理科选修三动物细胞培养和核移植技术公开课PPT文件格式下载.ppt
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细胞增殖细胞增殖定义:
定义:
人们通常将人们通常将动物组织动物组织消化后消化后的的初次培养初次培养称为原代称为原代培养。
培养。
胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理取出组织取出组织胚胎或幼龄动物器官组织胚胎或幼龄动物器官组织剪碎剪碎单个细胞单个细胞细胞悬液细胞悬液转入培养瓶内培养转入培养瓶内培养(贴壁生长贴壁生长长成单层细胞。
长成单层细胞。
有有接触抑制接触抑制现象)现象)。
原代培养原代培养33、过程、过程原代培养原代培养增殖能力强,分裂旺盛,分化增殖能力强,分裂旺盛,分化程度低,容易培养程度低,容易培养去掉组织间去掉组织间蛋白蛋白加加培养液培养液强调一:
细胞贴壁过程强调一:
细胞贴壁过程细胞贴壁:
细胞贴壁:
在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。
附在瓶壁上,称为细胞贴壁。
培养瓶或培养皿壁要求:
表面光滑、无毒、易于表面光滑、无毒、易于帖附。
帖附。
当贴壁细胞分裂生当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细殖,这种现象称为细胞的胞的接触抑制。
接触抑制。
强调二:
接触抑制强调二:
接触抑制细胞的接触抑制细胞的接触抑制定义:
当原代培养的细胞处于当原代培养的细胞处于接触抑制后接触抑制后,用用胰蛋白酶胰蛋白酶处理处理,使细胞从瓶壁上使细胞从瓶壁上脱离脱离下下来来,然后加入新的培养液然后加入新的培养液,将将细胞分离稀释细胞分离稀释,并并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这这个过程称个过程称传代培养传代培养.(分瓶培养的过程分瓶培养的过程)传代培养传代培养遗传物质未遗传物质未改变改变原代细胞原代细胞4050代细胞代细胞(细胞株细胞株)遗传物质己遗传物质己改变改变无限传代(无限传代(细胞系细胞系)分瓶分瓶传代培养传代培养胰蛋白酶胰蛋白酶原代培养原代培养接触抑制接触抑制传代培养传代培养细胞株细胞株:
传代细胞一般能传到:
传代细胞一般能传到40-5040-50代,代,遗遗传物质一般不会发生改变传物质一般不会发生改变,叫细胞株。
,叫细胞株。
强调:
细胞株、细胞强调:
细胞株、细胞系系(了解即可,老课本体系了解即可,老课本体系)细胞系细胞系:
传代:
传代5050代以后代以后又出现细胞生长停又出现细胞生长停滞状态,滞状态,部分细胞部分细胞遗传物质发生了改变,遗传物质发生了改变,能连续传代,获得不死性,叫细胞系。
能连续传代,获得不死性,叫细胞系。
细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别:
细胞系的遗传物细胞系的遗传物质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,容易传代培养。
制,容易传代培养。
l接触抑制接触抑制总结:
动物细胞培总结:
动物细胞培养过程养过程动物胚胎或幼龄动物的动物胚胎或幼龄动物的组织、器官组织、器官配置细胞悬液配置细胞悬液剪碎用胰蛋白酶处理剪碎用胰蛋白酶处理1010代细胞代细胞转入培养瓶转入培养瓶40-5040-50代细胞代细胞传传代代培培养养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加加培养液稀释培养液稀释传代传代1010代以内,代以内,遗传物质不改变,遗传物质不改变,保持保持正常正常二倍体核型二倍体核型。
传代传代10-5010-50代左右,增长缓慢以代左右,增长缓慢以至于完全停止,至于完全停止,部分细胞核型可部分细胞核型可能发生变化能发生变化(遗传物质可能改变(遗传物质可能改变)为什么用胰蛋白酶处理?
为什么用胰蛋白酶处理?
分瓶分瓶传代培养传代培养原代培养特点:
原代培养特点:
细胞贴壁、细胞贴壁、接触抑制接触抑制继续传代培养少部分细胞继续传代培养少部分细胞获得不获得不死性死性,细胞突变细胞突变,遗传物质已经遗传物质已经改变改变,等同于癌细胞等同于癌细胞。
细细胞胞株株:
一一般般说说遗遗传传物物质质未未改改变变细细胞胞系系:
遗遗传传物物质质已已改改变变原原代代培培养养多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中据此思考:
据此思考:
1.内环境稳态包括呢些方面?
内环境稳态包括呢些方面?
适宜的温度、适宜的温度、pH值、渗透压、营养、氧气。
值、渗透压、营养、氧气。
2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件?
体外培养的细胞需要什么样的环境条件?
无菌、无毒的环境。
3.体外培养细胞时需要提供哪些物质?
如体外培养细胞时需要提供哪些物质?
如何才能保证类似于内环境的营养环境?
培何才能保证类似于内环境的营养环境?
培养基应是液态还是固态?
养基应是液态还是固态?
充足的营养、适宜的温度、充足的营养、适宜的温度、pH和气体和气体环境。
加入动物血清。
培养基应是液态。
环境。
思考:
动物血清的作用?
