生化分析常见交叉污染探讨与对策PPT文件格式下载.ppt
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样品针尖弯曲,特富龙涂层剥落,针堵塞,冲洗水冲洗不充分原因:
样品针尖弯曲,特富龙涂层剥落,针堵塞,冲洗水冲洗不充分携带污染率主要是体现样品之间的污染程度携带污染率主要是体现样品之间的污染程度样本针携带污染率试验
(一)同一检测项目浓度相差较大的a标本(高浓度),b标本(低浓度)。
检测顺序:
a1,a2,b1,b2,b3计算:
评价:
以q小于10%为判断标准。
局限性:
结果与选择的标本浓度有关系例1:
选择高浓度的ALT样本浓度值为2020U/L,低浓度ALT样本第一次检测结果40U/L,第三次检测结果20U/L。
通过计算携带污染率q=(4020)/2000*100%=1%。
例2:
选择高浓度的Cl样本浓度值为140mmol/L,低浓度Cl样本第一次检测结果为86mmol/L,第三次检测结果为80mmol/L。
通过计算携带污染率q=(8680)/60*100%=10%。
上例中,例1的携带污染率尽管只有1%,由于结果正好在医学决定水平附近因此对临床判断有较大影响。
例2的携带污染率尽管达到了10%,但是对于临床判断不会产生大的影响。
因此,使用该方法评价样本针携带污染需考虑样本的实际浓度。
测试顺序:
3L2H1L2H4L2H1L2H1L2H1L(注上述顺序前的数字代表测试数量,如3L代表连续测试3个低值样本)定义:
LL值为紧跟在低值标本后低值标本的结果。
HL值为紧跟在高值标本后低值样本的结果携带污染指标=HL结果的平均值LL结果的平均值判断标准:
当携带污染指标小于3SDSD是(LL)结果的SD值。
样本针携带污染率试验
(二)试剂针携带污染全自动生化分析仪一般采用双试剂针,即所有项目的一试剂都共用试剂针R1,所有项目的二试剂都共用试剂针R2。
试剂针R1或R2在每吸取一次试剂后都会进行一次清洗,之后会立即吸取下一个项目的试剂。
当自身清洗能力下降,试剂针在吸取试剂时会将部分残留的前项目试剂成分带入到后项目反应杯中,对后项目的检测结果造成影响。
从各个项目设置的参数可知,试剂体积量远大于样本体积量。
因此试剂针携带污染影响程度会高于样本针携带污染。
携带污染实验方案目前大部分实验室开展的生化检测项目至少都有20项以上,评价全项目之间的携带污染会非常耗时,试剂成本消耗量大。
且不同仪器的动作原理不完全相同,设计一个较为简单,合理的实验方法是需要重点考虑的内容。
试剂针携带污染实验方案原理:
通过设置特定的标本检测顺序,每个样本只做一个项目的检测,可以控制不同项目的先后吸取顺序,实现任何一个项目都能与其他项目相遇。
为了有效评价项目之间携带污染影响程度,污染实验所用病人样本的混合血清应尽量包含医学决定水平浓度试剂针携带污染实验方法携带污染初实验假设本次实验以A,B,C,D,E五个项目来考察各个项目之间的试剂针携带污染,先在生化仪中输入样本测试号码和选择项目,每个样本号码只选择一个项目,目的是使试剂针吸取项目的顺序完全按照样本测试号码的先后顺序进行,五个项目的测试顺序见表1。
测试完成后,将数据输入到处理表格2和表格3中,按照一定的判断标准,寻找可能存在的污染项目组合。
表3中显示了试剂之间携带污染初实验后的结果:
a将表格内测试顺序号代表的位置处输入该项目对应的测试结果,b对每个测试顺序号下面对应的测试结果和该项目单独5次重复结果的均值相比比值以百分比形式表示,通过考察百分比的大小来初步判断携带污染的可能性。
目前的判断标准以正负百分之五作为判断标准,超过范围时怀疑有携带污染。
