培养基的制备实验总结Word下载.docx
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基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素,而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂,琼脂在常用浓度下96℃时溶化,实际应用时,一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌,因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:
牛肉膏3.0g
蛋白胨10.0g
NaCl5.0g
水1000ml
pH7.4—7.6
实验仪器与药品
1.溶液或试剂:
牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/LNaOH、1mol/LHCl。
2.仪器或其他用具:
试管、三角瓶、1000ml烧杯(或1000ml刻度搪瓷杯)、量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(pH5.5-9.0)、普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。
实验步骤
(一)牛肉膏蛋白胨培养基的制备
1.称量(假定配制1000ml培养基)
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯(或1000ml刻度搪瓷杯)中.牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上,称量后直接放人水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。
2.溶化
在上述烧杯中先加入少于所需要的水量(如约700ml),用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解,将药品完全溶解后,补充水到所需的总体积(1000ml);
如果配制固体培养基时,将称好的琼脂放人已溶的药品中,再加热溶化,最后补足所损失的水分。
3.调pH
在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH,如果偏酸.用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其PH,直至pH达7.4-7.6。
反之,用1mol/LHCl进行调节。
4.过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利某些实验结果的观察。
可以省去(本实验勿需过滤)。
5.分装
液体分装
分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
分装三角瓶的虽则根据需要而定,一般以不超过三角瓶容积的一半为宜,如果是用于振荡培养用,则根据通气量的要求酌情减少;
有的液体培养基在灭菌后,需要补加一定量的其他无菌成分,如抗生素等,则装量一定要准确。
固体分装
分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面。
分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
半固体分装
一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
6.加塞
培养基分装完毕后,在试管口或三角瓶口上塞上棉塞(或硅胶塞、金属或高温塑料试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内面造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。
7.包扎
加塞后,将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、配制日期。
8.灭菌
将上述培养基以0.103MPa,l21℃,20min高压蒸气灭菌。
9.摆斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜
l0.无菌检查
将灭菌培养基放入37℃的恒温箱中培养24-48h.以捡查灭菌是否彻底。
注意事项
1.蛋白胨很容易吸湿,在称取时动作要迅速,另外,称量时严防药品混杂.一把牛角匙用于一种药品.或称取一种药品后,洗净——擦干——再称职另一药品——瓶盖也不要盖错。
2.在琼脂溶化过程中.应控制火力,以免培养基因沸腾而溢出容器。
同时,需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦,制培养基时,不可用铜或铁锅加热溶化,以免离子进入培养基中,影响细菌生长。
3.对于有些要求PH较精确的微生物,其PH的调节可用酸度计进行(使用方法、可参考有关说明书)。
pH不要调过头,以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。
配制pH低的琼脂培养基时.若预先记好PH并在高压蒸汽下灭菌,则琼脂因水解不能凝固。
因此,应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合,或在中性pH条件下灭菌,再调整pH。
4.分装过程中,注意不要使培养基沾在管(瓶)口上,以免沾污面塞而引起污染。
(二)高压蒸汽灭菌法步骤
1.加水
使用前在锅内加入适量的水,加水不可过少,以防将灭菌锅烧干,引起炸裂事故。
加水过多有可能引起灭菌物积水。
水面与三角架相平为宜
2.装料
将灭菌物品放在灭菌桶中,不要装得过满。
3.加盖
盖好锅盖,按对称方法旋紧四周固定螺旋,打开排气阀。
4.加热排气
加热后水蒸气与空气一起从排气孔排出,待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时,排出的气流很强并有嘘声时,维持2—3min以排除冷空气。
如灭菌物品较大或不易透气,应适当延长排气时间,务必使空气充分排除,然后将排气阀关闭。
5.加压
将排气阀关闭
6.保压
当压力升至0.1MPa时,温度达121℃,此时应注意观察,控制热源。
保持压力稳定,维持20-30min后,切断热源。
7.自然降压
当压力表降至“0”处,稍停,使温度继续降至100℃以下后,打开排气阀,旋开固定螺旋,开盖,取出灭菌物。
注意:
切勿在锅内压力尚在“0”点以上,温度也在100℃以上时开启排气阀,否则会因压力骤然降低,而造成培养基剧烈沸腾冲出管口或瓶口,污染棉塞,以后培养时引起杂菌污染。
压力降到“0”时,方可打开排气阀。
8.保养
灭菌完毕取出物品后,将锅内余水倒出,以保持内壁及内胆干燥,盖好锅盖。
9.培养基无菌检查五、关键步骤及注意事项
1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧,注意温度的时间控制,70oC以下放物、取物。
4.高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物。
5.过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快,滤膜要注意清洗保存。
陕西师范大学远程教育学院
生物学实验报告
报告题目《培养基的制备与消毒灭菌》
姓名学号
专业
批次/层次
指导教师学习中心实验报告
篇二:
培养基的制备与灭菌实验报告(详细)
一、实验题目:
培养基的制备与灭菌
二、实验目的:
1、明确培养基的配置原则,掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理,学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材:
1、药品:
牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器:
三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理:
1、培养基的制备
包括一下几种成分:
(1)水分:
主要成分。
(2)N源:
包括无机氮和有机氮。
(3)C源:
主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
(4)无机盐:
如NaCl、KH2PO4等。
微量元素:
Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”,通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则
根据不同的培养对象及培养目的,选用不同的培养基,但有机物总量不得超过15%,盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类:
按成分:
天然培养基、合成培养基、半合成培养基
按状态:
固体培养基、半固体培养基、液体培养基
按用途:
基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基
培养基配好后应立即灭菌,防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌:
用理化手段杀灭一切微生物的营养体,包括芽孢和孢子,在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
(1)高压蒸汽灭菌:
将物品放入封闭的加压灭菌器,加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽,将冷空气排尽,压力上升,使水沸点变高,导致菌体蛋白质变性,一般0.1MPa、121℃、15~30min可以彻底灭菌,本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基,110℃、30min。
(2)干热灭菌:
微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温,所以含水量小,不利于蛋白质受热变性,所以温度高,时间长。
(3)紫外灭菌:
诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
(4)过滤除菌:
实验室中用微孔滤膜(孔径一般为0.22μm)。
除病菌需更小。
五、实验步骤:
1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备
依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯,加入100mL水,用玻璃棒搅匀溶解,移入三角瓶,并加入1.5g琼脂。
加上棉塞,迅速拔出能发出清脆声响即可,用报纸包住并系好麻绳。
2、包移液管和培养皿
(1)包一包培养皿(一包五个):
用手压紧、塞好,折出棱角,包好后摇晃没有培养皿相互碰撞的声音即可。
(2)包2支移液管:
用棉花塞好移液管尾部,露出1~2cm即可。
取长条报纸,一端折
90°
角,紧密严实沿30°
角卷好移液管,尾部叠好防止散开。
3、高压蒸汽灭菌
(1)灭菌前要先看水位是否合适。
(2)将包好的待灭菌物品放入内层锅,不要装得太挤,棉塞不应染上培养基。
(3)加盖,两两对称旋紧螺栓。
(4)设定条件:
0.1MPa、121℃、20min,进行加热。
(5)先打开排气阀,待空气排尽后,关上排气阀。
(6)结束后,自然降温,压力降为0后,打开排气阀取出物品。
4、干热灭菌
(1)将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内,关好门箱。
(2)设定条件:
160~170℃,恒温2h。
(3)结束后,切断电源,自然降温,降到70℃以下后开箱取物。
六、思考题:
1、你配制的是什么培养基?
选择培养基。
2、选择培养基与鉴别培养基的区别?
这两种
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- 培养基 制备 实验 总结