祁自柏-体外诊断试剂的分类和基本原理PPT推荐.ppt
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游离甲状腺素(FT4)定量测定试剂盒电化学发光法:
甲型肝炎病毒抗体诊断试剂盒微粒子酶免法:
丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(第二类)胶体金(硒、乳胶)类试剂胶体金法:
梅毒抗体-乙肝表面抗原诊断试剂盒胶体硒法:
HIV(1+2+0)试剂盒(第三类)免疫印迹试剂免疫印迹试剂盒:
风湿病自身抗体检测试剂盒(免疫印迹法)(第四类)蛋白芯片(微阵列)类试剂蛋白芯片(微阵列):
丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒(蛋白芯片法);
多肿瘤标志物检测试剂盒(蛋白芯片法)(第五类)单抗类试剂血型定型类试剂:
血型定型试剂盒(单克隆抗体)免疫组化:
ImmuChem免疫组化试剂盒(单抗)免疫比浊:
血清载脂蛋白A1免疫比浊试剂盒乳胶凝集:
D-dimer二聚体乳胶凝集试剂盒(第六类)多抗类试剂血型定型类试剂:
血型定型试剂盒(人血清/马血清)免疫组化:
癌胚抗原检测试剂盒(多抗)免疫比浊:
-微球蛋白测定试剂盒(免疫比浊法)乳胶凝集:
沙门氏菌乳胶凝集试剂盒(第七类)诊断血清(菌液)诊断血清:
侵袭性大肠埃希氏菌诊断血清;
志贺氏菌属四种混合多价血清诊断菌液:
伤寒沙门菌菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原诊断菌液(第八类)血球凝集类试剂抗体致敏血球:
破伤风抗体诊断试剂(血凝法);
白喉抗体诊断试剂(血凝法)(第九类)核酸扩增类试剂荧光PCR:
乙型肝炎病毒核酸定量测定试剂盒PCR-ELISA:
结核分支杆菌检测试剂盒(核酸扩增酶联免疫法)PCR-毛细管电泳:
性染色体多倍体(分型与突变)检测试剂盒;
PCR-电泳:
-地中海贫血基因诊断试剂盒(gap-PCR法)转录介导扩增(TMA):
沙眼衣原体与结核分枝杆菌检测试剂盒第十类)基因芯片(微阵列)类试剂基因芯片(微阵列):
-地中海贫血基因芯片诊断试剂盒PCR-杂交:
人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒(PCR-反向杂交法)(第十一类)探针放大(原位杂交)类试剂bDNA类:
HIV-1bDNA检测试剂盒;
mRNA检测试剂盒(生物素原位杂交法)(第十二类)普通生化类试剂(十万级要求)(包括酶类化学试剂、凝血试剂类等试剂)酶类化学试剂:
丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒;
碱性磷酸酶(ALP)测定试剂盒凝血试剂:
凝血酶原时间(PT)测定试剂盒;
组织纤溶酶原激活物(t-PT)测定试剂盒(第十三类)普通生化类试剂(清洁环境)(包括一般化学试剂、血气电解质类、血液分析仪用试剂类等)一般化学试剂:
无机离子(铝、镉等)测定试剂盒;
白蛋白测定试剂盒(BCG法);
总胆固醇测定试剂盒(COD-CE-PAP法)血气电解质:
电解质分析仪随机试剂;
生化分析仪用稀释液、冲洗液血液分析仪用试剂:
血液分析仪用稀释液、溶血剂(第十四类)干化学类试剂干化学试剂(条、卡或盒):
干化学尿液分析试纸条;
尿微量白蛋白(UALB)测试卡(第十五类)药敏类试剂药敏纸片(卡):
抗生素药敏纸片;
随机专用药敏试剂(盒)(卡)(第十六类)培养基类马丁干粉培养基;
人胚胎干细胞无血清培养基我国体外试剂的几个发展阶段我国体外试剂的几个发展阶段1七十年代末,七十年代末,乳胶凝集,血球凝乳胶凝集,血球凝(PHA,RPHA)2八十年代初期,放射免疫测定八十年代初期,放射免疫测定(RIA),抗抗HBs单克隆抗体单克隆抗体3八十年代中期,酶联免疫试剂,基因工程表达乙肝八十年代中期,酶联免疫试剂,基因工程表达乙肝病毒核心抗原和病毒核心抗原和e抗原抗原4九十年代,九十年代,聚合酶链反应聚合酶链反应(PCR),丙肝,戊肝丙肝,戊肝病毒基因被克隆,各种基因工程抗病毒基因被克隆,各种基因工程抗原被应用原被应用5近期,近期,发光免疫发光免疫,生物芯片技术生物芯片技术(基因芯片,基因芯片,蛋白芯片蛋白芯片)(第一类)酶联免疫(酶标板、磁珠、微粒子)类试剂酶联免疫法:
丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒酶联免疫试剂抗原抗体之间的特异反应与酶的高效催化反应有机的结合。
固相样品放大抗原抗体抗抗体-酶-底物-显色抗体抗原抗体-酶-底物-显色酶标板酶标板样品中样品中HCV抗原抗原HRP酶酶标记抗标记抗HCV抗体抗体抗抗HCV抗体抗体HRP酶酶单克隆抗体单克隆抗体丙肝抗原ELISA试剂HIV-1p24抗原检测试剂的原理1双抗体夹心法应用双抗体夹心法应用HBsAg,HBeAg,HBcAg,pres1,pres22双抗原夹心法双抗原夹心法应用应用抗抗HBs,抗,抗HIV3竞争法竞争法应用应用抗抗HBc,抗抗pres24中和抑制法中和抑制法应用应用抗抗Hbe5捕获法捕获法应用应用抗抗HBcIgM6间接法应用间接法应用抗抗HCV,抗抗HEV,几种主要的酶联免疫方法模式几种主要的酶联免疫方法模式发光免疫试剂1.抗原抗体反应的基本原理及方法模式与酶联免疫试剂完全相同2.检测光信号,其光信号可因酶催化而产生也可用其他方法使其产生酶促化学发光以酶为催化剂,通过氧化反应,使底物发光。
过氧化物酶(HRP)促发光,底物鲁米诺碱性磷酸酶(AP)促发光,底物螺旋金刚烷环氧化物苯磷酸酯(AMPPD)鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统(鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统(HRPHRP)商业化产品中常见的化学发光系统
(一)商业化产品中常见的化学发光系统
(一)RROHOHRRBBOHOHOHOHRROHOHSSNN鲁米诺及其衍生物的增强剂(鲁米诺及其衍生物的增强剂(EnhancerEnhancer)AMPPDAMPPDAMPPDAMPPD及其衍生物及其衍生物及其衍生物及其衍生物的化学发光系统的化学发光系统的化学发光系统的化学发光系统(APAPAPAP)光子光子光子光子(477nm)(477nm)APAPOOOOOCHOCH33OPOOPO332-2-OO-OOOOOCHOCH33+*OOOO-OOOCHOCH33商业化产品中常见的化学发光系统
(二)商业化产品中常见的化学发光系统
(二)非酶促化学发光及电化学发光非酶促化学发光:
以吖啶酯、过氧化氢为发光系统,不需要酶的催化。
仪器成本高,技术复杂,尚未国产化(Abbott)电化学发光:
氧化反应是通过电极上的电化学反应产生,标记物为三氯联吡啶钌。
仪器成本高,技术复杂,尚未国产化。
(Roche)CHCH33C=OC=OOORRNN+OHOH-HH+HH22OO22+H+H22OO+RROHOH光子光子光子光子+CO+CO22+CHCH33C=OC=OOORRNNHOHOCHCH33C=OC=OOORRNNHOOHOOCHCH33OONNCHCH33OONNC=OC=OOO商业化产品中常见的化学发光系统(三)商业化产品中常见的化学发光系统(三)吖吖吖吖啶啶啶啶酯酯酯酯化化化化学学学学发发发发光光光光系系系系统统统统/非非非非酶酶酶酶促促促促ee-TPATPATPATPATPATPA+HH+ee-ee-PlatinumelectrodePlatinumelectrodeMagnetMagnet发光发光发光发光发光发光RuRu2+2+基态基态基态基态RuRu2+2+激发态激发态激发态激发态RuRu3+3+电化学发光法原理电化学发光法原理在电场的作用下,三丙胺(TPA)被氧化成阳离子自由基TPA+,后者很不稳定,可自发失去一个质子(H+),形成自由基TPA,这是一种很强的还原剂,可将一个电子给三价的三联吡啶钌衍生物Ru(bpy)33+,使其形成激发态的Ru(bpy)32+,而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。
