三重四极杆质谱法Word格式.docx
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7样品4
8分析步骤4
9结果计算与表示6
10精密度和准确度7
11质量保证和质量控制8
12废物处理9
附录A(规范性附录)方法的检出限和测定下限10
附录B(资料性附录)液相色谱参考条件11
附录C(资料性附录)质谱参考条件12
附录D(资料性附录)标准物质、替代物及内标物质MRM谱图13
附录E(资料性附录)方法的精密度和准确度17
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准附录A为规范性附录,附录B、附录C、附录D、附录E为资料性附录。
本标准由山东省环保标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:
山东省环境监测中心站。
本标准验证单位:
济南市环境监测中心站、泰安市环境保护监测站、山东省分析测试中心、山东省产品质量检验研究院、青岛谱尼测试有限公司、青岛市华测检测技术有限公司。
本标准主要起草人:
郭文建、张慧、朱晨、王桂勋、岳太星、李红莉、丁波涛。
本标准为首次发布。
本标准由山东省环境保护厅提出并负责解释。
水质磺胺类、喹诺酮类和大环内酯类抗生素的测定
液相色谱-三重四极杆质谱法
警告:
实验中使用的溶剂和试剂均具有一定的毒性,对健康具有潜在的危害,应尽量避免与这些化学品的直接接触。
样品制备过程应在通风橱中进行,操作时应按规定要求佩戴防护器具;
所用试剂及分析后的样品需回收并进行安全处理。
1适用范围
本标准规定了测定水中12种磺胺类、喹诺酮类、大环内酯类抗生素的液相色谱-三重四级杆质谱法。
本标准适用于地表水、地下水和废水中磺胺间甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲嘧啶;
诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、氟罗沙星;
脱水红霉素、罗红霉素、螺旋霉素的定性和定量检测。
当富集水样体积为500ml,浓缩后定容体积为1.0ml,进样体积为20μl时,固相萃取的方法检出限范围为0.7ng/L~6.9ng/L,测定下限范围为2.8ng/L~27.6ng/L,详见附录A。
2规范性引用文件
本标准内容引用了下列文件或其中的条款。
凡是不注日期的引用文件,其有效版本适用于本标准。
HJ/T91地表水和污水监测技术规范
HJ/T164地下水环境监测技术规范
3方法原理
水样调节pH为2.0~4.0左右,经滤膜过滤除去颗粒物,水样中的抗生素类化合物经固相萃取柱富集净化,采用液相色谱-三重四极杆质谱法分离检测。
采用电喷雾正离子模式电离,多反应监测(MRM)方式,根据目标化合物的保留时间和特征离子峰定性,内标法定量。
4干扰与消除
在本方法规定的条件下,为防止金属离子与抗生素结合形成络合物,干扰固相萃取过程,降低此类化合物的提取效率。
可向水样中加入乙二胺四乙酸四钠,抑制金属离子的干扰。
水中余氯等其他具有氧化性的有机物会干扰磺胺类抗生素的测定,可向水中(按0.5L计)加入150mg抗坏血酸去除干扰。
5试剂和材料
除非另有说明,分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂,实验用水为新制备的不含目标化合物的纯水。
5.1盐酸:
(HCl)=1.189g/ml,分析纯。
5.2硫酸:
(H2SO4)=1.84g/m,分析纯。
5.3乙腈(CH3CN),色谱纯。
5.4甲醇(CH3OH),色谱纯。
5.5甲酸(HCOOH):
色谱纯。
5.6乙二胺四乙酸四钠(Na4EDTA),分析纯。
5.7抗坏血酸(C6H8O6)。
5.8盐酸溶液:
量取50ml盐酸(5.1),缓慢加入到纯水中,待温度降至室温后,用纯水定容到100ml。
5.9硫酸溶液:
c(H2SO4)=4.0mol/L。
量取22ml硫酸(5.2),缓慢加入到纯水中,待温度降至室温后,用纯水定容到100ml。
5.10pH=2.0去离子水:
用盐酸(5.8)溶液调节去离子水至pH=2.0。
5.110.1%甲酸去离子水溶液:
量取0.5ml甲酸(5.5),缓慢加入到纯水中,待温度降至室温后,用纯水定容到500ml。
5.12甲醇/乙腈混合溶液:
1+1。
5.130.1%甲酸甲醇/乙腈混合溶液:
量取0.5ml甲酸(5.5),缓慢加入到甲醇/乙腈混合溶液(5.12)中,用甲醇/乙腈混合溶液定容到500ml。
5.14稀释溶剂:
0.1%的甲酸去离子水溶液(5.11)/0.1%甲酸甲醇/乙腈混合溶液(5.13),3+1。
5.15抗生素标准贮备液:
ρ=100mg/L(参考浓度)
可直接购买有证标准溶液,也可用标准物质(纯度≥95%)制备。
贮备液在0℃-4℃避光保存或参照制造商的产品说明。
使用时应恢复至室温,并摇匀。
使用标准物质制备标准贮备液的参考方法:
准确称取10.0mg抗生素类化合物标准物质,溶于100ml甲醇(5.4)中,最终浓度为100mg/L。
脱水红霉素可直接购买标准物质(纯度≥95%)或者由红霉素制备,推荐的制备方法为:
量取400μl100mg/L红霉素贮备液于20ml棕色瓶中,加入19.6ml甲醇(5.4),然后加入约10μl硫酸溶液(5.9)调pH至酸性,室温静置4h后完成转化过程,可于-10℃以下避光保存2个月。
