微生物染色优质PPT.ppt
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微微生生物物细细胞胞中中含含有有大大量量的的蛋蛋白白质质等等一一类类两两性性电电解解质质:
在在酸酸性性溶溶液液中中结结合合质质子子带带正正电电;
在在碱碱性性溶溶液液中中给给出出质质子子而而带带负负电电。
等等电电点点一一般般在在pH=25。
所所以以,在在中中性性、碱碱性性或或弱弱酸酸性性溶溶液液中中,微微生生物物细细胞胞通通常常带带负负电电荷荷。
碱碱性性染染料料在在电电离离时时,染染色色部部分分是是带带正正电电荷荷的的,容容易易与与带带负负电电荷荷的的菌菌体体结结合合使使之之着着色色。
经经染染色色后后的的菌菌体体细细胞胞与与背背景景形形成成鲜鲜明明的的对对比比,在在显显微微镜下很容易观察。
镜下很容易观察。
简简单单染染色色法法是是只只用用一一种种染染料料使使细细菌菌着着色色以以显显示示其其形形态态,简简单单染染色色不不能能辨辨别别细细菌菌细细胞胞的的构构造造。
通通常常采采用用碱碱性性染染料料(如如美美蓝蓝、结结晶晶紫紫、碱碱性性复复红红等等)使其着色。
使其着色。
单染色步骤单染色步骤1涂涂片片取取一一块块载载玻玻片片,用用记记号号笔笔划划分分出出两两区区域域并并做做上上记记号号,在在两两区区域域中中央央各各滴滴半半滴滴无无菌菌水水,用用接接种种环环以以无无菌菌操操作作法法分分别别取取两两种种菌菌种种在在左左右右两两滴滴水水中中,和和匀后涂成薄膜。
匀后涂成薄膜。
2干燥干燥室温自然干燥或吹干。
室温自然干燥或吹干。
3固定固定涂面朝上,通过火焰涂面朝上,通过火焰23次。
次。
4染染色色在在涂涂片片薄薄膜膜上上滴滴加加结结晶晶紫紫染染液液,使使之之覆覆盖盖2分钟。
分钟。
5水水洗洗傾傾倒倒去去染染液液,斜斜置置载载玻玻片片,用用洗洗瓶瓶小小水水流沿玻片边缘冲洗,直至水呈无色为止。
流沿玻片边缘冲洗,直至水呈无色为止。
6干燥干燥室温自然干燥或用吸水纸吸干。
室温自然干燥或用吸水纸吸干。
2.2.革兰氏染色法革兰氏染色法是是18841884年年由由丹丹麦麦病病理理学学家家C.GramC.Gram所所创创立立的的。
革革兰兰氏氏染染色色法法是是细细菌菌学学上上最最常常用用的的鉴鉴别别染染色色法法,因因为为通通过过此此法法染染色色,可可将将细细菌菌鉴鉴别别为为革革兰兰氏氏阳阳性性菌菌(GG+)和和革革兰兰氏氏阴阴性性菌菌(GG-)两大类。
)两大类。
革兰氏染色法原理:
革革兰兰氏氏染染色色法法将将细细菌菌分分为为G和和G-,这这由由两两类类细细菌菌细细胞胞壁壁的的结结构构和和组组成成的的不不同同而而决决定定。
用用结结晶晶紫紫初初染染后后,所所有有的的细细菌菌都都染染上上蓝蓝紫紫色色。
碘碘作作为为媒媒染染剂剂能能与与结结晶晶紫紫结结合合形形成成结结晶晶紫紫-碘碘的的复复合合物物,增增强强了了染染料料与与菌菌体体的的结结合合力力。
用用乙乙醇醇脱脱色色处处理理时时,两两类类细细菌菌的的脱脱色色效效果果是是不不同同的的。
G细细菌菌的的细细胞胞壁壁主主要要由由肽肽聚聚糖糖形形成成的的网网状状结结构构组组成成,且且壁壁厚厚、类类脂脂含含量量低低,用用乙乙醇醇脱脱色色时时使使细细胞胞壁壁脱脱水水、网网状状结结构构孔孔径径缩缩小小,通通透透性性降降低低,使使得得结结晶晶紫紫碘碘的的复复合合物物不不易易被被洗洗脱脱而而保保留留在在细细胞胞内内。
虽虽经经洗洗脱脱和和复复染染仍仍然然保保持持初初染染剂剂的的蓝蓝紫紫色色。
G-细细菌菌则则不不同同,由由于于其其细细胞胞壁壁肽肽聚聚糖糖层层较较薄薄,类类脂脂含含量量高高,所所以以在在脱脱色色处处理理时时,类类脂脂被被乙乙醇醇溶溶解解,细细胞胞壁壁的的通通透透性性增增大大,使使结结晶晶紫紫碘碘的的复复合合物物比比较较容容易易被被洗洗脱脱出出来来,用用复复染染剂剂复复染染后后,细细胞胞被被染染上上复染剂复染剂的颜色。
的颜色。
(二二)革兰氏染色革兰氏染色完成单染色的完成单染色的16步骤后步骤后7.媒媒染染加加媒媒染染剂剂碘碘液液使使之之覆覆盖盖1分分钟钟,水水洗洗,吸水纸吸干。
吸水纸吸干。
8.脱脱色色滴滴加加95%乙乙醇醇数数滴滴使使之之覆覆盖盖20-3020-30秒秒钟钟,立即水洗立即水洗,吸干。
吸干。
9.复复染染用用沙沙黄黄(番番红红)液液复复染染2分分钟钟,水水洗洗,吸干。
1234?
