蛇床子素对肿瘤细胞AGS中糖基转移酶β3GnT2及其相关基因表达的影响Word文档下载推荐.docx
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关键词:
蛇床子素;
β3Gn-T2;
AGS
作者:
沈立军
指导老师:
吴士良
StudyontheeffectofOstholetotheβ3Gn-T2anditsrelatedgenesinTumorCellLinesAGS
Abstract:
Objectives:
GastriccancerisoneofcommonmalignanttumorsinChina,theincidenceinourcountryranksfirstinalltumorOstholecankilltumorcells.β1,3-N-acetylglucosaminyltransferase8isanewmemberofglycosyltransferaseswegainedbyelectriccloning.Weconsidereditbelongstobeta-3glycosyltransferasefamily.ThisresearchisfocusontherelationbetweenOstholeandβ3Gn-T2.
Methods:
Tostudythevariationofβ3Gn-T2anditsrelatedgenesexpressioninAGScelllinesafterOstholeaddedtotheculturemedium.
UseRT-PCRtodetectthemRNAexpressionofGnT2inAGScellline
Results:
AfterOstholeaddedtotheculturemedium,themRNAexpressionsofGnT2,inAGScelllinedecreased,butatthehighdrugconcentration,thecelllineAGSβ3GnT2in48hhavemoreexpressionthanin24h
Conclusion:
(1)ThisstudyshowedthattheexpressionofGnT2aredifferentinthecelllineafterOstholeaddedtotheculturemedium.ThisresultsuggestedthattheeffectofOstholemaybechangethesugarchainsofglycoproteinincellsurface.
(2)tumorcellsmayhavesomeresistancetowardsOsthole
KeyWords Osthole;
β3GnT2;
AGS
Writtenby:
LijunShen
Supervisedby:
ShiliangWu
目录
1前言…………………………………………………………………1
2蛇床子素对肿瘤细胞中β3Gn-T2及其相关基因mRNA表达的影响……………………………………6
2.1实验方法…………………………………………………………6
2.2实验结果…………………………………………………………9
3讨论…………………………………………………………………11
4缩略词表……………………………………………………………13
5致谢…………………………………………………………………15
前言
蛇床子系伞形科蛇床子属植物蛇床的果实,有温肾、壮阳、燥湿、祛风、杀虫之功效,具扶正祛邪双重益处。
蛇床子素(osthole,OST,欧芹酚甲醚),别名为喔斯脑,系从蛇床子中提取的一种香豆素类化合物,其化学名为72甲氧基28异戊烯基香豆素[1]。
是最先从伞形科植物中提取分离出的天然香豆素类化合物,伞形科植物蛇床的干燥成熟果实蛇床子(Fructuscnidii)中含量较高,故而得名。
现代药理实验研究表明,蛇床子素具有抗骨质疏松症、抗高血压、抗心律失常、抗衰老、抗肿瘤、抗凝血、抗菌、杀虫、抗炎镇痛等功效.[2]
经过实验研究,我们发现蛇床子(cnidiummon2nieril.Cuss)提取液有较强的抑瘤作用。
目前已知蛇床子中有8种单体:
棕榈酸(palmiticacid)、蛇床子素(osthole)、β2谷甾醇(β2sitosterol)、佛手柑内酯(bergapten)、异虎耳草素(isopimpinellin)、花椒毒酚(xanthotoxol)、欧芹属素乙(imperatorin)和花椒毒素(xanthotoxin),其中蛇床子素收得率最高。
蛇床子素为香豆素类化合物,无色柱状结晶,蛇床子中含量0.8%,分子式C15H16O3。
已知蛇床子素具有较强的抑制表皮藓菌的活性,并有一定的抗诱变作用,所以我们进一步对单体蛇床子素进行了抗肿瘤作用的研究。
蛇床子素是蛇床子中含量较高的香豆素成分,日本学者Fijioka等[3]体外实验研究表明,蛇床子素对胃腺癌细胞MK21,人宫颈癌传代细胞Hela和B16F10细胞有明显的抑制活性,其ED50分别为8217,5310,6113μg·
mL-1。
