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预处理系统是将样品先加以一系列处理,以满足检测系统对样品的各种状态的要求。
(三)分离装置
将样品各个组分加以机械分离或物理区分的装置都属分离装置。
对分离装置的要求,主要是分辨率。
(四)检测器
检测器是检测仪器的核心部分。
工作时根据样品中待检测组分的含量发出相应的信号,这种信号多数是以电参数输出的。
(五)信号处理系统
信号处理系统是信号从检测器发出到显示出来过程中的一系列中间环节。
对它的要求是确保信号不失真地传输给显示装置。
(六)补偿装置
补偿装置的作用是消除或降低客观条件或样品的状态对检测的影响,特别是样品的温度,环境的压力、温度的波动对检测结果的影响。
(七)显示装置
显示装置的功能就是把检测结果显示出来。
有模拟显示和数字显示两种。
(八)辅助装置
辅助装置是为了确保仪器测量的精度,保证操作条件而设置的附加装置。
(九)样品前处理系统
样品前处理系统的工作任务是将标本分类、离心、分装、编排、运送、存储等。
3.检验仪器的常用性能指标
(一)灵敏度:
检验仪器在稳态下输出量变化与输入量变化之比;
(二)误差;
(三)噪音;
(四)最小检测量:
指检测仪器能确切反应的最小物质含量;
(五)精确度:
是指在一定的条件下进行多次检测时,所的检测结果彼此之间的符合程度。
(六)可靠性;
(七)重复性:
在同一检测方法与条件下在一不太长时间内检测同一参数所得的分散程度。
(八)分辨率;
(九)测量范围和示值范围;
(十)线性范围:
是指输入与输出成比例的输入含量的范围。
也就是反应曲线呈直线的那一段所对应的物质含量范围;
(十一)响应时间;
(十二)频率响应范围
重复性与精密度的关系
精密度主要考察检验仪器的稳定性,重复性主要是考察方法的稳定性。
4.检验仪器的选购原则
质量原则、实用原则、价格原则、服务原则、规范原则
第二章离心机
(掌握常用的离心方法、专用离心机的临床应用)
1.离心现象
物体在离心力场中表现的沉降运动现象。
应用离心沉降进行物质的分析和分离的技术称为离心技术,实现离心技术的仪器是离心机。
2.离心机的工作原理
利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或悬浮密度的差异进行分离、浓缩和提纯生物样品的一种方法。
颗粒的沉降速度取决于离心机的转速、颗粒的质量、大小和密度。
3.常用的离心方法
根据离心原理,对不同样品的分离选择不同的离心方法。
临床实验室常用的离心方法大致可分为平衡离心法、等密度离心法、经典式沉降平衡离心法等三类。
A、平衡离心法是根据粒子大小、形状不同进行分离的方法,包括差速离心法和速率区带离心法。
1.差速离心法:
又称为分步离心法。
根据被分离物的沉降速度不同,采用不同的离心速度和时间进行分步离心。
该法主要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。
2.又称为区带离心法。
该法又分为速率区带离心法和等密度区带离心法。
该方法主要用于沉降速度差别不大的微粒,将样品放在一定惰性梯度介质中进行离心沉淀或沉降平衡,在一定离心力下把颗粒分配到梯度液中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。
B、等密度离心法(又称等比重离心法)是以粒子密度差进行分离的方法。
等密度离心法和上述速率区带离心法合称为密度梯度离心法。
C、经典式沉降平衡离心法主要用于对生物大分子分子量的测定、纯度估计、构象变化等。
4.专用离心机的临床应用
A、低速离心机:
