优质课DNA的粗提取与鉴定PPT课件下载推荐.ppt

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如如何何通通过过控控制制NaClNaCl溶溶液液的的浓浓度度使使DNADNA在在盐盐溶溶液液中中溶溶解解或或析析出？

出？

当氯化钠的物质的量浓度为2molL时，DNA的溶解度最大，浓度为014molL时，DNA的溶解度最低。

利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出DNADNA不溶于酒精溶液，不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。

但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。

将将DNADNA与蛋白质进一步分离。

与蛋白质进一步分离。

DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶蛋白酶水解蛋白质，水解蛋白质，对对DNADNA没有影响没有影响高高温温大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080而而DNADNA在在8080以上才会变性以上才会变性洗涤剂洗涤剂瓦解细胞膜，瓦解细胞膜，但对但对DNADNA没有影响没有影响试剂：

试剂：

（二）

（二）DNADNA的鉴定的鉴定条件：

条件：

二苯胺二苯胺沸水浴条件下，沸水浴条件下，DNADNA与与二苯胺反应呈现二苯胺反应呈现蓝色蓝色沸水浴沸水浴现象：

现象：

（一）

（一）实验材料的选取实验材料的选取

（二）

（二）破碎细胞，获取含破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液（三）（三）除去滤液中的杂质除去滤液中的杂质（纯化纯化）（四）（四）DNADNA的的析出与鉴定析出与鉴定二、实验设计二、实验设计

（一）实验材料的选取

（一）实验材料的选取从下列材料中选取从下列材料中选取2233种种原则：

原则：

菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；

鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；

在液体培养基中培养的大肠杆菌在液体培养基中培养的大肠杆菌在液体培养基中培养的大肠杆菌在液体培养基中培养的大肠杆菌凡是含有凡是含有凡是含有凡是含有DNADNADNADNA的生物材料都可以考虑的生物材料都可以考虑的生物材料都可以考虑的生物材料都可以考虑但是，选用但是，选用但是，选用但是，选用DNADNADNADNA含量相对较高的组织，成功的可能含量相对较高的组织，成功的可能含量相对较高的组织，成功的可能含量相对较高的组织，成功的可能性更大性更大性更大性更大材料：

新鲜的鸡血（注意要加入柠檬酸钠，防止血液凝固）材料：

新鲜的鸡血（注意要加入柠檬酸钠，防止血液凝固）思考题：

思考题：

能否选用牛、羊、猪红细胞血做实验材料？

为什么？

不能。

因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核动物细胞的破碎较易，以鸡血为例，在鸡血细胞动物细胞的破碎较易，以鸡血为例，在鸡血细胞动物细胞的破碎较易，以鸡血为例，在鸡血细胞动物细胞的破碎较易，以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水液中加入一定量的蒸馏水液中加入一定量的蒸馏水液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，同时用玻璃棒搅拌，同时用玻璃棒搅拌，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可过滤后收集滤液即可过滤后收集滤液即可过滤后收集滤液即可

（二）破碎细胞，获取含

（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液11、动物细胞、动物细胞答：

答：

蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液，水分蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液，水分蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液，水分蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌再加上搅拌再加上搅拌再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核细胞膜和核细胞膜和核细胞膜和核膜的破裂膜的破裂膜的破裂膜的破裂），从而释放出从而释放出从而释放出从而释放出DNADNADNADNA。

讨论：

为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？

22、植物细胞、植物细胞植植物物细细胞胞需需要要先先用用一一定定的的洗洗涤涤剂剂溶溶解细胞膜解细胞膜实实例例：

提提取取洋洋葱葱DNADNA时时，在在切切碎碎的的洋洋葱葱中中加加入入一一定定的的洗洗涤涤剂剂和和食食盐盐，进进行行充充分分的的搅搅拌拌和和研研磨磨，过过滤滤后收集研磨液后收集研磨液讨论：

加入洗涤剂和食讨论：

加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？

盐的作用分别是什么？

洗涤剂是一些离子去洗涤剂是一些离子去污剂，污剂，能溶解细胞膜，有能溶解细胞膜，有利于利于DNADNA的释放的释放；

食盐的食盐的主要成分是主要成分是NaClNaCl，有利于有利于DNADNA的溶解的溶解讨讨论论：

如如果果研研磨磨不不充充分分，会会对对实验结果产生怎样的影响？

实验结果产生怎样的影响？

研磨不充分会使细胞核内的研磨不充分会使细胞核内的研磨不充分会使细胞核内的研磨不充分会使细胞核内的DNADNADNADNA释放不完全，释放不完全，释放不完全，释放不完全，提取的提取的提取的提取的DNADNADNADNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝量变少，影响实验结果，导致看不到丝量变少，影响实验结果，导致看不到丝量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物状沉淀物状沉淀物状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等、用二苯胺鉴定不显示蓝色等、用二苯胺鉴定不显示蓝色等、用二苯胺鉴定不显示蓝色等思考：