主要是:
提供有利于细胞生长增殖所需的主要是:
提供有利于细胞生长增殖所需的激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏的营养物质等。
的营养物质等。
保证细胞顺利的保证细胞顺利的生长增殖生长增殖44、动物细胞培养条件、动物细胞培养条件能否用胃蛋白酶代能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶?
替胰蛋白酶?
l无菌、无毒的环境无菌、无毒的环境(添加一定量的抗生素,定期更换培养液)(添加一定量的抗生素,定期更换培养液)l营养营养(葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等(葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等)l温度和温度和PHPH温度温度36.5+0.5度,pH7.27.4l气体环境气体环境OO22和和COCO22(95%95%空气和空气和5%5%COCO22)离体培养的细胞对微生物和离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力。
有毒物质没有防御能力。
保证细胞顺利的保证细胞顺利的生长增殖生长增殖动物细胞培养液的主要成分:
动物细胞培养液的主要成分:
葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和、氨基酸、无机盐、维生素和动物动物血清血清等。
等。
动物培养基特有的特点是:
(11)液体培养基)液体培养基(22)含有动物血清)含有动物血清动物体细胞大都生活动物体细胞大都生活在在液体液体的环境的环境植物组织培养呢?
植物组织培养呢?
无机盐、蔗糖无机盐、蔗糖、维生素、生长、维生素、生长调节物质、植物激素调节物质、植物激素成分比较:
成分比较:
5.5.动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用:
1.1.蛋白质生物制品的生产蛋白质生物制品的生产如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.2.应用于基因工程应用于基因工程主要用于作为受体细胞主要用于作为受体细胞3.3.检测有毒物质,判断某种物质的毒性检测有毒物质,判断某种物质的毒性4.4.细胞的生理、药理、病理研究细胞的生理、药理、病理研究如用于筛选抗癌药物如用于筛选抗癌药物11、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是-()AA细胞系细胞系BB细胞株细胞株CC原代细胞原代细胞DD传代细胞传代细胞22、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是-()A.A.动物细胞融合动物细胞融合B.B.单克隆抗体单克隆抗体C.C.胚胎移植胚胎移植D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD课堂反馈练习课堂反馈练习33、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织,其主要原因是出生不久的幼龄动物的器官或组织,其主要原因是这样的组织细胞这样的组织细胞()A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异BB具有更强的全能性具有更强的全能性C.C.取材十分方便取材十分方便DD分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D4、下列属于动物细胞工程中的工具是(、下列属于动物细胞工程中的工具是()A限制性内切酶限制性内切酶BDNA连接酶连接酶C胰蛋白酶胰蛋白酶D果胶酶果胶酶C99、下、下图是是动物物细胞培养的基本胞培养的基本过程示意程示意图。
请据此据此图回答回答
(1)
(1)容器容器AA中放置的是中放置的是动物器官或物器官或组织。
它一般取。
它一般取自自_。
(2)
(2)容器容器AA中的中的动物器官或物器官或组织首先要首先要进行的行的处理理是是_,然后用,然后用酶酶处理,理,这是是为了了使使细胞分散开来。
胞分散开来。
这样做的目的是做的目的是_._.(3)(3)培养首先在培养首先在BB瓶中瓶中进行。
瓶中的培养基成分有行。
瓶中的培养基成分有__等。
在此瓶中培等。
在此瓶中培养一段养一段时间后,有后,有许多多细胞衰老死亡,到胞衰老死亡,到这时的的培养称培养称为_._.(4)(4)为了把了把BB瓶中的瓶中的细胞分装到胞分装到CC瓶中,用瓶中,用_处理,然后配置成理,然后配置成_,再分装。
,再分装。
(5)(5)在在CC瓶中正常培养了一段瓶中正常培养了一段时间后,后,发现细胞全胞全部死亡。
原因是部死亡。
原因是_。
幼龄动物的器官或组织、动物胚胎幼龄动物的器官或组织、动物胚胎用剪刀剪碎用剪刀剪碎胰蛋白胰蛋白使每个细胞能与培养液接触使每个细胞能与培养液接触,便于获取营养和排出代谢废物,便于获取营养和排出代谢废物葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶细胞悬浮液细胞悬浮液细胞没有发生癌变细胞没有发生癌变细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体或组织植物体或组织培养结果培养结果获得细胞获得细胞或细胞分泌蛋白或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较细胞分化程度细胞分化程度,恢复全能性恢复全能性。
核移植核移植(难度高)(难度高)三、动物体细胞核移植技术三、动物体细胞核移植技术胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植体细胞核移植细胞分化程度细胞分化程度,恢复全能性恢复全能性。
用核移植的方法得到的动物称为用核移植的方法得到的动物称为克隆动物克隆动物1.1.概念:
概念:
将动物的一个细胞的细胞核,移入一个将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的已经去掉细胞核的卵母细胞卵母细胞中,使其重组并中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育成动物个体。
育成动物个体。
低低容易容易高高困难困难卵母细胞卵母细胞黑面母绵羊黑面母绵羊白面母绵羊白面母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎CC母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠融合后的融合后的卵母细胞卵母细胞2.2.体细胞核移植过程体细胞核移植过程取供体细胞取供体细胞传代培养传代培养1010代代以内的细胞以内的细胞.为什么?
为什么?
用的是去用的是去核的减数核的减数第二次分第二次分裂中期细裂中期细胞(胞(M中中期期)为什)为什么?
么?
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