液相色谱常见问题及其对策_精品文档PPT文件格式下载.ppt
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不锈钢烧结,孔径10um故障:
堵塞表现:
管路中不断有气泡生成措施:
用520的稀硝酸,超声波清洗,再用蒸馏水清洗注意点:
吸滤头拆下时不必将塑料管剪断,吸滤头,液相色谱容易出问题的部件,23,LC-10ATvp泵:
串联式往复泵,LC-10ADvp泵:
并联式往复泵,液相色谱容易出问题的部件,24,液相色谱容易出问题的部件,单向阀结构,流动相,单向阀原理,25,液相色谱容易出问题的部件,故障1:
宝石球粘附于垫片表现:
泵无法吸液或排液,流路不通措施:
1)用针筒抽出口单向阀以产生负压,使宝石球与垫片分开2)拆下单向阀,放入异丙醇或水中,用超声波清洗,单向阀,26,液相色谱容易出问题的部件,故障2:
宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现:
系统压力波动大措施:
拆下单向阀,放入异丙醇或水中,用超声波清洗,单向阀,27,故障:
密封圈磨损而导致密封不良现象:
系统压力波动大或漏夜措施:
更换密封圈注意点:
更换密封圈拆卸泵头前,柱塞杆复位(PSET),柱塞密封圈,液相色谱容易出问题的部件,28,故障:
堵塞现象:
系统压力波动大或压力偏高措施:
5稀硝酸,超声波清洗判断依据:
关闭排液阀,断开出口管路,设定流速1mL/min,如压力3kgf/cm2,则可能堵塞。
线路过滤器,排液阀,压力传感器,线路过滤器,流动相,液相色谱容易出问题的部件,29,手动进样阀故障:
转子密封损坏现象:
漏液原因:
a拧的太紧b样品太脏c针头损坏或不使用液相专用针解决措施:
更换转子密封,并在使用时注意保养,液相色谱容易出问题的部件,30,液相色谱容易出问题的部件,手动进样阀故障:
载样困难原因:
a定量环堵塞b进样器污染解决措施:
清洗或更换定量环、进样器,31,柱子故障:
系统高压、峰型变差(拖尾峰、前沿峰、分叉峰),保留时间的改变解决措施:
清洗正相柱,正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇反相柱,甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05M稀硫酸,液相色谱容易出问题的部件,32,液相色谱容易出问题的部件,峰产生有肩或分叉的原因,1.柱子劣化(进口处产生不均匀的空隙)2.样品劣化(生成氧化物、分解物等),判断标准所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化,33,延长柱寿命方法:
倒冲柱换过滤片修补柱头,液相色谱容易出问题的部件,34,液相色谱容易出问题的部件,柱的补修,35,填料的取出,液相色谱容易出问题的部件,36,恢复例,液相色谱容易出问题的部件,37,分析柱的维护,1、在使用新柱之前,最好用强溶剂在低流量下(0.2-0.3ml/min)冲洗30mins,长时间未用的分析柱也要同样处理2、定期使用强溶剂冲洗柱子3、使用缓冲盐时,要先用水冲洗,再用有机溶剂冲洗4、净化样品5、分离条件6、不使用时,要盖上盖子,避免固定相干枯7、使用预柱8、避免流动相组成及极性的剧烈变化9、避免压力脉冲的剧烈变化,液相色谱容易出问题的部件,38,更换氘灯(紫外检测器),判断氘灯能量:
设定220nm波长,检查参比池能量,如能量低于800,需更换氘灯。
操作注意点:
不要用手直接接触氘灯表面,液相色谱容易出问题的部件,39,液相色谱容易出问题的部件,故障:
样品池受污表现:
样品池和参比池能量相差较大检查方法:
设定250nm波长,通甲醇或水,查看SMPLEN和REFEN,如两者相差较大,则样品池受污。
措施:
用针筒注入异丙醇,清洗样品池;
如污染严重,拆开样品池,将透镜等放入异丙醇中超声波清洗。
紫外检测器,40,其他问题,溶剂的过滤滤膜类型:
聚四氟乙烯滤膜:
适用于所有溶剂,酸和盐。
醋酸纤维滤膜:
不适用于有机溶剂,特别适用于水基溶剂。
尼龙66滤膜:
适用于绝大多数有机溶剂和水溶液,可以用于强酸,不适用于二甲基甲酰胺。
再生纤维素滤膜:
蛋白吸收低,同样适用于水溶性样品和有机溶剂,41,脱气:
除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响:
1)泵中气泡使液流波动,改变保留时间和峰面积2)柱中气泡使流动相绕流,峰变形3)检测器中的气泡产生基线波动,其他问题,42,脱气的目的,1.防止由气泡的产生引起的故障2.防止由溶解(在液体中的)气体量的变动引起的检测不稳定程度1)示差折射率检测器*使折射率变化2)UV检测器(200nm以下)*溶解氧气有吸收3)荧光检测器*溶解氧气有消光作用,其他问题,43,其他问题,脱气的方法,1.超声波脱气法2.He清除法3.使用氟树脂膜的减压脱气法,44,其他问题,He清除法,调压阀,排气阀,往送液泵,流动相,过滤器,45,其他问题,氟树脂膜,真空室,往送液泵,真空泵,控制器,流动相,使用氟树脂膜的减压脱气法,46,其他问题,梯度洗脱法的注意点,1.流动相使用HPLC级有机溶剂。
2.查看空白实验的数据。
3.遵守分析周期。
(最初的分析数据不采用),47,其他问题,缓冲液,选择缓冲液的步骤1.确定最佳分离状态时的流动相pH2.选择具有与流动相的pH相近的pKa的缓冲液(即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液)3.确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收(在波长210nm附近进行检测时,不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液),48,流动相缓冲液/溶剂选择,梯度优化,流速选择脱气,流速稳定,流动相制备柱高柱效,二级作用力,lotvariation,温度控制检测灵敏度,选择性,温度波动影响样品提取方法选择,样品溶剂选择,氧气影响仪器性能,稳定性,耐用性,易操作性综合评估分析技术的稳定性,可靠性,定量准确性,HPLC如何得到好的结果,
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