临床实验室主要用于全血中的血浆、血清的分离及尿液、胸腹水、脑脊液等有形成分的分离。
B、高速离心机:
基础实验室对各种生物细胞、无机物溶液、悬浮液及胶体溶液的分离、浓缩和提纯等。
C、超速离心机:
主要用于科研,对样本中亚细胞器的分离,病毒、核酸、蛋白质及多糖的分离。
第三章显微镜
(显微镜的结构及性能特点)
1.光学显微镜
显微镜是由两组会聚透镜组成的光学折射成像系统。
把焦距较短、靠近观察物、成实像的透镜组称为物镜(objectlens),而焦距较长,靠近眼睛、成虚像的透镜组称为目镜(ocularlens)。
基本结构
①机械部分:
镜座、镜柱、镜臂、镜筒、调焦装置、载物台(物镜转换器)
②光学部分:
目镜、物镜、反光镜、聚光镜
放大倍数:
目镜的放大倍数×
物镜的放大倍数
性能参数
(一)数值孔径
又叫镜口率,是物体与物镜间媒质的折射率n与物镜孔径角的一半(β)正弦值的乘积,通常缩写为NA,即
NA=nsinβ
(二)分辨率
显微镜的最重要参数,指透镜能分辨两点之间的最小距离。
提高显微镜分辨率的方法:
增大物镜的数值孔径、用短波长的光照射。
如紫外光显微镜,电子显微镜。
(三)放大率
显微镜经多次成像后最终所成(放大的)像的大小相对于原物体大小的比值,常记作M。
(四)视野
又称视场(field),是指通过显微镜所能看到标本所在空间的范围。
(五)景深与焦长
又称焦点深度,是指在成一幅清晰像的前提下,像平面不变,景物沿光轴前后移动的距离称“景深”。
景物不动,像平面沿光轴前后移动的距离称“焦长”。
(六)镜像亮度和清晰度
镜像亮度即显微镜的图像亮度的简称。
高倍率工作条件下的暗场、偏光、摄影显微镜等都需要足够的亮度,与照明及物镜的性能参数相关。
镜像清晰度是指图像的轮廓清晰、衬度适中的程度。
(七)工作距离
从物镜前表面中心到被观察标本间满足工作要求的距离范围,与物镜的数值孔径成反比。
一般情况下,物镜的数值孔径赿大,其工作距离赿小。
2.电子显微镜
电子光学系统(照明系统、成像系统)、真空系统、供电系统、机械系统、观察显示系统
分类
透射电镜、扫描电镜、扫描隧道显微镜
透射电镜:
分辨率高,可用来观察组织和细胞内部的超微结构以及微生物和生物大分子的全貎,观察薄样品。
扫描电镜:
特点分辨率高、立体感强、放大倍率范围广
扫描隧道显微镜:
分辨率极高、可在真空、大气、液体等条件下工作、非破坏性测量、观看三维表面结构。
第四章紫外-可见分光光度计
(紫外-可见分光光度计工作原理、基本类型及其特点、紫外-可见分光光度计的基本结构及各部件的基本功能)
1.分光光度计:
将各种波长的混合光分离出每一单色光,并测量其强度的仪器。
200nm-400nm紫外,400-800nm可见光。
2.吸收光谱:
不同的物质会吸收不同波长的光。
改变入射光的波长,并依次记录物质对不同波长光的吸收程度,就得到该物质的吸收光谱。
3.紫外-可见分光光度计的基本结构:
光源、单色器(复合光变成单色光)、吸收池(能透过紫外线时石英玻璃或蓝宝石制作)、检测器(光电管、光电倍增管)、显示系统;
双光度紫外分光光度计的基本结构:
结构是在以上基础上加入光束分裂器或斩波器。
4.光的吸收定律(朗伯-比尔定律):
当用一束单色光照射吸收溶液时,其吸光度与液层厚度b及溶液浓度c的乘积成正比。
朗伯-比尔定律适用的条件是:
入射光为单色光、溶液浓度不能过大。
5.紫外-可见分光光度计的分类
单波长分光光度计:
单光束单波长分光光度计、双光束单波长分光光度计、双波长分光光度计。
第五章临床血液常规检验仪器
(掌握血细胞分析仪的概念、库尔特原理、仪器的基本结构)
1.血细胞分析仪
对一定体积全血内血细胞异质性进行自动分析的临床检验常规仪器。
