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当初始克隆中的外源
片段较长,含有许多目的基因以外的
片段时,在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行,将目的基因所对应的一小段
找出来,这个过程叫“亚克隆”。
填空题问题:
基因操作(Gene
manipulation)的核心部分是基因克隆(gene
cloning),
gene
cloning
的基本要点有(),()和()。
克隆基因的类型;
受体的选择;
载体的选择
()是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的,也可以是();
可以是(),也可以是RNA;
可以存在于染色体上,也可以()
基因;
连续;
DNA;
存在于染色体之外(如质粒,噬菌体等)
基因操作并不是一个法律概念,除了包括基因克隆外,还包括基因的()、()、()和()等与基因研究相关的内容。
表达;
调控;
检测;
改造
启动子(Promotor)是指()。
通常一个
Gene
是否表达,()是关键的一步,是起决定作用的。
在转录过程中,Promoter还是()的结合位点。
基因转录过程中控制起始的部位;
转录起始;
聚合酶
原核生物的
polymerase
主要由两部分组成:
()和(),其中σ-因子并不参与
的合成,它的作用主要是()。
核心酶
;
σ因子;
识别要转录的起始位点
从()到()的这一段距离称为一个转录单位,或者一个转录产物,其中可包括一个或者多个
。
启动区;
终止区
转录终止子主要有两种,一种是(),另一种是()。
依赖ρ因子;
不依赖ρ因子
的书写方式,通常是写出的
序列总是与()相同的那条链,方向是从()到()。
对于碱基的位置,一般自转录起始点向两个方向编号,其中转录起始点定为(),()定为
-1
mRNA;
5'
3'
+1;
在起始点上游第一个碱基
重叠基因(Overlapping
gene)是指(),间隔基因(Interrupted
gene)是指()
一个基因的序列中,单个
序列可编码一个以上的蛋白质;
在编码序列中间插入的一段无编码作用的碱基序列
简答题问题:
简述基因克隆的两个基本特征?
基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸分子(一般情况下都是
DNA)在不同宿主中的繁殖,打破自然种的界限将来自于不相关物种的基因放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征,基因操作的另一个重要特征是繁殖。
谈谈你对
的认识,并简要说说
概念的发展情况?
能够表达和产生基因产物(Proteinor
RNA)的
序列(可自由发挥,发展情况请查找相关资料)基因概念的发展:
基因作为遗传学中的专用术语,其概念每发展一步都意味着遗传学乃至整个生物学的一次革命和突破,其内容的每次丰富和充实都凝聚着生物学家们的滴滴心血。
“基因”概念的提出:
遗传学的奠基人孟德尔在
1866
年发表的论文《植物杂交试验》指出生物每一个性状都是通过遗传因子来传递的,遗传因子是一些独立的遗传单位。
这样把可观察的遗传性状和控制它的内在的遗传因子区分开来了,遗传因子作为基因的雏形名词诞生了。
1909
年丹麦遗传学家约翰逊在《精密遗传学原理》一书中提出“基因”概念,以此来替代孟德尔假定的“遗传因子”。
从此,能够表达和产生基因产物(protein
or
序列(可自由发挥)
“基因”一词一直伴随着遗传学发展至今。
基因结构和功能的探索:
摩尔根和他的学生们利用果蝇作了大量的潜心研究,
1926
年他的巨著《基因论》出版,从而建立了著名的基因学说,首次完成了当时最新的基因概念的描述,即基因以直线形式排列,它决定着一个特定的性状,而且能发生突变并随着染色体同源节段的互换而交换,它不仅是决定性状的功能单位,而且是一个突变单位和交换单位。
1941
年比德尔和塔特姆提出一个基因一个酶说;
1949
年鲍林与合作者在研究镰刀型细胞贫血症时推论基因决定着多肽链的氨基酸顺序;
1944
年艾弗里、麦卡蒂首次用实验明确证实:
是遗传信息的载体;
1952
年赫尔希和蔡斯进一步证明遗传物质是
而不是蛋白质;
1953
年美国分子生物学家沃森和英国分子生物学家克里克通力协作,根据
X
射线衍射分析,提出了著名的
双螺旋结构模型,进一步说明基因成分就是
,它控制着蛋白质的合成;
1957
年法国遗传学家本滋尔以
T4
噬菌体作为研究材料分析了基因内部的精细结构,提出了顺反子学说。
这个学说打破了过去关于基因是突变、重组、决定遗传性状的“三位一体”概念及基因是最小的不可分割的遗传单位的观点,从而认为基因为
分子上一段核苷酸序列,负责着遗传信息的传递,一个基因内部仍可划分为若干个起作用的小单位,即可区分成顺反子、突变子和重组子。
一个作用子通常决定一种多肽链合成,一个基因包含一个或几个作用子。
突变子指基因内突变的最小单位,而重组子为最小的重组合单位,只包含一对核苷酸。