5.16抗生素类化合物标准使用液:
ρ=1.0μg/ml(参考浓度)
将12种抗生素类化合物标准贮备液(5.15)按需要用甲醇(5.4)稀释。
标准使用液于-10摄氏度以下避光保存,保质期2个月。
5.17内标贮备液:
ρ=200μg/ml(参考浓度)
内标物为13C3Atrazine(阿特拉津)。
内标可直接购买有证标准溶液,也可用标准物质(纯度≥99%)制备。
贮备液应在-10℃以下避光保存或参照制造商的产品说明。
5.18替代物贮备液:
喹诺酮类回收率替代物为环丙沙星-d8、磺胺类回收率替代物为磺胺二甲氧嘧啶-d6、大环内酯类替代物为脱水红霉素-d6。
替代物可直接购买有证标准溶液,也可用标准物质(纯度≥95%)制备。
5.19内标使用液:
2.0μg/ml(参考浓度)
将内标贮备液(5.17)按需要用甲醇(5.4)稀释。
内标使用液于冷冻保存,保质期1个月。
5.20替代物使用液:
将替代物贮备液(5.18)按需要用甲醇(5.4)稀释。
替代物使用液于冷冻保存,保质期1个月。
5.21固相萃取柱:
填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物(HLB)或同等柱效的萃取柱,规格为6ml/500mg。
5.22滤膜:
0.7µ
m玻璃纤维或其他材质等效滤膜。
5.23滤膜:
0.22µ
m聚四氟乙烯或其它等效滤膜。
5.24氮气:
纯度≥99.99%。
6仪器和设备
除非另有说明,分析时均使用符合国家标准的A级玻璃器皿。
6.1固相萃取装置:
自动或手动,流速可调节。
6.2浓缩装置:
自动氮吹浓缩仪或K-D浓缩器等性能相当的设备。
6.3液相色谱/串联质谱仪:
配有电喷雾离子化源(ESI)。
6.4色谱柱:
C18或等效反相高效液相色谱柱,参考规格为:
50mm(长度)×
4.6mm(内径),1.8µ
m(填料内径)。
6.5样品瓶:
1000ml带聚四氟乙烯内衬垫瓶盖的棕色玻璃瓶。
6.6微量注射器:
10μl、20μl、50μl、100μl、250μl。
6.7一般实验室常用仪器和设备。
7样品
7.1样品的采集
参照HJ/T91和HJ/T164的相关规定采集样品。
用预先洗涤干净并干燥的磨口棕色玻璃瓶采集水样,样品采集时应充满样品瓶(6.5),不留空隙。
7.2样品保存
水样于现场立即添加盐酸溶液(5.8)调节样品pH为2.0~4.0左右,并加入150mg抗坏血酸(5.7)及0.25gEDTA(5.6),在0℃~4℃冷藏避光保存,7天内分析完毕。
7.3试样制备
7.3.1样品预处理
样品采用固相萃取法富集前,水样采用孔径为0.7μm的玻璃纤维膜(5.22)过滤。
7.3.2固相萃取法
分别用5ml甲醇(5.4)、5ml去离子水、5mlpH=2.0去离子水(5.10)活化固相萃取柱(5.21),保证小柱柱头浸润。
量取500ml水样,加入25.0μl替代物使用液(5.20),采用盐酸溶液(5.8)调节水样pH为2.0~4.0左右,水样以10~15ml/min的流速通过小柱。
用去离子水淋洗小柱,去除小柱上的EDTA。
之后用氮气(5.24)吹扫、干燥小柱。
再用10ml甲醇(5.4)以5ml/min的流速洗脱小柱,洗脱液接收于收集管中。
洗脱液经氮吹(5.24,注意保持液面微微波动)浓缩至0.5ml左右,加入内标使用液(5.19)25μl,用稀释溶剂(5.14)定容到1.0ml,过0.22μm有机滤膜后待测。
7.4空白试样制备
7.4.1以实验用水代替样品,按照水样处理(7.3)相同操作步骤,制备固相萃取法空白试样。
8分析步骤
8.1仪器参考条件
8.1.1液相色谱参考条件
流动相:
0.1%甲酸甲醇/乙腈混合溶液(5.13,A相),0.1%甲酸去离子水溶液(5.11,B相)。
梯度洗脱程序见附录B。
流速:
0.3ml/min。
柱温:
40℃。
进样体积:
20μl。
8.1.2质谱参考条件
离子源:
电喷雾离子源(ESI),正离子模式。
毛细管电压:
4000V,干燥气体温度:
350℃,雾化器压力:
35psi
干燥气体流速:
10L/min。
多离子反应监测方式(MRM),具体条件参见附录C。
对于不同质谱仪器,参数可能存在差异,测定前应将质谱参数优化到最佳。
8.1.3仪器调谐
按照仪器使用说明书在规定时间和频次内对液相色谱/串联质谱仪进行仪器质量轴和分辨率调谐校正,以确保仪器处于最佳测试状态。
在仪器使用过程中,如发现仪器质量数出现明显偏差或灵敏度大幅度下降时,应立即重新对仪器进行质量轴和分辨率调谐。
8.2校准
8.2.1校准曲线的绘制
取一定量抗生素类化合物标准使用液(5.16)、内标物(5.19)及替代物使用液(5.20)于2ml进样小瓶中,制备不含原点的标准系列(至少5个浓度点),使抗生素类化合物及替代物的质量浓度分别为2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L和200μg/L(参考浓度),内标的质量浓度为50μg/L(参考浓度)。
由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进样,以标准系列溶液中目标组分的浓度为横坐标,以其对应的峰面积(或峰高)与内标物峰面积(或峰高)的比值和内标物浓度的乘积为纵
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- 三重 四极杆质谱法