DNA粗提取与鉴定实验优质PPT.ppt
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充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离的目的。
NaCl盐浓度盐浓度(22)能水解蛋白质,但对能水解蛋白质,但对DNADNA没有影响。
大多数蛋没有影响。
大多数蛋白质不能忍受白质不能忍受的高温,而的高温,而DNADNA在在以上以上才会变性。
洗涤剂能瓦解才会变性。
洗涤剂能瓦解,但对,但对DNADNA没有影响。
没有影响。
(33)DNA)DNA不溶于不溶于,但是细胞中的某些蛋白质则溶于,但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。
此溶液。
酒精酒精蛋白酶蛋白酶608080细胞膜细胞膜44.DNADNA的鉴定的鉴定在在的条件下,的条件下,DNADNA遇二苯胺会染成遇二苯胺会染成。
注。
注意二苯胺试剂要意二苯胺试剂要。
沸水浴沸水浴蓝色蓝色现配现用现配现用通常选用通常选用2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液溶解细胞中的溶液溶解细胞中的_,此时杂质易,此时杂质易沉淀;
在沉淀;
在0.14mol/LNaCl0.14mol/LNaCl溶液中溶液中DNADNA溶解度溶解度_,可使,可使_。
DNADNA最小最小DNADNA析出析出11.利用利用DNADNA的溶解特性粗提取的溶解特性粗提取DNADNADNADNA与蛋白与蛋白质在不同在不同浓度的度的NaClNaCl溶液中溶解度不同。
溶液中溶解度不同。
溶解特性溶解特性质量量浓度度为22mol/Lmol/LNaClNaCl溶液溶液质量量浓度度为0.14mol/L0.14mol/LNaClNaCl溶液溶液DNADNA在在NaClNaCl溶液中,溶液中,质量量浓度度为0.14mol/L0.14mol/L时溶解溶解度最小度最小溶解溶解析出析出蛋白蛋白质NaClNaCl的的质量量浓度从度从22mol/Lmol/L降低降低过程中,溶解程中,溶解度逐度逐渐增大增大部分部分发生生盐析析溶解溶解考点一考点一DNADNA提取与鉴定原理提取与鉴定原理DNADNA不溶于酒精溶液,但是不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白胞中的某些蛋白质则溶于酒精。
利溶于酒精。
利用用这一原理,可将一原理,可将DNADNA与蛋白与蛋白质进一步分离。
一步分离。
NaClNaCl溶液溶液酒精酒精(体体积分数分数为95%95%的冷酒精的冷酒精)DNADNA不溶不溶蛋白蛋白质NaClNaCl溶液溶液质量量浓度从度从2mol/L2mol/L逐逐渐稀稀释的的过程中溶解度逐程中溶解度逐渐增大增大某些蛋白某些蛋白质可溶可溶思考:
为思考:
为提取到提取到DNADNA,曾先后使用不同,曾先后使用不同浓度的度的NaClNaCl溶液,溶液,则在在质量量浓度度为2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液及溶液及0.14mol/LNaCl0.14mol/LNaCl溶液中溶液中应取取滤液,液,还是是滤得的固体物?
得的固体物?
在质量浓度为在质量浓度为2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液中溶液中DNADNA呈溶解状态,应取滤呈溶解状态,应取滤液,在质量浓度为液,在质量浓度为0.14mol/LNaCl0.14mol/LNaCl溶液中溶液中DNADNA溶解度极低,溶解度极低,易析出,应取固体物。
易析出,应取固体物。
2.2.利用利用DNADNA对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取DNA(DNA(见下表见下表)DNADNA蛋白蛋白质蛋白蛋白酶酶没影响没影响水解水解高温高温8080以上才会以上才会变性性60608080会会变性性洗洗涤剂没影响没影响瓦解瓦解细胞膜胞膜特别提醒特别提醒
(1)
(1)甲基绿可将甲基绿可将DNADNA染成绿色,且不需水浴加热。
二苯胺鉴定染成绿色,且不需水浴加热。
二苯胺鉴定DNADNA属于颜色反应,需要水浴加热属于颜色反应,需要水浴加热5min5min,可使,可使DNADNA呈蓝色。
呈蓝色。
(2)
(2)二苯胺试剂要现配现用,否则二苯胺会变成浅蓝色,影响二苯胺试剂要现配现用,否则二苯胺会变成浅蓝色,影响鉴定效果。
鉴定效果。
归纳归纳DNADNA的粗提取原理及目的归纳的粗提取原理及目的归纳基本原理基本原理方法方法目的目的DNADNA在不同浓度的在不同浓度的NaClNaCl溶液中的溶解溶液中的溶解度不同,在质量浓度不同,在质量浓度为度为0.14mol/L0.14mol/L的的NaClNaCl溶液中的溶解溶液中的溶解度最低度最低溶于溶于NaClNaCl溶溶液中并稀释液中并稀释NaClNaCl溶液质量浓度为溶液质量浓度为22mol/Lmol/L时,时,DNADNA溶解,而部分蛋溶解,而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀,通白质发生盐析而生成沉淀,通过过滤可除去部分蛋白质及不过过滤可除去部分蛋白质及不溶于溶于NaClNaCl溶液的杂质溶液的杂质当当NaClNaCl溶液稀释至质量浓度溶液稀释至质量浓度为为0.14mol/L0.14mol/L时,时,DNADNA析析出,过滤可除去溶于出,过滤可除去溶于NaClNaCl中的中的部分蛋白质和其他杂质部分蛋白质和其他杂质DNADNA不被蛋白酶所不被蛋白酶所水解水解加入嫩肉粉加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶,水解嫩肉粉中含木瓜蛋白酶,水解蛋白质蛋白质DNADNA不溶于酒精溶不溶于酒精溶液液加入冷却酒加入冷却酒精精(体积分体积分数为数为95%)95%)DNADNA析出,除去溶于酒精的蛋析出,除去溶于酒精的蛋白质白质1.1.蛋蛋白白酶酶能将蛋白能将蛋白质水解而使染色水解而使染色质中的中的DNADNA分离出来。
下列分离出来。
