细胞样品收集注意事项_精品文档.doc
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细胞样品收集方法
一、蛋白
以T75培养瓶为例
1.把培养上清彻底转移至50或15ml离心管中,用PBS洗涤1-2次(PBS需彻底吸干,洗液时把板倾斜),每次洗涤时,均需把PBS转移到同一个50或15ml离心管,每培养瓶细胞准备一个离心管,切勿混淆;
2.每培养瓶加入300ulRIPA裂解液(加入裂解液时,一定用放平,是细胞与裂解液充分接触),把上述离心管离心(水平转角离心机,1000RPM,8min),彻底移除上清,加入300ulRIPA裂解液,吹打12下后,把裂解液转移至同一培养瓶中,则培养瓶中合并有200ul,盖好盖子,用封口膜封口后置于-80℃保存;注意做好标记!
(如果用PBS洗涤后,细胞未飘起,则把600ulRIPA裂解液直接加入培养瓶)
备注:
给你提供的RIPA裂解液用EP管装,每管990ul,同时提供PMSF,使用时每管加入10ulPMSF,混匀再使用。
操作要快,做好一瓶,放好一瓶!
强烈建议一瓶一瓶的做。
表一
培养器皿
RIPA裂解液用量
备注
6孔板
150-300ul
根据细胞的密度适当调整用量,Trizol的最少用量为1ml
35mm培养皿
150-300ul
根据细胞的密度适当调整用量,Trizol的最少用量为1ml
60mm培养皿
300-600ul
根据细胞的密度适当调整用量,Trizol的最少用量为1ml
100mm培养皿
600-1200ul
根据细胞的密度适当调整用量,Trizol的最少用量为1ml
T25培养瓶
300-600ul
根据细胞的密度适当调整用量,Trizol的最少用量为1ml
T75培养瓶
600-1000ul
根据细胞的密度适当调整用量,Trizol的最少用量为1ml
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