--单菌落分离(使用分离培养基及理性化筛选模型等)--初筛--复筛--高产菌株稳定性和菌种特性考察--放大生产--随时留种保藏,做好育种保藏工作
4.突变株的三种类型a.正变株>110%b.负变株<90%c.稳定株90-110%5.诱变剂分类a.物理诱变剂b.化学诱变剂c.生物诱变剂6.诱变主要环节a.出发菌株的选择b.诱变处理c.突变株筛选d.筛选方法
7.培养基成分及举例a.碳源糖类b.氮源蛋白质
c.磷源和硫源kh2po4k2hpo4na2so4mgso4d.无机离子p、s、fe、mg、ca等e.生长因子维生素、氨基酸f.前体苯乙酸、苯氧乙酸g.诱导剂l因子、b因子
h.促进剂和抑制剂促进剂巴比妥抑制剂溴化物i.水分
j.消沫剂动、植物油8.培养基种类
(1)合成培养基和复合培养基
(2)固体培养基和液体培养基
(3)孢子培养基、种子培养基、发酵培养基和补料
培养基
9.生产种子的制备那两个过程a.菌种岗位的孢子制备b.生产岗位的种子制备10.菌种保藏原理
使微生物代谢于不活跃、生长繁殖受抑制的休眠状态,以减少菌种的变异。
11.菌种保藏基本方法
斜面低温保藏法(短期保藏)甘油保藏法(短、中期保藏)大(小)米保藏法(中期保藏)麸皮保藏法(中期保藏)孢子滤纸保藏法(中期保藏)砂土管保藏法(中期保藏)液体石蜡保藏法(中期保藏)真空冷冻干燥法(中、长期保藏)液氮超低温保藏法(中、长期保藏)12.发酵类型(3种)
分批发酵补料分批发酵连续发酵13.发酵过程控制参数分类(举例)
物理参数:
温度、压力、搅拌转速、搅拌功率、空气流量
化学参数:
ph、基质浓度、产物浓度、溶解氧浓度、废气中氧的含量、废气中co2的含量生物参数:
菌体浓度、菌丝形态14.影响孢子/种子质量的因素
孢子:
培养基、培养温度和湿度、培养时间、冷藏时间、接种量、菌种保藏方法、定期纯化、选育菌种种子:
培养基、培养条件、种龄、接种量15.细胞工程主要领域
动物组织培养、植物组织培养、细胞融合与单克隆抗体、细胞拆合与染色体工程、转基因生物、胚胎工程、细胞与基因治疗
16.细胞类型(四种贴壁/悬浮)
贴壁:
上皮细胞型、成纤维细胞型、游走细胞型、多形细胞型
悬浮:
悬浮在溶液中
17.细胞培养中常用消毒方法
高压蒸汽消毒、干燥高温消毒、过滤除菌、化学方法、紫外线
18.天然动物细胞培养基(4种)
血清、血浆、组织浸出液、水解乳蛋白19.常用四种细胞培养法
单盖玻片悬滴培养法、培养瓶原代培养、旋转管培养法、灌注小室培养法
20.提高细胞克隆形成率措施
使用适应性培养基、利用饲主细胞、牛胎血清、1-10国际单位/ml营养液的胰岛素、多用5%的浓度的co2、底物特殊处理、适应性底物
21.抗癌药物细胞敏感性的实验方法美蓝法、染料排斥法、集落形成试验法、噻唑盐(mtt)比色法、生长曲线测定法、放射性同位素的3h-tdr掺入法、抗癌药物的效能比(cfu-f)测定法22.大规模动物细胞培养法
气升式深层培养系统、微载体培养系统、微囊培养系统、中空纤维培养系统
23.原生质体制备法(酶/机)酶解法、机械法
24.植物细胞原生质体融合后杂种细胞筛选法(4)遗传互补筛选法、抗体互补筛选法、利用物理特性筛选法、利用生长特性筛选法
25.动物细胞原生质体融合后杂种细胞筛选法(3)利用抗药性筛选系统、营养互补筛选系统、温度敏感突变型杂种细胞的筛选
26.单克隆抗体大规模制备法
利用微载体、微囊、旋转瓶、中空纤维培养系统等进行培养。
27.基因工程(geneticengineering)就是把外源基因
通过体外重组后导入受体细胞内,使这个基因能在受体细胞内复制,转录,翻译表达的操作。
四大要素:
目的基因,载体,受体细胞,工具酶六步:
分离,酶切,连接,转化,筛选,验证28.限制性核酸内切酶(restrictionendonucleases,
re):
凡是能识别和切割双链dna分子中特异核苷酸序列的dna水解酶,简称限制性内切酶。
特性:
切割特异性,在特定部位上水解双链dna中每一条链上的磷酸二酯键,从而造成双链缺口,切断dna分子。
29.星号活力(staractivity),又称第二活力(second
