第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测优质PPT.ppt
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第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测ENA多肽抗体谱多肽抗体谱是是由由许许多多小小分分子子量量的的RNA和和多多肽肽组成。
组成。
不不同同的的uRNA各各有有其其相相应应的的抗抗体体。
目目前前发发现现的的相相应应的的抗抗体体已已有有十十余余种种,其其中中,国国际际上上共共认认的的对对风风湿湿有有特特异异的的诊诊断断价价值值的的有有七七种种。
故故将将这这七七种种抗抗体体叫叫做做多多肽抗体谱肽抗体谱第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测三、三、免疫印迹免疫印迹免疫印迹(免疫印迹(ImmunoblotIBT)又又称称免免疫疫转转印印技技术术。
是是一一项项新新的的生生化化技技术术。
它它对对研研究究工工作作的的影影响响与与内内切切酶酶的的发发现现和和PCR的的基基因因扩扩增增技技术术是是等等量量齐观的。
齐观的。
第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫印迹的基本原理:
免疫印迹的基本原理:
将将凝凝胶胶电电泳泳与与固固相相免免疫疫结结合合起起来来,其主要的操作过程分三个步骤。
其主要的操作过程分三个步骤。
1、分离、分离盐水可提取抗原(盐水可提取抗原(ENA)中多中多肽按分子量的大小,先用肽按分子量的大小,先用SDS聚丙烯酰胺凝胶分离聚丙烯酰胺凝胶分离第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫印迹的基本原理:
2、转移转移将将分分离离的的组组份份从从凝凝胶胶上上转转移移到到固固相相基质上,如硝酸纤维膜基质上,如硝酸纤维膜第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫印迹的基本原理:
3、测定测定对转移后的组份进行免疫法测定,对转移后的组份进行免疫法测定,显示出蛋白带。
显示出蛋白带。
既通过抗体的反应,用酶联免疫吸既通过抗体的反应,用酶联免疫吸附法观察与抗体反应的多肽(呈显色带)附法观察与抗体反应的多肽(呈显色带)的数量与分子量的数量与分子量第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫印迹的基本原理:
免免疫疫转转印印技技术术实实际际上上是是一一项项将将凝凝胶胶电电泳泳技技术术、固固定定化化技技术术及及分分子子亲亲和和技技术术三三者融为一体的免疫转印技术。
者融为一体的免疫转印技术。
第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点:
免疫转印技术优点:
第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点:
1、高分辨率高分辨率免免疫疫转转印印技技术术综综合合了了电电泳泳技技术术分分辨辨率强的特点。
率强的特点。
2、高灵敏度高灵敏度免疫转印技术综合了免疫反应敏感免疫转印技术综合了免疫反应敏感性高的特点,可检出最小蛋白质性高的特点,可检出最小蛋白质1pg(10-12g)第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点:
3、高特异性高特异性免免疫疫转转印印技技术术综综合合了了免免疫疫反反应应特特异异性性,根根据据抗抗原原抗抗体体的的特特异异反反应应,同同一一条条蛋白印迹上可做多项分析。
蛋白印迹上可做多项分析。
4、高度稳定性高度稳定性蛋白印迹膜便于保存,可存放蛋白印迹膜便于保存,可存放6-12个月。
个月。
5、设备简单,操作容易设备简单,操作容易免免疫疫转转印印技技术术在在临临床床检检验验中中必必有有远远大大前前程程,并并可可能能代代替替许许多多现现有有的的传传统统检检验方法。
验方法。
第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测第二节第二节检测对象检测对象ENA多肽抗体谱多肽抗体谱早期诊断早期诊断SLE和多种风湿病,和多种风湿病,有较高的特异性和敏感性,有较高的特异性和敏感性,有助于结缔组织病的诊断有助于结缔组织病的诊断和鉴别诊断和鉴别诊断第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测一、风湿病的定义一、风湿病的定义风风湿湿病病学学是是一一门门以以内内科科学学和和临临床床免免疫疫学为基础的新兴学科学为基础的新兴学科其其研研究究的的对对象象是是风风湿湿性性疾疾病病,包包括括所所有有不不同同原原因因,以以及及不不明明原原因因引引起起的的骨骨、关关节、肌疾病。
节、肌疾病。
第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测广义:
涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症广义:
涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症的疾病的疾病感炎性:
感炎性:
莱姆(莱姆(Lyme)氏病氏病代谢性:
代谢性:
痛风痛风内分泌性:
内分泌性:
甲状旁腺功能亢进甲状旁腺功能亢进遗传性;
遗传性;
粘液多糖病粘液多糖病退化性:
退化性:
骨关节炎骨关节炎生态环境性:
大骨节病生态环境性:
大骨节病第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测狭义:
主要指自身免疫性结缔组织疾病狭义:
