实验动物微生物学和寄生虫学质量控制_精品文档PPT资料.ppt
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2)体外寄生虫对动物的骚扰;
3)对宿主机体产生机械性损伤;
4)对宿主产生毒性作用;
5)对宿主生理、生化和免疫系统产生影响。
(二)监测意义1、保证实验研究的顺利进行和工作人员的身体健康。
2、确保实验数据的准确性和可重复性。
(三)监测方法实验动物的微生物、寄生虫检测具体操作方法详见国家标准实验动物微生物学检测方法(GB/T14926.1-14926.64)和国家标准实验动物寄生虫学的检测方法(GB/T18448.118448.10)。
检测方法归纳起来有病原学检测和血清学检测。
细菌、真菌和寄生虫以病原学检测为主,血清学检测为辅;
但有些病原体也逐渐使用血清学方法检测,如支原体、泰泽氏病原体、弓形体等。
病毒的常规定期检测以血清学为主,而疾病诊断则以病原学检测为主。
包括监测项目的选定、采样数量、检测频率、采样方法、病毒、细菌、寄生虫和真菌检测方法。
1、监测项目我国经过十多年来对各地实验动物感染病原微生物、寄生虫情况的调查,结合其他国家的规定和经验,制定了我国啮齿类、兔、犬、猴和鸡的微生物学以及寄生虫学等级标准。
目前有关实验动物的标准有28个。
颁布年代主要在2001年,最近对标准又进行了部分修订。
GB14925实验动物环境与设施GB14923实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制GB14922.1实验动物寄生虫学等级及检测GB14922.2实验动物微生物学等级及检测GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准GB14924.2实验动物配合饲料卫生标准GB14924.3实验动物小鼠、大鼠配合饲料GB14924.4实验动物兔配合饲料GB14924.5实验动物豚鼠配合饲料GB14924.7实验动物犬配合饲料GB14924.8实验动物猴配合饲料GB14924.6实验动物地鼠配合饲料GB/T14927.1实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法GB/T14927.2实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法GB/T14926.4214926.43实验动物微生物学检测方法
(1)GB/T14926.114926.6实验动物微生物学检测方法
(2)GB/T14926.814926.17GB/T14926.41GB/T14926.4414926.49GB/T14926.5014926.55实验动物微生物学检测方法(3)GB/T14926.1814926.32实验动物检测方法(4)GB/T14926.5614926.64GB/T18448.118448.10实验动物寄生虫学检测方法GB/T14924.9实验动物配合饲料常规营养成分的测定GB/T14924.10实验动物配合饲料氨基酸的测定GB/T14924.12实验动物配合饲料矿物质和微量元素的测定GB/T14924.11实验动物配合饲料维生素的测定GB/T17998SPF鸡微生物学监测总则,标准要求检测的项目分为必须检测项目和必要时检测项目。
必须检测项目:
是指在进行实验动物质量评价时必须检测的项目。
必要时检测项目:
是指从国外引进实验动物时;
怀疑有本病流行时;
申请实验动物生产许可证和实验动物质量合格证时必须检测的项目。
我国的实验动物微生物和寄生虫检测标准是我国实验动物质量要求的最低标准,各个地区和生产企业还可以根据当地疾病的流行情况,或者提高企业产品制定相关标准,但要求不能低于国家标准要求。
与国外标准相比较,我国的标准要求还是偏高,主要表现在条件致病菌检测方面。
SPF级动物监测项目,我国实验动物质量要求的最低标准,其它行业、地方标准不能低于国家标准要求。