activity),指酶反应条件改变时,酶的识别特异性降低,使酶在dna分子中的切点数增加。
造成星号活力的因素:
a、甘油浓度过高,酶切反应的体积至少要比限制性内切酶本身体积大十倍;
b、酶单位数/dna比值过高,超过10u/mgdna;
c、低离子强度,小于25mmol/l;
d、高ph值(ph)8.0);
e、有机溶剂的存在;
f、二价离子的改变30.连接酶(ligase):
催化在2条dna链之间形成磷
酸二酯键的酶,最适温度:
1531.最常用的质粒提取方法:
实验室常用三法--碱变
性法,氯化铯密度梯度离心法,沸水浴法。
注意事项:
a、新配制,为了保证naoh没有吸收到空气的co2而减弱了碱性,因裂解细胞的主要是碱,而非sds,所以叫碱裂解法。
b、操作要迅速,因在碱性条件下,基因组dna片段会慢慢断裂。
c、颠倒时动作要轻柔,否则,基因组dna也会断裂。
32.大肠杆菌作为受体细胞的优点、缺点。
大肠杆菌(dna重组实验和基因工程的主要受体菌);
优点:
a、遗传背景清楚,载体受体系统完备;
b、培养简单,生长迅速,培养周期短,抗污染能力强;
c、重组子稳定,目的基因表达水平高。
不足:
a、不能随重组蛋白质进行修饰加工b、蛋白质分泌性能不好,形成包涵体c、蛋白质产物不能糖基化d、大肠杆菌细胞中含有热原物质
用于外源dna的扩增和克隆、基因的高效表达、基因文库的构建
33.已知序列目的基因的获得方法:
pcr、化学合成法34.pcr(polymerasechainreaction)法,又称聚合
酶链反应或扩增技术,是一种高效快速的体外扩增技术。
35.使用pcr法克隆目的基因的前提条件是:
已知待
扩增目的基因或dna片段两侧的序列,根据该序列化学合成扩展反应必需的引物。
36.pcr步骤:
95℃变形_双链dna模板在热作用下,
氢键断裂,形成单链dna;
60℃退火_系统温度降低,引物与dna模板结合,形成局部双链;
72℃延伸_在dna聚合酶的作用下,以dntp为原料,从引物的5’端-3’端延伸,合成与模板互补的dna链。
37.影响pcr的因素:
热dna聚合酶;
pcr反应的
缓冲液;
引物(引物长度、g+c含量、碱基的随机分布、引物浓度);
dntp;
温度循环参数。
引物作用:
引物决定着扩增的特异性和扩增的效率。
38.生物技术特点:
a、目的产物在初始原料中的含量
较低;
b、含目的产物的初始原料组成复杂,出来目的产物外,还有大量的细胞、代谢物、残留培养基、无机盐等。
特别是产物类似物对目的产物的分离纯化影响很大;
c、目的产物的稳定性差,具有生物活性的物质对ph、温度、金属离子、有机溶剂、剪切刀、表面张力等十分敏感,容易使其失活、变性;
d、种类繁多,包括大、中、小分子,结构简单或复杂的有机化合物以及结构复杂又性质各异的生物活性物质;
e、应用面广,对其质量、纯度要求高,甚至要求无菌、无热源。
39.分离纯化的技术要求:
a、技术条件要求温和,能保持目的产物的生物活性;
b、选择性要好,能从复杂的混合物中有效地将目的产物分离出来,达到较高纯化倍数;
c、收率要高;
d、两个技术之间要能直接衔接,不需要对材料加以处理或调整,这样可减少工艺步骤;
e、整个分离纯化过程要快,能够满足高生产率要求。
40.分离纯化过程中固液分离的方法:
分离细胞碎片比
较难,一般用离心和膜过滤。
41.分离纯化过程中常用的层析方法是根据物质的什
么性质分离的:
离子交换层析(ion-exchangechromatography,iec)是以蛋白质分子净电荷和表面电荷分布为分离基础的;
凝胶过滤层析(gelfiltrationchromatography,gfc)又称排阻层析或分子筛方法,主要是根据蛋白质的大小和形状,即蛋白质的质量进行分离和纯化;
亲和层析(affinitychromatography,ac)根据生物分子间的亲和力分离。
42.蛋白质含量测定常用方法:
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