激发态的Ru(bpy)32+通过荧光机制衰减,发射出一个波长620nm的光子,重新生成基态的Ru(bpy)32+。
该过程在电极表面周而复始地进行,产生许多光子,光电倍增管检测光强度,光强度与Ru(bpy)32+的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量。
时间分辨荧光将三价稀土离子铕(Eu)等通过络合物标记到抗原或抗体分子上,通过检测铕等的荧光实现免疫分析应注意环境及样品中同类元素导致的本底干扰,特别是北方地区时间分辨荧光增强原理时间分辨荧光增强原理发光信号检测发光信号检测光敏二极管、光敏电池、光电偶合器(光敏二极管、光敏电池、光电偶合器(光敏二极管、光敏电池、光电偶合器(光敏二极管、光敏电池、光电偶合器(CCDCCD)结构简单、性能稳定结构简单、性能稳定结构简单、性能稳定结构简单、性能稳定但灵敏度低、线性范围较窄。
但灵敏度低、线性范围较窄。
主要特点主要特点主要特点主要特点原理:
原理:
光信号光信号光信号光信号光电转换器件光电转换器件光电转换器件光电转换器件电压或电流信号电压或电流信号电压或电流信号电压或电流信号放大放大放大放大单光子计数器是目前高灵敏度单光子计数器是目前高灵敏度发光分析仪的核心部件发光分析仪的核心部件光电倍增管光电倍增管光电倍增管光电倍增管高高高高压压压压高速放大器高速放大器高速放大器高速放大器高速比较器高速比较器高速比较器高速比较器高速分频器高速分频器高速分频器高速分频器发光样品发光样品发光样品发光样品产生光子产生光子产生光子产生光子激发光阴极激发光阴极激发光阴极激发光阴极产生光电子产生光电子产生光电子产生光电子在阳极上形在阳极上形在阳极上形在阳极上形成较强信号成较强信号成较强信号成较强信号脉冲信号脉冲信号脉冲信号脉冲信号相对发光单位相对发光单位相对发光单位相对发光单位数字脉冲数字脉冲数字脉冲数字脉冲(RLU)(RLU)在各打拿极之间得到在各打拿极之间得到在各打拿极之间得到在各打拿极之间得到能量和数目的倍增能量和数目的倍增能量和数目的倍增能量和数目的倍增流动池检测方式示意图流动池检测方式示意图检测器检测器检测器检测器检测池检测池检测池检测池负压泵负压泵负压泵负压泵废液废液废液废液四通阀四通阀四通阀四通阀冲洗液冲洗液冲洗液冲洗液样品管样品管样品管样品管计量泵计量泵计量泵计量泵干燥空气干燥空气干燥空气干燥空气原位进样泵原位进样泵原位进样泵原位进样泵氧化剂氧化剂氧化剂氧化剂优点:
结构简单,运行成本低优点:
结构简单,运行成本低缺点:
明显的易产生交叉污染,工作效缺点:
明显的易产生交叉污染,工作效率受限。
率受限。
常见进口发光免疫分析产品常见进口发光免疫分析产品生产厂商产品技术类型反应体系产品特点仪器类型ROCHE电化学发光、磁微珠肿瘤标志物E170ABBOTT化学发光、磁微珠碱性磷酸酶、吖啶酯乙肝项目I2000Bayer化学发光、磁微珠吖啶酯内分泌项目ADVIACentaurBeckman化学发光、磁微珠碱性磷酸酶UniCelDxI800DPC化学发光、塑料球碱性磷酸酶药物分析Immuline2000强生化学发光辣根过氧化物酶丙肝生物梅里埃化学发光碱性磷酸酶HIVPE(Wallac)时间分辨荧光(第二类)胶体金(硒、乳胶)类试剂胶体金法:
HIV(1+2+0)试剂盒胶体金试剂原理硝酸纤维膜加样检测区对照区(HBsAg)-玻璃纤维膜-抗HBs羊抗鼠鼠抗HBs胶体金免疫层析法反应示意图胶体金免疫层析法反应示意图吸样垫胶体金垫包被T线包被C线上样垫NC膜支撑物HIV胶体金类快速诊断试剂检测结果第三类)免疫印迹试剂免疫印迹试剂盒:
风湿病自身抗体检测试剂盒(免疫印迹法)免
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