2、采样数量我国国家标准规定:
选择成年动物用于检测。
取样数量:
每个小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠和兔生产繁殖单元;
以及每个犬、猴生产繁殖群体,根据动物多少,取样数量见表。
3、检测频率普通级动物:
每三个月至少检测动物一次。
清洁级动物:
无特定病原体动物:
无菌动物:
每年检测动物一次。
每2-4周检查一次动物的生活环境标本和粪便标本。
一般来说,一旦病原体入侵动物群体引起感染,初期分离病原体较容易,随后抗体的检出率上升,2-3个月后可因某些个体抗体水平的降低以及新出生的非感染个体的增加等原因,抗体检出率下降。
4、采样方法可用随机抽样法或哨兵动物法。
随机抽样法采样时,宜在动物群中不同方位随机采取成年动物,选择至少4个不同的位置采集样品(例如四角和中央)。
哨兵动物法将经过检测符合质量要求的同种系实验动物即哨兵动物放入群内,不时调换位置,饲养一定时间后解剖检查抗体或病原。
采样样品从采样点到检测实验室运输途中应保证动物的安全和避免污染。
一般来说,无论病原学或血清学检测,检测结果阳性者表示该群动物有该病原体感染的存在。
但作为疾病病原体的确定,还需要进一步分析。
如果检测结果阴性,一般来说可作为无此病原体存在的依据。
但检测结果亦受多种因素的影响。
如:
取材数量、感染率的高低、取材频率、取材对象(动物年龄、疾病的早晚期等)、方法学的选择(病原学或血清学检测)、方法学的敏感性等,均与检测结果密切相关。
5、检测方法-病毒检测包括血清学检测和病原学检测。
(1)血清学检测:
适用于各级各类实验动物的经常性检测和疫情普查。
常用的方法有:
酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光试验(IFA)、免疫酶染色试验(IEA)、血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)、病毒中和试验、补体结合试验、琼脂扩散实验等。
(2)病原学检测:
适用于动物群中有疾病流行,需要检出病毒或确认病毒存在的情况。
检测方法有:
病毒分离与鉴定,病毒颗粒、抗原或核酸的检出,潜在病毒的激活,抗体产生试验等。
例如:
采用免疫组化的方法在光镜下检查病变组织中的特异性抗原;
采用HA方法检查患病动物排泄物或组织悬液中的血凝素抗原;
采用电镜技术或免疫电镜技术检查组织或排泄物中的病毒颗粒;
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检查病毒的蛋白质;
采用核酸分子杂交技术或聚合酶链反应(PCR)检出组织或排泄物中的病毒核酸。
检测方法-细菌检测最常用的方法是病原菌的分离与培养或进行动物接种。
部分病原菌,如:
布氏杆菌、支原体等,可采取血清学方法。
对于泰泽氏病原体,由于不能在人工培养基上生长,因此宜采用血清学检测方法,动物诱导实验进行组织压片、镜检的方法进行检查,并结合病理检查结果最后做出诊断。
检测方法-真菌检测目前主要采用沙氏培养基分离培养。
皮肤真菌通常在25培养,深部真菌通常在37培养。
不同的真菌具有一定的菌落特点,结合镜下染色检查可进行种属鉴定,有时,还需借助于生化反应结果和免疫学方法进行最后诊断。
检测方法-寄生虫检测
(1)体外寄生虫:
如肉眼观察法、透明胶纸粘取法、拔毛取样法、皮屑刮取法、黑背景检查法、解剖镜下通体检查法等,主要适用于检查蚤、虱、螨等节肢动物。
(2)体内寄生虫:
主要检查蠕虫和原虫,可用直接涂片法(粪便、血液、脏器、肠内容物)、饱和盐水漂浮法或沉淀法、透明胶纸肛门周围粘取法、组织或器官剖面压印法、病变组织切片或压片法、尿液的离心法(如检查鼠膀胱线虫)等。
