苦参生物碱的提取实验报告Word格式文档下载.docx
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③洗脱并回流提取苦参总碱。
(2)分别用柱层析法和溶解度差异法分离氧化苦参碱。
三、实验时间
步骤所需时间/h
渗漉2
离子交换2
回流5
柱层析(或溶解度差异法)
2.5
鉴定0.5
四、实验原理
1.提取与分离方法
利用苦参生物碱具有弱碱性,可与强酸结合成易溶于水的盐的性质,将总碱从药材中提取出来。
结合动态连接提取工艺过程,实现生物碱充分溶出。
然后,加碱碱化,即可得到苦参生物总碱。
以苦参碱为例:
2.工艺流程
五、实验材料与设备
1.实验设备与仪器
层析柱,渗漉桶,烧杯,布氏漏斗,医用搪瓷盘,恒温水浴箱,层析槽,索氏提取器,研钵。
2.实验材料与试剂
苦参,强酸性阳离子树脂,层析用氧化铝,三氯甲烷,甲醇,浓氨水,乙醚,碘化铋钾,盐酸,氢氧化钠。
碘-碘化钾试剂,碘化汞钾试剂,碘化铋钾试剂,硅钨酸试剂。
六、实验步骤
1.反应提取步骤
(1)动态连续提取
①取苦参粗粉200g加一定浓度的盐酸,拌匀,放置30min,使生药膨胀。
②然后装入渗漉桶中,边加边压,层层加紧,全部装完后,药面压平,盖一层滤纸,滤纸上压一些洗净的玻璃塞。
③加入一定浓度的hcl溶液经过药面,以4~5mL/min的速度渗漉,收集渗漉液至无明显的生物碱反应为止,收集渗漉液约2500mL。
(2)交换
①将收集的渗漉液置于阳离子交换树脂进行交换,如交换液有为交换的生物碱时,仍可以继续交换,直至流出液无生物碱反应为止。
②将树脂倾入烧杯中,用蒸馏水洗涤数次,除去杂质,于布氏漏斗中抽干,倒入唐磁盘中晾干。
(3)总生物碱的洗脱
①将晾干的树脂,加浓氨水适量,搅匀,使湿润度适宜,树脂充分膨胀,盖好放置20min。
②装入索氏提取器中,加三氯甲烷300mL在水浴上回流洗脱,提至尽生物碱为止。
③回收三氯甲烷,得棕色粘稠物。
④加无水丙酮适量,加热溶解,过滤,减压蒸干。
必要时重复此操作,以脱除粗生物碱中的水,再在无水丙酮中重结晶。
2.氧化苦参的分离
(1)柱色谱法取100目色谱用氧化铝50g,用漏斗缓慢加入色谱柱内(1cm×
24cm,干法装柱),取苦参0.2g,加入适量氧化铝,搅匀,研细,装入色谱柱顶端,先用50ml三氯甲烷通过色谱柱,再用三氯甲烷-甲醇(9:
1)洗脱,流速
为1mL/min。
每10mL为一份(约收集15份),经薄层层色谱鉴定,相同流出成分合并,在水浴上挥发去溶剂,剩余物加无水丙酮溶解,放置,析出结晶为氧化苦参碱。
(2)溶解度差异法将苦参总碱溶于少量三氯甲烷中,加入10倍量乙醚,放置后有沉淀析出,过滤吸出的沉淀,滤液浓缩后再溶于少量三氯甲烷中,加入乙醚放置,再过滤析出沉淀,合并两次的沉淀物,用丙酮重结晶,即为氧化苦参碱。
(3)实验要求上述本工艺实验的操作步骤为典型实例,实验过程要求改变盐酸浓度以及渗漉速度,其余条件不变,在进行本实验时有两组同学做同一组浓度,但渗漉速度不同,以此比较不同盐酸浓度、不同渗漉速度下的提取率差异。
3.薄层色谱鉴定
样品:
苦参总碱、氧化苦参碱、苦参碱标准品、氧化苦参碱标准品
(1)吸附剂:
硅胶g;
展开剂:
三氯甲烷-甲醇-浓氨水(5:
0.6:
0.2);
(2)吸附剂:
氧化铝;
三氯甲烷-甲醇-乙醚(44:
3);
(3)显色剂:
改良碘化铋钾。
4.沉淀试验
取苦参总碱少许溶于稀盐酸中,分置4个小试管中,分别滴加下列试剂1~2滴,观察现象:
碘-碘化钾试剂碘化汞钾试剂碘化铋钾试剂硅钨酸试剂
七、注意事项
(1)浓盐酸、氨水均具有刺激性,使用时注意通风。
(2)丙酮、三氯甲烷、甲醇、无水乙醇和乙醚均为易燃品,注意防火安全。
(3)在将药材装柱时,不要将药材塞得过紧或过松。
过紧,渗漉速度太慢;
过松,渗漉速度太快,达不到渗漉效果。
八、实验报告内容
2、在收集渗漉液的过程中,溶液的颜色有何变化?
