Coombs操作说明PPT文档格式.ppt
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一实验前准备:
11%标准A,B,O型红细胞悬液(三人以上混合,洗涤一次)。
2.1%不完全抗体筛选细胞(O型红细胞)、,0.2M巯基乙醇应用液。
3打开37Diana孵育器,56水浴箱,各离心机电源。
二新生儿及其父母血型卡、直抗试验1:
1离心抗凝血标本,取压积红细胞1ul加1ml生盐配成1%红细胞悬液(可不洗涤)。
2血型卡上写好姓名,8孔中加入患者1%的红细胞悬液50ul。
3不孵育,将卡放到Dianafuge离心机中离心。
4观察血型、直抗试验结果。
注:
IgG:
兔多克隆抗-IgGAHG:
多克隆抗人球蛋白二新生儿及其父母血型卡、直抗试验2:
姓名离心观察血型、直抗试验结果患者1%的红悬50ul三放散试验1:
1取新生儿压积红细胞200ul洗涤三次。
2加200ul生盐混匀在56水浴箱10分钟(中间轻轻振荡几次),2500转/分离心3分钟。
3Coombs卡上做好标记,取上述上清液50ul加到Coombs卡孔上。
三放散试验2:
4加入相应1%标准A,B,O型红细胞悬液50ul。
原则:
新生儿血型为A型,加标准A,O型红悬2孔;
新生儿血型为B型,加标准B,O型红悬2孔;
新生儿血型为AB型,加标准A,B,O型红悬3孔;
新生儿血型为O型,加标准O型红悬1孔;
5.37下孵育15分钟,离心。
6.观察放散试验结果。
三放散试验:
新生儿压积红悬200ul洗涤三次压积红:
生盐=1:
156,10min2500rpm,3min+1%标准A,B,O型红细胞悬液50ulAO放散姓名离心观察放散试验结果37,15min上清50ul四游离试验:
1Coombs卡上做好标记,加入50ul新生儿血浆。
2加入相应1%标准A,B,O型红细胞悬液50ul。
新生儿血型为AB型,加标准A,B,O型红悬3孔;
4.37下孵育15分钟,离心。
5.观察放散试验结果。
五直接抗人球蛋白试验(Cooms):
1.在Coombs卡AHG下做好标记。
2.加入1%被检红悬50ul。
3.不孵育,将卡放到Dianafuge离心机中离心。
4.观察血型、直抗试验结果。
AHG:
多克隆抗人球蛋白六IgG抗体效价检测:
1.Coombs卡上做好标记。
2.取200ul孕妇血浆与200ul巯基乙醇应用液等量混匀,37水浴1小时,破坏IgM抗A/B抗体。
3.2500转/分离心3分钟,取上清100ul,用生理盐水等比稀释至1:
512。
4.在Coombs卡4孔上加入稀释好的第5-8孔50ul,再加入相应1%标准A,B,O型红细胞悬液50ul。
七IgG抗体效价检测:
2.主侧:
患者血浆50ul供者红悬50ul。
3.次侧:
供者红悬50ul患者血浆50ul。
八抗体筛查:
2.患者血浆50ul1%不完全抗体筛选细胞各50ul。
3.37下孵育15分钟,离心。
4.观察放散试验结果。
九注意事项:
1红细胞悬液浓度为1%,过高过低可能影响结果。
2实验后做好结果的记录和报告,保存血标本在4冰箱一周。
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