我省近5年实验动物微生物、寄生虫感染状况,国外小鼠病毒感染情况,国外小鼠细菌感染情况,国外小鼠的寄生虫感染情况,国外大鼠病毒感染情况,国外大鼠细菌感染情况,国外大鼠的寄生虫感染情况,实验动物常见的寄生虫,线虫螨,螨蜱,第三节实验动物主要疫病和人畜共患传染病,流行性出血热淋巴细胞性脉络丛脑膜炎猴B病毒病和免疫缺陷病狂犬病(同上节,省略)弓形体钩端螺旋体病结核分支杆菌病,重要的人兽共患病,动物烈性传染病,鼠痘小鼠肝炎病毒仙台病毒兔出血热,流行性出血热,流行性出血热(EpidemicHemorrhagicFever,EHF)是由流行性出血热病毒(EHFV)引起的以发热、出血和肾脏损害为主要临床表现的烈性传染病。
1981年,WHO统一命名为肾综合征出血热(HemorrhagicFeverWithRenalSyndrome,HFRS)。
病原HFRS是由布尼亚病毒科,汉坦病毒属的汉坦病毒引起。
该病毒对脂溶剂敏感,乙醚、氯仿、丙酮、去氧胆酸盐等均可灭活,PH5.0以下,60,1h可使其全部杀死,紫外线照射30分钟也能灭活病毒。
流行病学HFRS属自然疫源性疾病,啮齿类动物为主要宿主。
人类感染主要是接触带毒动物以及排泄物,吸入型感染。
实验大鼠感染主要是与带毒野鼠接触,感染后长期向外排毒,从而危及人类健康。
我国20世纪后期多次发生人类感染流行性出血热病毒,特别是实验人员感染较多,在多个省市均有发生。
临床症状及病理人感染表现高热、出血性肾脏损伤。
实验大鼠和野鼠感染不表现临床症状,无病理变化。
据报道,在乳小鼠、乳长爪沙鼠的动物模型中,能观察到病变组织的广泛充血、出血、渗出、坏死等,其中肾脏最为严重。
潜伏期14d。
诊断定期的血清学检测。
特异性抗体检测,间接免疫荧光试验是经典检测方法。
其他血清学方法还包括免疫酶染色法、ELISA试验、血凝抑制试验和空斑减少试验等。
病原检测也是肾综合症出血热病毒常用的诊断方法,鼠肺冰冻切片免疫荧光检测是经典的病原检测方法,近年来,荧光定量PCR技术也常用于大鼠肾综合症出血热病毒的检测。
预防与控制防止野鼠进入设施;
实验大、小鼠群定期进行血清学检测;
加强实验室管理,防止饲料、垫料等被野鼠污染。
饲养人员和实验人员应加强防护措施,定期体检。
淋巴细胞性脉络丛脑膜炎,由淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)引起的一种急性传染病,也感染人。
感染后目前还无法治疗。
主要侵害中枢神经系统,呈现脑脊髓炎症状。
病原LCMV属砂粒病毒科、砂粒病毒属。
该病毒对乙醚和去污剂敏感,不耐热,5620min即可灭活。
0.1甲醛、紫外线也可将其灭活。
流行病学小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、人都易感。
小鼠可持续带毒,而且病毒可存在感染小鼠的所有器官,包括唾液腺,因此,感染小鼠可经唾液、鼻分泌物和尿液向外排毒,并且可通过子宫、乳汁传给子代,据报道普通小鼠抗体阳性率为3%。
临床症状和病理变化小鼠感染LCMV依年龄、感染途径及其他因素的不同,可表现为脑型、内脏型和迟发型三种类型。
小鼠带毒后可表现为无症状的带毒者。
人感染后可引起流感样症状或脑膜炎。
对实验的干扰抑制体液和细胞免疫应答(能在B、T淋巴细胞和巨噬细胞中大量复制);
在肿瘤学研究中,常引起移植肿瘤污染。
诊断
(1)病毒分离与鉴定:
可将病鼠的脑、肝等脏器制成匀浆接种于易感成年小鼠脑内,小鼠通常在接种后45天发病,病鼠震颤、痉挛,随即死亡。
取病死小鼠的脑组织制成冰冻切片,采用免疫荧光技术检查脑细胞中的LCMV抗原。
(2)血清学试验:
ELISA试验等。
预防与控制首先防止野鼠进入动物房。
发现小鼠已被感染,应将小鼠全部淘汰,房舍彻底消毒后,重新引种,建立新种群。
若为非常珍贵的品系,可筛选无病毒血症及抗体阴性的种鼠。
LCMV可经胎盘垂直传播,因此,通过剖腹产净化鼠群需要注意选择不带LCMV的母鼠方能有效。
猴疱疹病毒1型感染(B病毒),由猴B病毒又称
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