下列药品可达到上述同一目的的是品可达到上述同一目的的是()AA.蒸蒸馏水水BB.NaClNaCl溶液溶液CC.NaOHNaOH溶液溶液DD.盐酸酸2.(20132.(2013江苏江苏)某同学用洋葱进行某同学用洋葱进行DNADNA粗提取和鉴定实验,操作粗提取和鉴定实验,操作错误的是错误的是()()A.A.加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨B.B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNADNAC.C.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌D.D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热BBAA学以致用学以致用3.3.关于关于DNADNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是()()A.A.充分溶解充分溶解DNADNA的盐溶液是的盐溶液是0.14mol/L0.14mol/L的的NaClNaCl溶液溶液B.B.实验中提取较纯净的实验中提取较纯净的DNADNA利用了利用了DNADNA不溶于酒精的特点不溶于酒精的特点C.C.对最后提取出对最后提取出DNADNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热D.D.实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同4.4.下列关于下列关于DNADNA粗提取与鉴定的说法正确的是粗提取与鉴定的说法正确的是()()A.A.析出析出DNADNA时要缓慢地加蒸馏水,当析出黏稠物时即不再加水时要缓慢地加蒸馏水,当析出黏稠物时即不再加水B.B.在探究洗涤剂对植物细胞在探究洗涤剂对植物细胞DNADNA提取的影响实验中,自变量是洗提取的影响实验中,自变量是洗涤剂和食盐涤剂和食盐C.C.提取的提取的DNADNA溶解后加入二苯胺试剂即可染成蓝色溶解后加入二苯胺试剂即可染成蓝色D.D.将含有将含有DNADNA的滤液放在的滤液放在60607575的恒温水浴箱中保温后过滤,的恒温水浴箱中保温后过滤,能去除蛋白质杂质能去除蛋白质杂质AADD11.实验材料的选取实验材料的选取选选用用含量相含量相对较高的生物高的生物组织。
22.破碎细胞,获取含破碎细胞,获取含DNADNA的滤液的滤液
(1)
(1)动动物物细胞的破碎胞的破碎以以鸡血血为例例在在鸡血血细胞液中加入一定量的胞液中加入一定量的,同,同时用玻璃棒用玻璃棒搅拌,拌,过滤后收集后收集即可。
即可。
二、二、DNADNA粗提取实验流程粗提取实验流程DNADNA蒸馏水蒸馏水滤液滤液
(2)
(2)植物细胞的破碎植物细胞的破碎以洋葱为例以洋葱为例先将洋葱切碎,然后先将洋葱切碎,然后加入一定量加入一定量_;
进行充进行充分分和和_,过滤后收集研磨液。
过滤后收集研磨液。
搅拌搅拌研磨研磨洗涤剂和食盐洗涤剂和食盐思考:
思考:
用用猪的血液与猪的血液与鸡的血液提取的血液提取DNADNA哪个效果更好?
哪个效果更好?
用鸡的血液;
因为鸡血细胞核用鸡的血液;
因为鸡血细胞核DNADNA含量丰富,材料易得,而猪含量丰富,材料易得,而猪的红细胞无细胞核的红细胞无细胞核DNADNA含量少。
含量少。
11.为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?
为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?
蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂,再加上搅拌的机械作用,就加速入血细胞内,使血细胞胀裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂),从而释放出,从而释放出DNADNA。
22.加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?
加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?
洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNADNA的释放;
的释放;
食盐的主要成分是食盐的主要成分是NaClNaCl,有利于,有利于DNADNA的溶解。
的溶解。
33.在处理植物组织时需要进行研磨,其目的是什么?
在处理植物组织时需要进行研磨,其目的是什么?
如果研磨如果研磨不充分,会对实验结果产生什么影响?
不充分,会对实验结果产生什么影响?
破碎细胞壁,使破碎细胞壁,使DNADNA更多地溶解在更多地溶解在NaClNaCl溶液中溶液中,研磨不充分会使研磨不充分会使细胞核内的细胞核内的DNADNA释放不完全,提取的释放不完全,提取的DNADNA量少,影响实验结果,量少,影响实验结果,导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。
导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。
3.3.去除滤液中的杂质去除滤液中的杂质最初获得的最初获得的DNADNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质,需要进一步提滤液含有蛋白质、脂质等杂质,需要进一步提纯纯DNADNA。
具体做法如下:
。
方案一:
滤液方案一:
滤液NaCl(2mol/L)NaCl(2mol/L)过滤除去杂质过滤除去杂质加入蒸馏水加入蒸馏水使使NaClNaCl溶液浓度为溶液浓度为0.14mol/LDNA0.14mol/LDNA析出析出过滤得到过滤物过滤得到过滤物放到放到2mol/2mol/LNaClLNaCl溶液中溶解溶液中溶解DNADNANaClNaCl溶解液溶解液方案二:
滤液方案二:
滤液嫩肉粉嫩肉粉(木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶)静置静置101015min15min过过滤获得滤获得DNADNA滤液滤液方案三:
滤液方案三:
滤液6
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- DNA 提取 鉴定 实验