PBS缓冲液的配方Word文档格式.docx
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0.1MPB(PH=7.4):
取500ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。
0.01MPB(PH=7.4):
取50ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。
0.02MPB(PH=7.4):
取100ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。
若需要NaCL的话,加入NaCL至0.9%(g/100ml)即可。
另:
其它各种另PH值的0.2MPB(100ml)配方:
pH0.2MNaH2PO4(ml)0.2MNa2HPO4(ml)
5.793.56.5
5.8928
5.99010
6.087.712.3
6.18515
6.281.518.5
6.377.522.5
6.473.526.5
6.568.531.5
6.662.537.5
6.756.543.5
6.85149
6.94555
7.03862
7.13367
7.22872
7.32377
7.419ml81ml
7.51684
7.61387
7.710.50.5
7.88.591.5
7.9793
8.05.394.7
分子生物学常用溶液配制
2008-8-25热门指数:
3471
一、分子生物学常用贮存液的配制
1.30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】将29g丙烯酰胺和1gN,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。
加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。
用滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。
【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。
称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2.40%丙烯酰胺
【配制方法】把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20gN,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。
继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3.放线菌素D溶液
【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml100%乙醇中,1:
10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值。
放线菌素D(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。
【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。
只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液
【配制方法】在0.8ml水中溶解60mgATP,用0.1mol/LNaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃
5.10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。
6.10%过硫酸铵溶液
【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。
7.BCIP溶液
【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃
8.2×
BES缓冲盐溶液
【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6gNaCl和0.027gNa2HPO4,室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。
9.1mol/LCaCl2溶液
【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54gCaCl2?
6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。
10.2.5mol/LCaCl2溶液
【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2?
6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液
【配制方法】用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液
【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/lTris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃。
碱基波长(nm)消化系数(ε)[L/(mol?
cm)]
A2591.54×
104
G2531.37×
C2719.10×
103
T2607.40×
比色杯光径为1cm时,吸光度=εM
13.0.5mol/lEDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na?
2H2O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节溶液的pH值至8.0(约需20gNaOH颗粒)然后定容至1L,分装后高压灭菌备用。
【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。
14.溴化乙锭(10mg/ml溶液)
【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。
【注意】小心:
溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。
15.2×
HEPES缓冲盐溶液
【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2PO4?
2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/lNaOH调节pH值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml。
用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20℃。
16.IPTG溶液
【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3),在8ml蒸馏水中溶解2gIPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
17.1mol/L乙酸镁溶液
【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1L过滤除菌。
18.1mol/LMgCl2溶液
【配制方法】在800ml水中溶解203.4gMgCl2?
6H2O,用水定容至1L,分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】MgCl2极易潮解,应选购小瓶(如100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放。
19.β-巯基乙醇(BME)溶液
【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液,应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20.NBT溶液
【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。
21.酚/氯仿溶液
【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris?
HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/lTris?
HCl(pH=7.6)液层,保存于4℃。
【注意】酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。
所有操作均应在化学通风橱中进行。
与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液
【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L),分装成小份贮存于-20℃。
如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液(100mmol/L)。
【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。
一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。
凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。
应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。
PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。
pH值为8.0时,20μmmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节为碱性(pH>
8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。
23.磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×
105Pa)高压下蒸气灭菌20min。
保存于室温。
24.1mol/L乙酸钾(pH=7.5)溶液
【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中,用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L,保存于-20℃。
25.乙酸钾溶液(用于碱裂解)
【配制方法】在60ml5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26.3mol/L乙酸钠(pH5.2和pH7.0)溶液
【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠,用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0,加水定容到1L,分装后高压灭菌。
27.5mol/LNaCl溶液
【配制方法】在800ml水中溶解292.2gNaCl加水定容至1L,分装后高压灭菌。
28.10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液
【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS,加热至68℃助溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分装备用。
【注意】SDS的
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