循环中内皮祖细胞与原发性高血压的关系Word格式文档下载.docx

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血压增高是循环EPCs数量和功能改变的原因之一，循环EPCs数量和功能的改变可能还参与原发性高血压的发生和发展。

【关键词】高血压，原发性；

内皮细胞；

病理过程；

生理过程

　　Abstract：

ObjectiveTostudytherelationshipbetweencirculatingendothelialprogenitorcells（EPCs）andessentialhypertension.Methods34patientswithprimarydiagnosedasessentialhypertensionand30healthyindividualswereinvolvedinthis　cellswereisolatedbydensitygradient　werecharacterizedasadherentcellsdoublepositivestainingforDiI-acLDLuptakeandlectinbindingwithusingfluorescentmicroscope，EPCsproliferationandmigrationwereassayedbyMTTassayandmodifiedBoydenchamberassay，respectively，EPCsadhesionassaywasperformedbyreplatingcellsonfibronectin-coateddishes，thencountingtheadhesioncellswithinversemicroscope.ResultsThenumberofcirculatingEPCsinpatientswithessentialhypertensionwassignificantlyreducedincomparisontotreatmentbefore（），anelevatedEPCswereobtainedinpatientsafterthebloodpressurewas　comparedtocontrolgroup，thenumberofEPCswasstilllower（）.Inaddition，EPCsproliferative，migratoryandadhesivecapacityinpatientswithessentialhypertensionshowsenescence（）andtheyrecoveredtosomedegreeafterthepatientsbloodpressurewerecontrolled（）.ConclusionThepresentfindingssuggestedthatcirculatingEPCsbeimpairedinessentialhypertensionpatients，andcirculatingEPCsmaybeinvolvedinthemechanismofessentialhypertension.

　　Keywords：

hypertension，primary;

endothelialcell;

pathologicalprocesses;

physiologicalprocesses

　　最近研究提示［1，2］：

血管内皮祖细胞的数量和功能受损与心血管的危险因素呈负相关，尽管高血压是一个重要独立的心血管的危险因素，但原发性高血压与血管内皮祖细胞的关系尚未阐明。

本组观察初诊原发性高血压患者及其降压达标后循环内皮祖细胞数量和功能的变化，探讨循环内皮祖细胞数量和功能与原发性高血压的关系。

　　1对象与方法

　　研究对象2005年4月～2006年1月在中山大学附属第一医院门诊和住院诊疗的患者，根据2004年中国高血压防治指南初诊单纯原发性高血压患者34例，排除高脂血症、糖尿病、冠心病、脑血管病等其他合并症，经降压治疗后有29例达标，在治疗前和降压达标后1个月测定循环内皮祖细胞数量和功能。

以30例年龄相匹配的健康人为对照组。

　　方法

　　内皮祖细胞的鉴定与计数自肘前静脉采集外周血标本并置于EDTA管抗凝。

循环内皮祖细胞定义为表达CD34+的单个核细胞，且单个核细胞体外培养，荧光显微镜鉴定FITC-UEA-I和DiI-acLDL双染色阳性细胞为内皮祖细胞。

采用FIFC标记的具有高亲和力的鼠抗人CD34单克隆抗体（美国Pharmingan公司）与采集的血样本共育15min以标记CD34+细胞。

应用流式细胞仪（Elite，Beckman-Counter美国）计数CD34+细胞数目。

将单个核细胞接种在包被有纤维连接蛋白的培养板，DMEM培养基培养1周，将细胞与DiI-acLDL（10μg/ml）37℃孵育1h，以检测内皮祖细胞对DiI-acLDL的摄取。

然后用2%多聚甲醛固定10min，将FITC-UEA-I（10μg/ml）加入上述标本37℃孵育1h，激光共聚焦显微镜鉴定UEA-I和DiI-acLDL双染色阳性细胞为内皮祖细胞。

　　内皮祖细胞增殖能力试验如上述方法搜集贴壁细胞并计数。

再将等量EPCs接种到包被有人纤维连接蛋白96孔培养板，每孔加10μlMTT（5g/L），培养4h后，吸弃上清液，再加入二甲基亚砜（150μl/ml），于微量振荡器充分振荡10min，置酶标仪于波长490nm测A值。

　　内皮祖细胞迁移能力如上述方法搜集贴壁细胞并计数。

将VEGF和25μl培养液加入改良的Boyden小室的下室，将2×

104EPCs悬浮在50μl培养液注入上室，培养24h，刮去滤膜上面的未移动细胞，用甲醇固定，Giemsa染色，随机选择3个显微镜视野（×

200）计数迁移到低层的细胞。

　　内皮祖细胞粘附能力检测用%胰蛋白酶消化搜集贴壁细胞，悬浮在500μl培养液并计数，然后再将EPC接种在包被有人纤维连接蛋白的培养板在37℃培养30min，计数贴壁细胞。

