龙头鱼中内源性甲醛产生的生物化学机理研究修Word格式.docx

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龙头鱼中内源性甲醛产生的生物化学机理的研究:

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鱼

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上海海洋大学硕士学位论文

龙头鱼中内源性甲醛产生的生物化学机理的研究

摘要

甲醛,是一种原生质毒,对人体健康有极大的危害。

天然

是生物体新陈代谢过程中的一种中间产物,但是含量极低。

作为有毒化学物质,

我国食品相关法律禁止将添加到食品中。

国内外大量研究证明许多水产品中

存在内源性,而我国关于水产品中内源性的研究还处于起步阶段,有关其

产生机理论述更是鲜有报道,因此,我国目前的水产品中含量标准的制定在

科学性和实用性方面都存在较大问题,甚至对有关行业的健康发展产生了负面影

响。

同时鉴于目前市场上依然存在人为添加的现象,如何分辨水产品中的

是人为添加的还是自身产生的,也是摆在质监部门面前的一道亟待解决的难题。

本论文的研究目的就是探索内源性产生的机理、影响因素等,以期为水

产品中限量标准的制定和完善提供科学依据。

在确定龙头鱼能够产生内源性

的基础上,本论文进行了一系列实验,得到以下结果:

..℃贮藏过程中龙头鱼样品中和二甲胺,不断增

加,证明龙头鱼中内源性的存在;

相对于龙头鱼的幽门盲囊、肝脏以及肌肉

本身,肾脏更能促进内源性的产生,说明肾脏中的促进和产生的活

性成分要高于其他内脏,因此可以选用肾脏作为提取的基质能更容易获得理想的

活性成分:

.从龙头鱼肾脏中获得的提取物能够分解体外模拟反应体系中的氧化三甲胺

..生成和,且在不同条件下生成的和

为等物质的量,为辨别市场上水产品中的是人为添加还是自身产生提供

了理论依据;

.龙头鱼肾脏提取物在反应过程中呈现酶的特性,在不同和温度作用下

具有钟形曲线,在蛋白质变性剂作用下失去催化活性;

其最适反应条件是,

温度为℃;

证明龙头鱼肾脏提取物中的活性物质是一种蛋白质酶或者酶系;

龙

头鱼肌肉浸出液在肾脏提取物作用下和含量均出现增长,证明龙头鱼

肌肉中的成分能够在龙头鱼自身酶的作用下产生内源性;

.通过实验发现对龙头鱼肾脏提取物中的存在抑制作用,

提示提取物中的是一种或者一类以金属离子为激活剂的酶,这种金属

离子是;

不同浓度的对体系中的和含量影响极大,直至体系中

的底物接近完全分解;

而、等二价金属阳离子对体系中和反应体系的作用效

含量无影响;

还原剂抗坏血酸对含有.

果与基本一致,提示我们是而不是还原剂本身对和含量有影响;

.探索性地测定多种包括含有内源性的水产品样品以及不含有内源性

的水产品样品中的总铁含量,发现含有内源性的样品中的总铁含量明显要高

于不含有内源性的样品,排除不含有的淡水水产品样品,种海水水

产品样品中总铁含量与内源性含量之间存在显著的正相关,进一步提示了

在内源性产生之间的密切关系。

本论文初步探讨了龙头鱼中内源性产生的生物化学机理和影响因素,为

今后水产品中内源性产生机理的进一步研究以及其甲醛限量标准的科学制定

奠定了基础。

关键词:

内源性甲醛,二甲胺,龙头鱼,氧化三甲胺酶,机理

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目录

弓言.

.水产品中的甲醛?

。

的物理化学性质?

的毒理学性质?

..水产品中的来源

在水产品中的存在方式及测定方法。

.龙头鱼及龙头鱼内源性研究状况?

..龙头鱼简介。

..龙头鱼中内源性的研究状况..

.氧化三甲胺酶?

..水产品中的?

...

在海洋生物中分布...海洋生物中的生理作用

..与代谢相关的酶

..内源性氧化三甲胺脱甲基作用?

活性测定方法?

的纯化?

的鉴定

.本论文的研究目的和意义第一章龙头鱼样品在贮藏过程中含量的变化?

小?

.材料与方法

..仪器与设备

..材料与试剂

..方法...

标准储备溶液的标定?

...标准曲线的绘制

...龙头鱼肌肉样品的制备

...龙头鱼肌肉中的测定

...数据处理?

.结果与讨论..

..龙头鱼样品在贮藏过程中和含量的变化?

.小结

第二章龙头鱼肾脏提取物对氧化三甲胺反应体系的作用.材料与方法

..仪器与设备?

..材料与试剂?

.上海海洋大学硕士学位论文

..方法...提取缓冲液的配制?

..底物缓冲液的配制...龙头鱼肾脏提取物的制备

...龙头鱼肌肉提取液的制备

反应体系.

...反应体系中和的测定

...肌肉提取液与肾脏提取物的反应...肌肉提取液中和的测定?

对肾脏提取物灭活作用●

...响应面设计和数据处理.

.结果与讨论.

..单因素实验以及反应体系中与的含量关系.

..提取物最适条件的确定..响应模型的分析与验证?

..最适条件下肾脏提取物对肌肉浸出液的作用?

..对龙头鱼肾脏提取物的灭活作用。

第三章亚铁离子等对肾脏提取物活性的影响

.材料与方法?