主要指自身免疫性结缔组织疾病类风湿性疾病骨关节炎类风湿性疾病骨关节炎(RA)系统红斑狼疮系统红斑狼疮(SLE)干燥综合症干燥综合症(SS)硬皮病硬皮病(PSS)皮肌炎和多发行肌炎皮肌炎和多发行肌炎(DM/PM)混合性结缔组织病混合性结缔组织病(MCTD)第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测二、二、适应症适应症1、临临床床上上怀怀疑疑有有风风湿湿性性疾疾病病(结结缔缔组组织织病病或或自自身身免免疫疫性性疾疾病病),需需进进一一步步确诊者。
确诊者。
2、已已诊诊断断为为某某种种风风湿湿性性疾疾病病,但但需需明明确确是是否否合合并并其其它它风风湿湿性性疾疾病病,以以指指导导治疗者。
治疗者。
第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测二、二、适应症适应症3、诊断未明,但有下列症状,需排除或诊断未明,但有下列症状,需排除或确诊何种风湿性疾病者:
确诊何种风湿性疾病者:
、原因不明发热伴有关节或肌肉疼痛。
、淋巴结肿大或白血球减少或血小板减淋巴结肿大或白血球减少或血小板减少或溶血性贫血。
少或溶血性贫血。
、皮疹或不典型面部红斑,光敏感。
、蛋白尿。
第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、心包炎或胸膜炎。
、心包炎或胸膜炎。
、癫痫或精神、神经症状。
、习惯性流产。
、雷诺氏现象。
、肿胀手或手指、足趾皮肤变硬。
第三章第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、肌肉有压痛或抬臂、下蹲起立时困、肌肉有压痛或抬臂、下蹲起立时困难。
难。
、下肢出现网状青紫。
下肢出现网状青紫。
、肺间质病变或肺动脉高压。
肺间质病变或肺动脉高压。
、经常口干、眼干、或反复腮腺炎。
经常口干、眼干、或反复腮腺炎。
、易口腔溃疡或大量脱发。
易口腔溃疡或大量脱发。
第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、吞咽困难,食道蠕动减弱。
吞咽困难,食道蠕动减弱。
、青年女性有偏头痛。
青年女性有偏头痛。
、荧光抗核抗体阳性。
荧光抗核抗体阳性。
、关节疼痛。
关节疼痛。
、长期反复性原因不明低热。
长期反复性原因不明低热。
第三章第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测三三、送检标本送检标本血清血清第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测四四报告方式报告方式反应抗体反应抗体分子量分子量1.抗抗Sm抗体抗体+/-29/28KD、13.5KD2.抗抗u1RNP抗体抗体+/-73KD、32KD、17.5KD3.抗抗Scl-70抗体抗体+/-86KD、70KD4.抗抗SSA抗体抗体+/-52KD5.抗抗SSB抗体抗体+/-48/47KD、45KD6.抗抗JO-1抗体抗体+/-55KD7.抗抗Rib抗体抗体+/-38KD16KD15KD+表示有该种自身抗体表示有该种自身抗体-表示无该种自身抗体表示无该种自身抗体第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测第三节第三节临床意义临床意义第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义一抗一抗Sm抗体抗体1.Sm为病人为病人Smith(发现抗体的第一位病人)发现抗体的第一位病人)的名字缩写的名字缩写2.抗抗Sm抗体是酸性糖蛋白抗体是酸性糖蛋白3.是目前公认的系统性红斑狼疮(是目前公认的系统性红斑狼疮(SLE)标记抗体,有利于标记抗体,有利于SLE的早期诊断。
、的早期诊断。
、注意:
关键是注意:
关键是13.5KD一般是一般是13.5KD和和29/28KD同时出现,若单独出现同时出现,若单独出现29/28KD、无无13.5KD不能判断不能判断抗抗Sm抗体阳性抗体阳性4.阳性率阳性率30-50%,仅见于本病。
,仅见于本病。
第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义二二、抗抗u1RNP抗体抗体(抗抗RNP)1、是混合性结缔组织病是混合性结缔组织病(MCTD)的一项重的一项重要血清学特征。
要血清学特征。
2、阳性率可达阳性率可达95%以上。
以上。
3、73KD(国外报导为国外报导为70KD)和和32KD可可同时出现,也可分别出现。
同时出现,也可分别出现。
17.5KD常拌常拌73KD和和32KD、一起出现,单独出现少见。
一起出现,单独出现少见。
4、其它结缔组织病的阳性率、其它结缔组织病的阳性率系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮(SLE)30%干燥综合症干燥综合症(SS)20%硬皮病硬皮病(PSS)7%第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义三、抗三、抗Scl-70抗体抗体1、抗抗Scl-70抗体中的抗体中的SclSclerosis的缩写的缩写70代表抗原分子量,为代表抗原分子量,为70KD(70000)2、是弥漫型硬皮病是弥漫型硬皮病(PSS)的标记抗体。
的标记抗体。
3、阳性率可达阳性率可达50-64%4、在在86KD和和70KD两区带间有时可见到两区带间有时可见到两条较弱的区带,是两条较弱的区带,是100KD的降解产的降解产物。
物。
两区带一般同时出现。
第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义四、抗四、抗SSA抗体(抗抗体(抗RO抗体)抗体)1SS为干燥综合症(为干燥综合症(Sjogrenssyndrome)的缩写。
的缩写。
A为抗原子序列
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- 第六 ENA 多肽 抗体 免疫 印迹 检测