所有这些均是基因概念的伟大突破。
关于基因的本质确定后,人们又把研究视线转移到基因传递遗传信息的过程上。
1961
年开始,尼伦伯格和科拉纳等人逐步搞清了基因以核苷酸三联为一组编码氨基酸,并在
1967
年破译了全部
64
个遗传密码,这样把核酸密码和蛋白质合成联系起来。
然后,沃森和克里克等人提出的“中心法则”更加明确地揭示了生命活动的基本过程。
1970
年特明以在劳斯肉瘤病毒内发现逆转录酶这一成就进步发展和完善了“中心法则”,至此,遗传信息传递的过程已较清晰地展示在人们的眼前。
过去人们对基因的功能理解是单一的即作为蛋白质合成的模板。
年法国雅各布和莫诺的研究成果,又大大扩大了人们关于基因功能的视野。
他们在研究大肠杆菌乳糖代谢的调节机制中发现了有些基因不起合成蛋白质模板作用,只起调节或操纵作用,提出了操纵子学说。
从此根据基因功能把基因分为结构基因、调节基因和操纵基因。
基因概念的进一步发展:
70
年代后,基因的概念随着多学科渗透和实验手段日新月异又有突飞猛进的发展,主要有以下几个方面。
基因具重叠性、内含子和外显子、管家基因与奢侈基因和基因的游动性。
所有这些成果无疑给基因概念中注入鲜活科学的内容,帮助人们揭开层层面纱去更加全面了解基因的真面目。
时代在发展,科学在进步,基因概念的深入发展,必将对人类的文明进步产生强大的推动作用。
如何理解
及其产物的共线性和非共线性?
基因决定蛋白质的序列组成,是由密码子对应特定氨基酸所决定的。
当一个基因的核苷酸序列与其产物的氨基酸序列是一一对应时,则表明它们是共线性的。
在原核生物中,基因及其产物是共线性的。
年代以来,在真核生物中,发现了间断基因,后来发现这种间断基因在真核生物中普遍存在,也就是后来所说的基因间存在着内含子。
内含子指真核生物基因中不能被翻译成蛋白质的
片断,但可被转录,当两侧序列的转录
被剪接在一起时,就将内含子转录的
从整个转录物中除去。
外显子是指能够翻译成蛋白质的任一间断的基因片段,一个基因可有多个外显子。
内含子并不是一成不变的,具有相对性,对一个
片断来说,在某个基因中是内含子,但在另一个基因中却可以作为外显子。
您的答案:
什么是
?
什么是亚克隆(subcloning)?
基因克隆:
一定程度上等同于基因的分离,即从复杂的生物体基因组中,经过酶切,消化等步骤,分离带有目的基因的
片段。
基因亚克隆:
初步克隆中的外源片段往往较长,含有许多目的基因片段以外的
片段,在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行,因此必须将目的基因所对应的一小段
假如从一个原核生物中
某基因(1-2kb),请谈谈它的基本步骤?
①对原核生物染色体
进行不完全酶切,纯化所得到的
片断,并与载体连接,转化大肠杆菌;
②得到转化子后,根据目标基因两侧的已知序列设计探针,杂交,筛选转化子;
③所得到的转化子中含有目标基因,进一步作亚克隆,一步步地向目标基因逼近,最后可得到目标基因
什么叫基因工程(Gene
Engineering),试从理论和技术两个方面谈谈
Engineering
诞生的基础?
基因工程(Gene
)又称基因操作(Gene
Manipulation)、重组
基因工程是以分子遗传学理论为基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因(DNA
分子),按预先设计的蓝图,在体外构建杂种
分子,然后导入活细胞,以改变生物原先的遗传特性,获得新品种,生产新产品,或是研究基因的结构和功能。
思考题问题:
简述基因操作、基因重组和基因工程的关系。
为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物?
简述基因的结构组成对基因操作的影响。
第二章
Restriction
and
modification
限制和修饰。
宿主特异性地降解外源遗传物质(DNA)的现象称为限制。
外源遗传物质通过甲基化等作用避免宿主的限制作用称为修饰。
Matched
ends
匹配末端。
识别位点为回文对称结构的序列,经限制酶切割后,产生的相同的,互补的末端称为匹配粘端,亦即粘性末端(cohesive
end)。
Blunt
平末端。
在回文对称轴上同时切割
的两条链,产生的没有碱基突出的末端称为平末端。
Isoschizomer
同裂酶。
识别相同序列的限制酶称同裂酶,但它们的切割位点可能不同。
Isocaudiners
同尾酶。
来源不同、识别序列不同,但产生相同粘性末端的酶。
Site
preferences
位点偏爱。
某些限制酶对同一介质中的不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象称为位点偏爱。
Star
activity
星星活性。
在极端非标准条件下,限制酶能切割与识别序列相似的序列,这个改变的特殊性称星星活性。
Nicking
enzyme
切口酶。
有些限制酶只
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- 基因工程 试题