三聚氰胺的性质及检测方法Word下载.docx
- 文档编号:15119560
- 上传时间:2022-10-27
- 格式:DOCX
- 页数:32
- 大小:727.50KB
三聚氰胺的性质及检测方法Word下载.docx
《三聚氰胺的性质及检测方法Word下载.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《三聚氰胺的性质及检测方法Word下载.docx(32页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
水中溶解度(20℃):
0.33g
2三聚氰胺的毒性
动物长期摄入三聚氰胺会造成生殖、泌尿系统的损害,膀胱、肾部出现结石,并可进一步诱发膀胱癌对于肾脏,短期高浓度接触后会引起肾结石、急性肾衰,长期接触还会造成肾脏组织损伤。
。
三聚氰胺同系物具有三聚氰胺一样的毒性效应,很多研究都将它们作为三聚氰胺复合物(MCs)进行总体毒理学评价。
3第一法高效液相色谱法(HPLC)
3.1原理
试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取,经阳离子交换固相萃取柱净化后,用高效液相色谱测定,外标法定量。
3.2试剂与材料
除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
甲醇
乙腈
氨水
三氯乙酸
柠檬酸
辛烷磺酸钠
甲醇水溶液
三氯乙酸溶液(1%)
氨化甲醇溶液(5%)
离子对试剂缓冲液
三聚氰胺标准品
三聚氰胺标准储备液
阳离子交换固相萃取柱
定性滤纸
海砂
微孔滤膜
氮气
3.3仪器和设备
高效液相色谱(HPLC)仪
分析天平
离心机
超声波水浴
固相萃取装置
氮气吹干仪
涡旋混合器
具塞塑料离心管
研钵
3.4样品处理
3.4.1提取
3.4.1.1液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等
称取2g(精确至0.01g)试样于50mL具塞塑料离心管中,加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈,超声提取10min,再振荡提取10min后,以不低于4000r/min离心10min。
上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后,用三氯乙酸溶液定容至25mL,移取5mL滤液,加入5mL水混匀后做待净化液。
3.4.1.2奶酪、奶油和巧克力等
称取2g(精确至0.01g)试样于研钵中,加入适量海砂(试样质量的4倍~6倍)研磨成干粉状,转移至50mL具塞塑料离心管中,用15mL三氯乙酸溶液分数次清洗研钵,清洗液转入离心管中,再往离心管中加入5mL乙腈,余下操作同3.4.1.1中“超声提取10min,加入5mL水混匀后做待净化液”。
注:
若样品中脂肪含量较高,可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱净化。
3.4.2净化
将3.4.1中的待净化液转移至固相萃取柱中。
依次用3mL水和3mL甲醇洗涤,抽至近干后,用6mL氨化甲醇溶液洗脱。
整个固相萃取过程流速不超过1mL/min。
洗脱液于50℃下用氮气吹干,残留物(相当于0.4g样品)用1mL流动相定容,涡旋混合1min,过微孔滤膜后,供HPLC测定。
3.5高效液相色谱测定
3.5.1标准曲线的绘制
用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、40、80μg/mL的标准工作液,浓度由低到高进样检测,以峰面积-浓度作图,得到标准曲线回归方程。
基质匹配加标三聚氰胺的样品HPLC色谱图参见附录A中的图A1.
3.5.2定量测定
待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析。
3.5.3结果计算
试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按式
(1)计算获得:
A×
c×
V×
1000X=×
f……………………
(1)
As×
m×
1000式中:
X——试样中三聚氰胺的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);
A——样液中三聚氰胺的峰面积;
c——标准溶液中三聚氰胺的浓度,单位为微克每毫升(µ
g/mL);
V——样液最终定容体积,单位为毫升(mL);
As——标准溶液中三聚氰胺的峰面积;
m——试样的质量,单位为克(g);
f——稀释倍数。
3.6空白实验
除不称取样品外,均按上述测定条件和步骤进行。
3.7方法定量限
本方法的定量限为2mg/kg。
3.8回收率
在添加浓度2mg/kg~10mg/kg浓度范围内,回收率在80%~110%之间,相对标准偏差小于10%。
3.9允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
4第二法液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)
4.1原理
试样用三氯乙酸溶液提取,经阳离子交换固相萃取柱净化后,用液相色谱-质谱/质谱法测定和确证,外标法定量。
4.2试剂与材料
乙酸。
乙酸铵。
乙酸铵溶液(10mmol/L):
准确称取0.772g乙酸铵于1L容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,混匀后备用。
其他同3.2。
4.3仪器和设备
液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)仪:
配有电喷雾离子源(ESI)。
其他同3.3。
4.4样品处理
4.4.1提取
奶粉
称取1g(精确至0.01g)试样于50mL具塞塑料离心管中,加入8mL三氯乙酸溶液和2mL乙腈,超声提取10min,再振荡提取10min后,以不低于4000r/min离心10min。
上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后,做待净化液。
4.4.2净化
将4.4.1中的待净化液转移至固相萃取柱中。
洗脱液于50℃下用氮气吹干,残留物(相当于1g试样)用1mL流动相定容,涡旋混合1min,过微孔滤膜后,供LC-MS/MS测定。
4.5液相色谱-质谱/质谱测定
4.5.1标准曲线的绘制
取空白样品按照4.4处理。
用所得的样品溶液将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.01、0.05、0.1、0.2、0.5μg/mL的标准工作液,浓度由低到高进样检测,以定量子离子峰面积-浓度作图,得到标准曲线回归方程。
基质匹配加标三聚氰胺的样品LC-MS/MS多反应监测质量色谱图参见附录A中的图A.2。
4.5.2定量测定
4.5.3定性判定
按照上述条件测定试样和标准工作溶液,如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致(变化范围在±
2.5%之内);
样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致,相对丰度偏差不超过表1的规定,则可判断样品中存在三聚氰胺。
表1定性离子相对丰度的最大允许偏差
相对离子丰度
50%
20%至50%
10%至20%
≤10%
允许的相对偏差
±
20%
25%
30%
4.5.4结果计算
同3.5.4。
4.6空白实验
4.7方法定量限
本方法的定量限为0.01mg/kg。
4.8回收率
在添加浓度0.01mg/kg~0.5mg/kg浓度范围内,回收率在80%~110%之间,相对标准偏差小于10%。
4.9允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。
5第三法气相色谱-质谱联用法(GC-MS和GC-MS/MS)
5.1原理
试样经超声提取、固相萃取净化后,进行硅烷化衍生,衍生产物采用选择离子监测质谱扫描模式(SIM)或多反应监测质谱扫描模式(MRM),用化合物的保留时间和质谱碎片的丰度比定性,外标法定量。
5.2试剂与材料
吡啶
乙酸铅
衍生化试剂:
N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)+三甲基氯硅烷(TMCS)(99+10)。
乙酸铅溶液(22g/L)
三聚氰胺标准溶液
氩气
氦气
5.3仪器和设备
气相色谱-质谱(GC-MS)仪
气相色谱-质谱/质谱(GC-MS/MS)仪:
配有电子轰击电离离子源(EI)。
电子恒温箱。
5.4样品处理
5.4.1GC-MS法
5.4.1.1提取
称取5g(精确至0.01g)样品于50mL具塞比色管,加入25mL三氯乙酸溶液,涡漩振荡30s,再加入15mL三氯乙酸溶液,超声提取15min,加入2mL乙酸铅溶液,用三氯乙酸溶液定容至刻度。
充分混匀后,转移上层提取液约30mL至50mL离心试管,以不低于4000r/min离心10min。
上清液待净化。
5.4.1.2净化
准确移取5mL的待净化滤液至固相萃取柱中。
再用3mL水、3mL甲醇淋洗,弃淋洗液,抽近干后用3mL氨化甲醇溶液洗脱,收集洗脱液,50℃下氮气吹干。
5.4.2GC-MS/MS法
称取0.5g(精确至0.01g)试样,加入5mL甲醇水溶液,涡旋混匀2min后,超声提取15min~20min,以不低于4000r/min离心10min,取上清液200µ
L用微孔滤膜过滤,50℃下氮气吹干。
5.4.3衍生化
取上述氮气吹干残留物,加入600μL的吡啶和200μL衍生化试剂,混匀,70℃反应30min后,供GC-MS或GC-MS/MS法定量检测或确证。
5.5气相色谱-质谱测定
5.5.1标准曲线的绘制
5.5.1.1GC-MS法
准确吸取三聚氰胺标准溶液0、0.4、0.8、1.6、4、8、16mL于7个100mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。
各取1mL用氮气吹干,按照5.4.3步骤衍生化。
配制成衍生产物浓度分别为0、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2μg/mL的标准溶液。
反应液供GC-MS测定。
以标准工作溶液浓度为横坐标,定量离子
质量色谱峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线。
标准溶液的GC-MS选择离子质量色谱图参见附录A中的图A.3,三聚氰胺衍生物选择离子质谱图参见附录A中的图A.4。
5.5.1.2GC-MS/MS法
准确吸取三聚氰胺标准溶液0、0.04、0.08、0.4、0.8、4、8mL分别于7个100mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。
各取1mL用氮气吹干,按照5.4.3步骤衍生化。
配制成衍生化产物浓度分别为0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1μg/mL的标准溶液。
反应液供GC-MS/MS测定。
以标准工作溶液浓度为横坐标,定量
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 三聚 性质 检测 方法