周俊等[4]研究了蛇床子素对肺腺癌和肺鳞癌的体内抑制活性,并与水提液进行了抑癌活性比较。
结果表明蛇床子素剂量为115μg·
(g·
d)-1对肺腺癌的抑制率为5010%,对肺鳞癌的抑制率为6915%,肺癌标志物DR270也有明显降低,与对照组比(P<
0101)。
而蛇床子生药水提液对肺腺癌0111mg·
bw·
d)-1组为4410%,0121mg·
g·
d)-1组为5210%;
对肺鳞癌0111mg·
d)-1组为6713%,0121mg·
d)-1组为8416%,该研究根据蛇床子素含量进行了剂量折算,蛇床子素与水提液2个剂量组之间存在可比性。
粗制剂的活性好于蛇床子素,说明蛇床子素是蛇床子中主要抑癌活性成分,但还存在其他抑癌活性成分。
所以本课题采取蛇床子素作为研究对象
自然界中大多数蛋白质是以糖蛋白的形式存在的,其功能涉及细胞识别、信息传递、激素调节、受精、发育、分化、神经系统和免疫系统恒定维持等方面[5]。
糖基转移酶是广泛存在的一大类酶,它们决定了糖苷键的形成。
自然界中所有寡糖、多糖和各种复合类(糖蛋白、糖脂等)中的糖部分。
以及各类糖苷的生物合成均离不开糖基转移酶。
糖基转移酶(Glycosyltransferase,GT)是一个庞大的酶家族,参与低聚糖和多糖的生物合成。
它们将糖残基从活化的供体(通常是核苷酸糖)转移至受体,这些受体可能是脂类、蛋白或合成中的低聚糖[6]。
已知糖基化异常与肿瘤密切相关,因此蛇床子素抗癌对糖基化是否有影响是令人深感兴趣的课题。
本课题初步研究了蛇床子素处理后的胃癌细胞株AGS中β3GnT2的表达差异。
对其细胞学表型功能进行初步探讨研究.
蛇床子素对肿瘤细胞中β3Gn-T2及其相关基因mRNA表达的影响
蛇床子素(osthole或osthol)又名甲氧基欧芹酚或欧芹酚甲醚,其化学名称为7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素,是从伞形科植物中提取分离的纯天然香豆素类化合物。
研究表明蛇床子素具有抗肿瘤、抗骨质疏松、抗肝炎、抗变态反应、抑制血小板聚集,以及抗病毒、抗诱变等多种药理活性。
我们对其体外抗肿瘤活性进行了研究
材料与方法
一、材料
(一)主要试剂
(1)、小牛血清购自上海华美生物公司
(2)、胎牛血清购自Gibco-BRL公司
(3)、IMDM完全培养基:
每升IMDM基础培养基(Gibco,美国)中,添加小牛血清100ml、L-谷氨酰胺0.15g、NaHCO32.0g、葡萄糖3.6g、HEPES(Amresco,进口分装)4.7g;
(4)、DEPC购自上海华舜生物工程公司
(5)、Oligo(dT)、Trizol、RNaseInhibitor、SuoercriptIIRNaseHReversetranscriptase、TaqDNA酶、dNTPMIX(10mmol/L)、10×
PCRbuffer、MgCl2(25mmol/L)购自Promega公司;
(6)、琼脂糖、MixDNAmarker购自Fermentas公司;
(7)、TRIzol购自Invitrogen公司。
(8)蛇床子素(粉剂,杭州绿天公司,纯度95%以上)用DMSO溶解成20mg/ml,置于-20℃冷冻储存。
(9)其余试剂均为国产分析纯
设计引物采用Genetyx软件,并经GenBankBlast进行同源检索后合成。
引物由Invitrogen公司合成。
β−actin引物为:
F:
5'
−CTCGTGCTACTCTCTCTTTC−3’,
R:
−CATGTCTCGATCCCACTTAAC−3’,预期扩增产物长度为211bp;
β3GnT2的引物为:
5’-CCAGAAGGCAAGCAAT-3’
5’-TCCCGATGAGGTCCAG-3'
,预期扩增产物长度385bp
(三)主要仪器设备
(1)、S2-160A分析天平(日本)
(2)、65-1AC电子pH计(上海雷磁仪器厂)
(3)、CO2培养箱(HeraesusBB5060)
(4)、XSZ-D2倒置生物显微镜(重庆光学仪器厂)
(5)、台式高速冷冻离心机(西德Eppendorf产品)
(6)、紫外透视分析仪Bio-CAPTversion99(VLIBERLOURMAT)
(7)、RT-PCR扩增仪GeneAmpSystem9600(PerkinELMER公司)
(8)、752紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)
(9)、电泳仪Mini-Protean3(Bio-Rad公司)
(10)、18108石英管加热式自动双重纯水蒸馏器(上海玻璃仪器一厂)
(11)、BI-1加热磁力搅拌器(上海斯奇分析仪器有限公司)
二细胞培养
人类胃癌细胞株AGS由本实验室保存,在含有10%小牛血清
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- 关 键 词:
- 蛇床子 肿瘤 细胞 AGS 糖基转移酶 GnT2 及其 相关 基因 表达 影响
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