又称血细胞自动计数仪(ABCC)、血液学自动分析仪(AHA)。
2.库尔特(电阻抗)血细胞检测原理:
血细胞与等渗的电解质溶液相比为相对的不良导体、电阻值大于稀释液的电阻值、当细胞通过检测器微孔的孔径感受区时,在内外电极之间恒流源电路上,电阻值瞬间增大,产生一个电压脉冲信号、产生的脉冲信号数,等于通过的细胞数,脉冲信号幅度大小与细胞体积大小成正比。
3.血细胞分析仪基本结构
机械系统、电学系统、血细胞检测系统、血红蛋白测定系统、计算机控制系统。
4.白细胞和红细胞检测
分为白细胞和红细胞、血小板两个通道。
红细胞和血小板的检测:
红细胞体积和血小板体积间有一个明显界限,血小板计数准确容易。
白细胞的检测:
三分群,大白细胞群(中性粒细胞)、中白细胞群(单核细胞、嗜酸、嗜碱性粒细胞等)小细胞群(淋巴细胞)。
5.网织红细胞检测原理
网织红细胞中嗜碱性物质RNA,在活体状态下与特殊的荧光染料结合。
荧光强度与RNA含量成正比。
用流式细胞术检测网织红细胞大小和RNA含量及血红蛋白的含量。
6.血红蛋白检测原理
除干式、无创型外,各型BCA对血红蛋白测定都采用光电比色原理。
血细胞悬液中加入溶血剂后,红细胞溶解释放出血红蛋白,后者与溶血剂中有关成分结合形成血红蛋白衍生物,进入血红蛋白测试系统。
特定波长(530~550nm)下进行光电比色。
(血液凝固分析仪检测原理和基本结构)
7.血液凝固分析仪:
对血栓与出血有关成分自动检测的临床常规检验仪器。
8.血凝仪检测原理:
凝固法(最常用)、底物显色法、免疫学法、干化学法。
光学法原理:
是用光探测凝固过程中血浆浊度的(吸光度)变化来判断终点;
光电磁珠法原理:
是用光探测钢珠振幅衰减程度来判断终点;
双磁路磁珠法原理:
是用电磁探测钢珠振幅衰减程度来判断终点,振幅衰减到50%。
9.血凝仪基本结构
半自动血凝仪:
主要由样本预温槽和试剂预温槽、加样器、检测系统(光学、磁场)及微机组成。
全自动血凝仪:
包括样本传送及处理装置、试剂冷藏位、样本及试剂分配系统、检测系统、计算机、输出设备及附件等
第七章临床尿液检验仪器
(试剂带的反应原理、尿液分析仪的检测原理、流式细胞术尿有形成分分析仪的工作原理)
1.试剂带的反应原理
多联试剂带是将多种项目的试剂块集成在一个试剂带,使用多联试剂带,浸入一次尿液可同时测定多个项目。
尼龙膜:
防止大分子物质对反应的污染;
绒制层:
包括碘酸盐层和试剂层:
碘酸盐层:
可以破坏维生素C等干扰物质,
试剂层:
含有试剂成分,主要与尿液中测定物质发生化学反应,产生颜色变化;
吸水层:
可使尿液均匀快速的浸入,并能抑制尿液流到相邻的反应区;
塑料底层:
作支持体。
2.尿液分析仪的检测原理
此类仪器一般用微电脑控制,将浸有尿液的试剂带放在仪器比色槽内,试带上已产生的化学反应的各种试剂垫被光源照射,其反射光被球面积分仪接收,球面积分仪的光电管被反射的双波长光(包括通过滤光片的测定光和一束参考光)照射。
测定每种试剂带块反射光的光量值与空白块的反射光量值进行比较,通过计算机求出反射率,换算成浓度值,便可由分析仪打印出半定量的数值。
3.流式细胞术尿有形成分分析仪的工作原理
(1)稀释、染色的标本通过鞘液池
当一个尿液标本被稀释液稀释和染液染色后,它靠液压作用通过鞘液流动池,当反应样品从喷嘴出口进入鞘液流动室时,它被一种无粒子颗粒的鞘液包围,使每个细胞以单个纵列的形式通过流动池的中心(竖直)轴线。
(2)氩激光照射
在这里每个尿液细胞将被氩激光光束照射。
每个细胞有不同程度的
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