　　统计学处理计量数据以x±

s表示，数据分析采用t检验和方差分析。

　　2结果

　　内皮祖细胞的鉴定与数量分离获得的单个核细胞培养7天后形成了梭形的内皮样细胞（见图1）。

用acLDL-DiI和FITC-UEA-Ⅰ对细胞染色后，通过共聚焦显微镜鉴定，UEA-Ⅰ和DiLDL双染色阳性细胞确认为正在分化的EPCs（见图2）。

并在倒置荧光显微镜下计数15个随机选择的高倍（×

200）视野EPC。

与对照组相比，原发性高血压患者循环中内皮祖细胞数量明显减少（±

vs±

，t=，）;

与治疗前相比，降压达标后原发性高血压患者内皮祖细胞数量增加，但与对照组相比，达标后原发性高血压患者内皮祖细胞数量仍然少（±

，F=，）。

　　图1A、从外周血分离出的单个核细胞在倒置显微镜下呈圆形（×

200）。

B、培养7天后，洗掉非贴壁细胞，贴壁细胞呈梭形的内皮样细胞。

　　图2A1～3为高血压患者；

B1～3为对照组正常人；

C1～3为降压达标后的高血压患者。

单个核细胞培养7天后，通过共聚焦显微镜鉴定细胞与凝集素结合和DiLDL摄取，双染色阳性细胞是正在分化的EPC，高血压组细胞较对照组明显减少，降压达标后高血压患者细胞稍增加。

　　原发性高血压患者内皮祖细胞增殖能力的改变与对照组相比，原发性高血压患者外周血EPC增殖能力明显受损（±

，t=，）；

与治疗前相比，降压达标后原发性高血压患者内皮祖细胞增殖能力有所恢复（±

　　原发性高血压患者内皮祖细胞迁移能力的改变与对照组相比，原发性高血压患者外周血EPC迁移能力明显受损（±

，t=，）；

与治疗前相比，降压达标后原发性高血压患者内皮祖细胞迁移能力有所恢复（±

　　原发性高血压患者内皮祖细胞粘附能力的改变与对照组相比，原发性高血压患者外周血EPC粘附能力明显受损（±

与治疗前相比，降压达标后原发性高血压患者内皮祖细胞粘附能力有所恢复（±

　　3讨论

　　血管内皮祖细胞是一种多能干细胞，来源造血干细胞和循环中的单个核细胞，能增殖分化成血管内皮细胞，是尚未表达成熟的血管内皮细胞表型。

内皮祖细胞不仅参与人胚胎血管生成，同时也参与出生后血管新生和内皮损伤后的修复过程。

内皮损伤后的修复过程除了原先存在的邻近成熟内皮细胞的出芽或迁移，最近的研究表明［3～5］，也可通过内皮祖细胞分化为成熟内皮细胞参与修复损伤的内皮细胞。

　　外周血内皮祖细胞数量减少和功能受损与心血管的危险因素有关，Hill等［6］研究了45例具有心血管危险因素但没有患心血管疾病患者外周血EPC数量变化，对冠心病危险因素多变量回归分析中观察到：

血胆固醇水平与EPC数量成反相关。

同时，他们也观察到EPC数量与低密度脂蛋白胆固醇水平有反向线性趋势，但未达到统计学意义，另有报道［7］冠心病患者EPC数量和低密度脂蛋白胆固醇水平呈反向线性关系，且高胆固醇血症患者迁移能力受损。

　　Imanishi等［8］的动物实验和临床研究表明，原发性高血压大鼠和脱氧皮质酮乙酸盐—盐大鼠血中EPC数量减少和功能受损，37例原发性高血压患者血中EPC数量亦减少和功能受损，同时血中EPC数量减少和功能授损和端粒酶活性下降有关。

　　本组结果提示，原发性高血压患者血中EPC数量减少和功能受损，这与Imanishi等的临床研究结果一致。

同时本组还发现，降压达标后血中EPC数量有所回升功能受损有所恢复，但与健康人相比，EPC数量减少和功能受损依然有统计学意义。

这可推测血压增高可导致循环中EPC数量减少和功能受损，单纯降压并不能完全恢复EPC的数量和功能。

血管内皮祖细胞可能参与原发性高血压发病的多个环节。

这也许可解释：

尽管目前高血压的治疗和预防有长足的进步，高血压控制率的提高并没有相应一致地减少由高血压导致的靶器官损害。

　　EPC参与原发性高血压的机理，可能与下列因素有关：

①内皮功能障碍；

②刺激血管平滑肌细胞增殖；

③促进血栓形成；

④降低NO的利用度等［9，10］。

【参考文献】

　　［1］UrbichC，Dimmeler　factorsforcoronaryarterydisease，circulatingendothelialprogenitorcells，andtheroleofH