结晶紫结晶紫碘液碘液酒精酒精复红复红革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性杆菌革兰氏阳性杆菌将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净:
将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净:
a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。
先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。
b.用擦镜纸沾少许用擦镜纸沾少许乙醚乙醚-乙醇混合乙醇混合液将镜头擦液将镜头擦2-3次。
c.再用干净的擦镜纸将镜头擦再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。
注意擦镜头时次。
注意擦镜头时向一个方向擦拭。
将显微镜小心轻拿,按号放入显向一个方向擦拭。
将显微镜小心轻拿,按号放入显微镜柜中。
微镜柜中。
观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净,观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净,放入回收容器内。
放入回收容器内。
实验完毕后的处理实验完毕后的处理1、载玻片要洁净无油迹。
涂片时,滴水不、载玻片要洁净无油迹。
涂片时,滴水不要过多,挑菌量宜少,涂片要均匀,菌膜要过多,挑菌量宜少,涂片要均匀,菌膜宜薄。
宜薄。
2、革兰氏染色成败的关键是、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色酒精脱色。
?
(五)注意事项(五)注意事项3、染色过程中勿使染色液干涸。
、染色过程中勿使染色液干涸。
4、选用幼龄的细菌。
、选用幼龄的细菌。
(六)实验作业(六)实验作业绘出绘出枯草杆菌枯草杆菌和和大肠杆菌大肠杆菌的形态图,并注明的形态图,并注明两菌的革兰氏染色的反应性。
两菌的革兰氏染色的反应性。
1你你认认为为哪哪些些环环节节会会影影响响革革兰兰氏氏染染色色结结果果的的正正确确性性?
其其中中最最关关键键的环节是什么?
的环节是什么?
2当当你你对对一一株株未未知知菌菌进进行行革革兰兰氏氏染染色色时时,怎怎样样能能确确证证你你的的染染色色技技术操作正确,结果可靠?
术操作正确,结果可靠?
细菌的芽孢染色细菌的芽孢染色实验二实验二实验目的实验目的11、继续学习微生物标本的制作方法;
、继续学习微生物标本的制作方法;
22、掌握芽孢染色的基本原理及方法、掌握芽孢染色的基本原理及方法;
33、巩固无菌操作技术。
、巩固无菌操作技术。
实验原理实验原理利利用用细细菌菌各各部部位位(分分)的的构构造造不不同同,它它们们对对染染料料的的亲亲和和力力也也不不同同。
因因此此,可可以以采采用用各各种种特特殊殊染染色色方方法法,使使细细菌菌细细胞胞的的不不同同构构造造能能在在显显微微镜镜下显示出来,便于观察和区别。
下显示出来,便于观察和区别。
芽芽孢孢又又称称内内生生孢孢子子(endospore),是是某某些些细细菌菌(革革兰兰氏氏染染色色阳阳性性杆杆菌菌)生生长长到到一一定定时时间间(对对数数期期后后期期),在在细细胞胞内内形形成成一一个个圆圆形形、椭圆形或圆柱形的结构。
椭圆形或圆柱形的结构。
芽芽孢孢有有的的长长在在中中央央或或近近中中央央,圆圆形形或或椭椭圆圆形形,芽芽孢孢的的大大小小,位位置置,在在分分类类鉴鉴定定上上有有一一定定的的意意义义,它它仅仅仅仅是是芽芽孢孢细细菌菌生生活活史史的的一一个个环环节节,它它还还是是检检验验培培养养基基灭灭菌菌彻彻底不彻底的依据。
底不彻底的依据。
中央芽孢中央芽孢偏端芽孢偏端芽孢游离芽孢游离芽孢末端芽孢末端芽孢芽孢染色原理芽孢染色原理芽芽孢孢壁壁厚厚、透透性性低低,着着色色和和脱脱色色均均较较困困难难,当当用用弱弱碱碱性性染染料料(孔孔雀雀绿绿)在在加加热热的的情情况况下下进进行行染染色色时时,使使染染料料不不仅仅进进入入菌菌体体也也可可进进入入芽芽孢孢内内,进进入入菌菌体体的的染染料料经经水水洗洗后后被被脱脱色色,当当用用对对比比度度大大的的复复染染色色剂剂(蕃蕃红红液液)染染色色后后,芽芽孢孢仍仍保保留留初初染染剂剂的的颜颜色色,是是芽芽孢孢和菌体更易区分。
菌体呈红色而芽孢呈绿色。
和菌体更易区分。
制片制片染色染色(孔雀绿(孔雀绿5min)水洗水洗复染复染(蕃红花红(蕃红花红2-3min)水洗水洗干燥干燥镜检镜检11、芽孢染色、芽孢染色(四)实验方法:
四)实验方法:
切勿煮干切勿煮干芽孢染色结果芽孢染色结果(芽孢呈绿色,营养体及芽孢囊呈红色)(芽孢呈绿色,营养体及芽孢囊呈红色)1、供供芽芽孢孢染染色色用用的的菌菌种种应应控控制制菌菌龄龄,使使大大部部分芽孢仍保留在菌体上为宜。
分芽孢仍保留在菌体上为宜。
2、染染色色加加热热过过程程要要及及时时补补充充染染液液,切切勿勿让让涂涂片干涸。
片干涸。
3、荚荚膜膜染染色色涂涂片片不不要要用用加加热热固固定定,以以免免荚荚膜膜皱缩变形。
皱缩变形。
4、涂涂片片不不要要用用力力过过猛猛,不不要要滴滴加加水水,以以防防破破坏其荚膜原形。
坏其荚膜原形。
(五)注意事项(五)注意事项(六)实验作业(六)实验作业1绘出表示绘出表示芽孢杆菌芽孢杆菌的形态特征,注意芽的形态特征,注意芽孢的形状、着生位置及芽孢囊的形态特征。
孢的形状、着生位置及芽孢囊的形态特征。
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- 微生物 染色