..仪器与设备.

..方法?

...样品的湿法消化..

.工作参数以及铁标准曲线...样品水分的测定。

.缓冲体系.

.缓冲体系中和的测定?

.结果与讨论“

对反应体系的作用以及金属离子辅因子的确定

和抗坏血酸对反应体系的作用?

..水产品中总铁含量与含量的相关性.

.小结?

结沧.

参考文献?

致谢?

Ⅱ上海海洋大学硕士学位论文

引

言

.水产品中的甲醛

水产品一直深受广大消费者喜爱,随着市场经济的迅速发展,人们生活水平

的提高以及保健意识的增强,水产品的需求越来越大,要求也越来越高。

但是近

年来,一些不法经营者为了保持水产品的新鲜外观,延长保存期,增加重量,不

顾人民群众的身体健康,用甲醛浸泡处理水产品,造成了水产品不同程度

的污染,极大地损害了消费者的利益,严重威胁着广大人民群众的身体健康。

但是大量研究和检测结果表明许多水产品中还存在内源性,如鳕形目的多种鳕

鱼、鱿鱼以及狗母鱼科的龙头鱼等等。

本论文对以龙头鱼为代表的一些水产品中

内源性产生的机理,包括生物化学本质,影响因素等进行了初步的探索。

的物理化学性质

天然是生物细胞在丝氨酸,甘氨酸,甲硫氨酸以及胆碱代谢的中间产物【】。

本身是一种无色的刺激性气体,其水溶液体积比%或者质量比%称

为福尔马林,医学上用作防腐剂和消毒剂。

的物理化学性质如表.所示:

表..的物理化学性质【】

英文名称

化学式

结构简式

分子量./

外观无色气体

℃

自燃点

%

爆炸极限

溶解性易溶于水

沸点.℃纯溶液,℃%溶液

熔点.℃纯溶液,℃%上海海洋大学硕士学位论文

的毒理学性质

具有原生质毒性,按其毒性分级,属于中等毒性物质,在我国有毒化

学品优先控制名单上高居第二位【。

对人体的急性毒性主要表现在对上呼吸道,眼睛和皮肤的刺激作用。

因为

的水溶性极高,在没有到达肺部以前已基本被上呼吸道粘膜吸收,所以吸入性

能够引起上呼吸道,主要包括鼻腔,咽,气管和支气管的损伤;

眼部暴露于

的主要表现是灼热感和流泪;

而皮肤直接接触可以引起过敏性皮炎、色斑,

甚至坏死。

的慢性毒性涉及对免疫、神经系统的影响,遗传生殖毒性和致癌作用也有

相关文献报道。

淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞等可介导生物体内的体液和细胞

免疫反应,等人【】将雌性/大鼠暴露于,,和

浓度下周发现,暴露于下的大鼠体内的巨噬细胞和嗜酸粒细胞比

大鼠要明显增多,但是白细胞介素却显著减低;

在体外试验中,暴

露下脾脏培养液上清液中脂多糖刺激产生的丫干扰素明显下降,而卵清蛋白刺激

暴露水平的大鼠中发现抗卵

下生成的单核细胞诱导蛋白.显著增加。

清蛋白和两种抗体明显下降,而数量没有发现变化。

对神经

系统有明显的作用。

将麻醉的大鼠置于的下暴露.其鼻腭神经对戊

醇刺激的反应明显降低,用刺激大鼠鼻粘膜处的三叉神经末梢。

可抑制受试

大鼠的呼吸率。

抑制作用与浓度成正比,这在动物自我保护上有积极意义。

但随.浓度的增加易使受刺激神经产生耐受性。

三叉神经在的作用

天后,可产生持续周的耐现象,而在低于此浓度的作用下则无这种耐受

性。

研究表明在哺乳动物细胞的体外试验中能表现出遗传毒性【。

可以导

致动物细胞不同水平上的损伤,如染色体畸变,碱基突变等等,其导致

损伤的机理是由于羰基亲电性和较小的空间位阻作用,并可以诱发自由基效应,

因而可以攻击核酸和蛋白质等生物大分子而引起一系列反应。

王丽等人【】从

水平证实了低浓度可以诱导细胞断裂,高浓度则可以诱发

交联。

生殖毒性的研究主要集中在试验动物上,易建华等人【】通过人工注射方

式对小鼠进行暴露,发现高剂量组的小鼠精子数量显著降低,精子活力与畸

形率与剂量的关系存在统计学意义。

能够引起试验动物发生癌变,有人怀疑白

血病与有关,北京儿童医院血液病研究中心发现,在我国一些大气污染严重

的城市,大约有%的白血病患儿家中短期内装修过房屋;

哈尔滨市第一医院血

液病研究所也发现多名白血病患儿中,.%的家庭在发病前半年内进行过

装修【。

但是对人类的致癌作用还没有确切证据。

马敬军等人【】认为水产品中的的可能来源主要有以下个方面:

作为养殖场和一些加工场所设施、工具等消毒作用使用的:

以为原料生产的塑料制品在接触食品或水产品而发生的游离的迁

移;

水产品养殖过程中,作为杀虫渔药使用而造成在鱼体内的残留;

为了较长时间保持水产品新鲜外观,延长货架期,增加水产品的持水量而

人为地向水产