在回流提取中,有何现象发生?
答:
渗滤液的颜色刚开始为深棕黄色,随着渗漉时间的增加颜色慢慢变浅在回流过程中,树脂颜色慢慢变浅,溶液颜色逐渐加深。
3、.薄层色谱的结果如何?
因为所用盐酸浓度太低才2%,所能提取到的样品太少了,所以层析跑出来是没有东西的。
4、.实验报告除了完成单组实验内容和结果讨论外,还必须结合所有实验结果绘制出产品收率与盐酸浓度的关系曲线,并进行工艺分析讨论。
因为前几组用的盐酸浓度都很低,没有结果,所以产品收率与盐酸浓度的关系曲线没办法绘制。
由此实验可见,盐酸的浓度对苦参提取的影响之大。
九、参考文献
1肖崇厚主编·
中药化学·
上海:
上海科技出版社,1997
2杨其蕴主编·
天然药物化学·
中国医药出版社,1995
3章育中等·
苦参及其制剂中生物碱的薄层分离和含量测定·
药学学报·
1981,16(4):
274~276
九、思考题
1干法装柱与湿法装柱有何区别?
湿法装柱
先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压用淋洗剂“走柱子”,本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。
干法装柱
直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧,至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结
篇二:
实验三苦参生物碱的提取与鉴识
实验三苦参生物碱的提取与鉴识
背景
1.1苦参的化学成分
苦参,又名苦骨(见《本草纲目》川)、川参(见《贵州民间方药集》、凤凰爪(见翌广西中兽医药植))、牛参(见《湖南药物志》),陶宏景谓:
“叶极似槐叶,花黄色,子作荚,根味至苦恶。
”李时珍谓:
“苦以味名,参以功名。
”lz]始载于((神农本草经》,列为中品。
为豆科(Leg姗zn口sae)植物苦参(£叩加rafla。
escensAzt.)的干燥根。
分布于我国南北各地Is],春秋两季采挖,除去根头及小支根,洗净,干燥、或趁鲜切片,干燥。
苦参性味苦寒,归心、肝、胃、大肠、膀肤经。
功能清热燥湿、祛风杀虫、利尿通淋。
用于热痢、便血、黄疽尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤癌痒、疥癣麻风等诸多病症。
苦参中含有多种有效成分,目前已知的主要有生物碱类、黄酮类、挥发油类化合物,还含有少量醒类、皂试类及氨基酸等其它化合物。
下面分别介绍各类化合物的主要成分。
1.LI生物碱
国内外学者从苦参根、苦参茎和叶及其花【4一l0]中共分离出26种生物碱。
苦参生物碱大多数是哇诺里西咤类(quinolizidine一type),极少数为双呱陡类(dipiperidine--type)。
喳诺里西陡生物碱多数为苦参碱型生物碱,另有两种金雀花碱型(eytisine一type)生物碱,两种无叶豆碱型(sparteine一type)生物碱,一种羽扇豆碱型(lupinine一type)生物碱。
包括苦参碱(matrine),氧化苦参碱(oxymatrine),槐果碱(sophoearpine)、氧化槐果碱(n一oxysophoearpine)、异槐果碱(isosoph。
