细菌的革兰氏染色和形态观察_精品文档PPT文件格式下载.ppt
- 文档编号:15486951
- 上传时间:2022-11-01
- 格式:PPT
- 页数:25
- 大小:985KB
细菌的革兰氏染色和形态观察_精品文档PPT文件格式下载.ppt
《细菌的革兰氏染色和形态观察_精品文档PPT文件格式下载.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《细菌的革兰氏染色和形态观察_精品文档PPT文件格式下载.ppt(25页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时,细菌所带正电荷增加,此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。
二、实验原理-简单染色,染色前必须固定细菌。
其目的有二:
一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上;
二是增加其对染料的亲和力。
常用的有加热和化学固定两种方法。
固定时尽量维持细胞原有的形。
二、实验原理-革兰氏染色,革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家ChristainGram氏创立的,革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类。
革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性,是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。
二、实验原理-革兰氏染色,革兰氏染色法的基本步骤是:
先用初染剂结晶紫进行初染,再用碘液媒染,然后用乙醇(或丙酮)脱色,最后用复染剂(如番红)复染。
经此方法染色后,细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌;
如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色),该菌属于革兰氏阴性菌。
二、实验原理-革兰氏染色,当用结晶紫初染后,像简单染色法一样,所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。
碘作为媒染剂,它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物,从而增强了染料与细菌的结合力。
当用脱色剂处理时,两类细菌的脱色效果是不同的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成,壁厚、类脂质含量低,用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小,透性降低,从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内,经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。
革兰氏阴性菌则不同,由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高,所以当脱色处理时,类脂质被乙醇(或丙酮)溶解,细胞壁透性增大,使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来,用复染剂复染后,细胞被染上复染剂的红色。
三、实验器材,1、菌种:
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌斜面菌种。
2、显微镜、载玻片、擦镜纸、酒精灯、接种环、吸水纸、盖玻片、试管、水浴锅。
3、草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、0.5%番红色液、蒸馏水、双层瓶(香柏油和二甲苯)。
四、实验方法和步骤,细菌的简单染色1、涂片:
用1%盐酸清洁玻片后,在玻片中央滴上一小滴蒸馏水,再用无菌操作的方法挑菌少许于玻片的水中,并充分混匀涂成薄膜。
2、干燥:
将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。
3、固定:
涂面朝上,通过微火2-3次。
4、染色:
待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上,覆盖涂面染色1-2分钟。
5、水洗:
倾去染色液,用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的水变无色为止(注:
勿冲去菌体)。
6、干燥:
自然干燥,或用吸水纸吸干。
7、镜检:
油镜观察并绘图。
四、实验步骤,1、菌落形态观察:
2、细菌简单染色:
3、细菌革兰氏染色。
注意:
菌落颜色、湿度、形状、大小、透明度、颜色、边缘是否规则等特征。
染色过程:
涂片干燥固定染色(1min)水洗干燥镜检注意事项:
涂片:
取菌量不能太大干燥:
自然干燥水洗:
水流不能直接冲在涂菌处,2.革兰氏染色,1)、涂片:
取清洁玻片一块,在玻片两端1/4处下面用记号笔分别标明S和E(见图示),并滴一滴蒸馏水,分别将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌涂布在相应的区域内。
2.革兰氏染色,2、干燥与固定:
方法同
(一)中2,3步骤3、染色:
结晶紫染色1-2分钟-水洗-碘液媒染1-2分钟-水洗-酒精脱色15-20秒-水洗-番红复染色2-3分钟-水洗-干燥-镜检记录。
染色结果,金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果,染色结果,大肠杆菌革兰氏染色结果,染色结果,金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果,四、实验结果,绘图记录观察结果,显微镜放大倍数物镜放大倍数目镜放大倍数,思考题,1、在制作涂片中,为什么要进行固定这一步?
2、革兰氏染色中哪一步关键,为什么?
附:
油镜的使用,双目显微镜,单目显微镜,2.油镜的原理,油镜的透镜很小,从载玻片透过的光线通过空气时,因介质折光率不同,光线将发生散射现象,使射入镜筒的光线很少,物象不清。
若在油镜与玻璃片之间加入与玻璃折射率相近的香柏油,则使通过的光线不至因折射而减弱,因此能清楚地看到物象。
双层瓶,香柏油,二甲苯,实验报告注意事项,1.上课前必须写好预习实验报告2.实验报告内容必须填写完整,如实验课程,实验时间,指导教师等3.本次实验结束后必须记录好原始记录,由老师签完名后方可离开4.值日生打扫卫生5.实验成绩占期末总评成绩的20%,下一个实验,实验二:
细菌特殊结构的染色与观察,
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 细菌 革兰氏 染色 形态 观察 精品 文档