加入蒸馏水的目的是什么？

加速了鸡血细胞的破裂加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂），从而释放出，从而释放出DNA思考题：

搅拌的目的（注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能过快过猛，防止打碎DNA）加速了鸡血细胞的破裂加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂），从而释放出，从而释放出DNA思考：

这个步骤过滤获得什么？

获得含核物质的滤液（获取含DNA的滤液）（注意：

此时释放出来的大量DNA和RNA往往与蛋白质结合在一起，应用34层纱布进行过滤，除去一些颗粒较大的杂质）思考：

滤液中可能含有哪些细胞成分？

思考：

可能含有核蛋白、多糖和可能含有核蛋白、多糖和可能含有核蛋白、多糖和可能含有核蛋白、多糖和RNARNARNARNA等杂质（等杂质（等杂质（等杂质（为了纯化提取的为了纯化提取的为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNA需要需要需要需要将滤液作进一步处理将滤液作进一步处理将滤液作进一步处理将滤液作进一步处理）1.DNA1.DNA的溶解性的溶解性的溶解性的溶解性（三）除去滤液中的杂质（三）除去滤液中的杂质方案一、在滤液中加入方案一、在滤液中加入NaClNaCl，使，使NaClNaCl溶液浓度为溶液浓度为2mol/L2mol/L，过滤除去，过滤除去不溶的杂质不溶的杂质，再加入蒸馏水，调节，再加入蒸馏水，调节NaClNaCl溶液浓度为溶液浓度为0.14mol/L0.14mol/L，析出，析出DNADNA，过滤除去，过滤除去溶溶液中的杂质液中的杂质，再用，再用2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶解溶液溶解DNADNA。

加入2mol/L的的NaCl溶液，搅拌溶液，搅拌1min，注意应沿一个方向，注意应沿一个方向，目的是？

目的是？

目的是使DNA充分溶解思考：

过滤溶解有DNA的2mol/L的的NaCl溶液，获得什么？

溶液，获得什么？

含DNA的滤液思考：

这一步过滤的目的是？

含DNA的滤液，除去不溶的杂质DNA的析出的析出将溶液中的将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。

是实验成败的关键。

加加蒸馏水蒸馏水降低降低NaCl溶液浓度，使溶液浓度，使DNA析出。

析出。

实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一沿一个方向个方向不停地均匀搅拌，以利于不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠分子的附着和缠绕。

同时绕。

同时应注意控制加水量应注意控制加水量，使使NaCl溶液的始终浓度溶液的始终浓度为为0.10.2mol/L。

加水太多、溶液过稀，会使。

加水太多、溶液过稀，会使DNA分子又重新溶解。

分子又重新溶解。

注意：

在析出DNA的黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增加思考：

加蒸馏水的目的是？

调节调节NaCl溶液物质的量为接近溶液物质的量为接近014mol/L，使，使DNA黏黏稠物最大限度的析出稠物最大限度的析出思考：

这一步搅拌的目的是？

（轻轻地沿一个方向不停地均与搅拌）稀释稀释NaCl溶液溶液,析出析出DNA黏稠物黏稠物思考：

这一步过滤含DNA黏稠物的黏稠物的014mol/L的的NaCl溶液，获得什么？

获得DNA黏稠物（黏稠物（纱布上的纱布上的DNA黏稠物）黏稠物）思考：

过滤的目的？

获得DNA黏稠物。

除去溶液中的杂质黏稠物。

除去溶液中的杂质为什么反复地溶解与析出为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？

，能够去除杂质？

11、用高盐浓度的溶液溶解、用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去，能除去在高盐中不能溶解的杂质在高盐中不能溶解的杂质；

22、用低盐浓度使、用低盐浓度使DNA析出，能除去析出，能除去溶解溶解在低盐溶液中的杂质。

在低盐溶液中的杂质。

因此，通过反复溶解与析出因此，通过反复溶解与析出DNA，就能，就能够除去与够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。

溶解度不同的多种杂质。

方案二与方案三的原理有什么不