carpine)、异苦参碱(isomatrine)、7,11一去氢苦参碱(7,11一dehydromatrine)、槐胺碱(sophoramine)、异槐胺碱(isosophoramine)、新槐胺碱(neosophoramine)、■3一去氢槐胺碱(■`3一dehydrosophoramine)、■`一去氢槐胺碱(■7-dehydrosophoramine)、槐醇(sophoranol),9。
一经基槐胺碱(9。
一hydroxysophoramine)、5。
9。
一二轻基苦参碱(5。
ga一dehydroxymatrine)、氧化槐醇(sophoranoln一oxide)、雀花碱(lupanine)、臭豆碱(anagyrine)、膺靛叶碱(baptifoline)、mamanine,Kuraramine、1sokuraramine等。
1.1.2黄酮类化合物
从苦参根和狭叶苦参根分离的黄酮类化合物己有29种[ll,2],多数为二氢黄酮和二氢黄酮醇类,少数为黄酮类、异黄酮类、查耳酮类和紫檀素类,其中仅有两种化合物为试,取代基除了常见的轻基、甲氧基外,多数化合物还具有异戊烯基(取代基A
1.1.3挥发油成分
王秀坤等!
`4】对苦参中的挥发油成分进行了分析,采用苦参粗粉与水共蒸馏,乙醚处理,无水硫酸钠脱水干燥,回收乙醚得油状物,再经气相色谱、质谱分析,共鉴定出47个成分。
鉴定出的化合物以二十烷烃为主成分,占58.12%。
就结构类型看,以烯烃为主,其次为烷烃和醇类,尚含酸醛酮酚等。
1.1.4其它类型的化合物
从苦参根中还分离得到一系列2一烷基色酮的衍生物I`5]、一种醒类化合物和两种三砧皂试l`6】。
王秀坤等llvl对苦参中的游离氨基酸成分进行了分析与鉴定,鉴定出巧种氨基酸,并计算了各成分的含量。
发现苦参中总游离氨基酸含量为162.51mg/l00ml,其中含量最高的为脯氨酸,107.51mg/l00ml,其次为天冬氨酸29.64mg/100ml。
张俊华等I`s]用色谱等方法分离,波谱等方法鉴定苦参中化学成分结构,分离得到5个化合物,分别为蔗糖、二十四碳酸、日一谷肖醇、芥子酸十六酷,伞形花内酷,均为首次从苦参中获得,其中芥子酸十六酷为新化合物。
一.实验目的
1.本实验通过从苦参中提取苦参生物碱,考察盐酸的浓度和渗漉速度对提取产率的影响
2.了解化学反应萃取分离在天然药物提取过程中的应用
二.实验原理
渗滚法(percolation)的提取过程类似多次浸取过程,浸出液可以达到较高浓度,浸出效较好。
此法常温操作不需加热,溶剂用量少,过滤要求较低,使分离操作过程简化,尤其适用于热敏性、易挥发且有效成分含量较低或贵重药材提取。
采用0.5%的硫酸溶液对中药材黄连用渗辘法提取,收集7倍量渗媲液即可保证生物碱的提取率,与回流法比较,渗辘法提取物含杂质少、提取率高、使用溶剂量少即l。
渗渡法的操作技术要求较高,否则会影响提取效率,当提取物为薪性、不易流动的成分时,不宜使用该法。
三.实验流程
鉴识:
定性反应.薄层色谱等
四.实验过程
1.离子交换树脂的预处理
将7
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