试剂针携带污染确认实验由携带污染初实验筛选出怀疑有污染的项目组合,假设(AB)同(DE)即A项目对B项目(A项目做好后紧接着做B项目),D项目对E项目(D项目做好后紧接着做E项目)怀疑有污染。
由于初实验的项目交叉结果只是一次测试的结果,可能有偶然因素,还必须进行确认实验。
以(AB)为例,(DE)的情况相同先单独做A项目,紧接着连续测试3次B项目,第一个B项目的结果受A项目影响最大,第三个B项目的结果因为有2次自身冲洗,结果应比较准确。
比较第一个B项目检测结果同第三个B项目检测结果,如果影响百分比同初试结果影响趋势和程度相近,可以判断A项目对B项目有携带污染。
确认实验检测顺序以(AB),(DE)为例确认实验步骤(表4)AB1B2B3DE1E2E3搅搅拌拌棒棒污污染染:
试试剂剂与与样样本本、第第一一试试剂剂与与第第二二试试剂剂的的混混匀匀需需要要搅搅拌拌棒棒,而而搅搅拌拌棒棒如如果果清清洗洗不不完完全全,或或黏黏附附力力增增加时,残留试剂可能会对下一检测结果造成影响。
加时,残留试剂可能会对下一检测结果造成影响。
鉴别鉴别对对同同一一份份血血清清标标本本重重复复测测定定GGT或或ALT或或AST20次以上,结果重复性较差且有走高趋势。
次以上,结果重复性较差且有走高趋势。
原因原因搅搅拌拌棒棒特特富富龙龙涂涂层层剥剥落落,搅搅拌拌棒棒表表面面有有顽顽固固性性污渍,冲洗水冲洗不充分污渍,冲洗水冲洗不充分,可用可用无水乙醇擦洗搅拌棒无水乙醇擦洗搅拌棒搅拌棒携带污染搅拌棒携带污染4.清洗系统携带污染清洗系统携带污染鉴别:
鉴别:
在在样样本本测测定定过过程程中中加加做做室室内内质质控控,部部分分项项目目测定异常或者失控测定异常或者失控在在样样本本测测定定过过程程中中以以蒸蒸馏馏水水为为样样本本,多多次次测测定定LDH、P、M、TBA,结果重复性不好。
,结果重复性不好。
干燥棒携带污染为多干燥棒携带污染为多5.比色杯污染比色杯污染生生化化分分析析仪仪的的比比色色杯杯大大体体分分为为两两种种,一一种种是是循循环环使使用用的的(如如石石英英比比色色杯杯等等),另另一一种种是是需需要要定定期期更更换换的的(如如塑塑料料比比色色杯杯等等),每每个个比比色色杯杯检检测测完完毕毕后后,进进行行清清洗洗,然然后后继继续续下下一一个个检检测测项项目目的的检检测测。
当当由由于于各各种种原原因因导导致致某某个个比比色色杯杯清清洗洗不不完完全全或或该该比比色色杯杯老老化化时时,吸吸附附在在比比色色杯杯上上的的上上一一个个项项目目的的残残留留试试剂剂可可能能会会对对在在这这个个比比色色杯杯中中进进行行的的下下一一个个项项目目的的检检测测结结果果造造成成影影响响。
根根据据经经验验,比比色色杯杯的的污污染染对对结结果果影影响响最最大大,因因为为比比色色杯杯最最难难以以清清洗洗干干净净,且且在在实实际际工工作作中中难难以判断该比色杯上一测试的项目。
以判断该比色杯上一测试的项目。
在每日早晨刚开机时对所有项目做试剂空白测定,在每日早晨刚开机时对所有项目做试剂空白测定,试剂空白吸光度高(终点法)或者试剂空白吸光度变化率高(速率法)试剂空白吸光度高(终点法)或者试剂空白吸光度变化率高(速率法)TBA(循环酶速率法)经常出现负值(循环酶速率法)经常出现负值蛋白项目、血脂项目结果偏高蛋白项目、血脂项目结果偏高胆红素(钒酸盐法)易出现异常值胆红素(钒酸盐法)易出现异常值原因:
比色杯划痕较深较多,清洗系统清洗不彻底比色杯划痕较深较多,清洗系统清洗不彻底比色杯污染实验方法以项目A对BCDE4个项目比色杯污染不同类型的交叉污染的发生几率由高到低排列:
不同类型的交叉污染的发生几率由高到低排列:
试剂针携带污染试剂针携带污染搅拌棒携带污染搅拌棒携带污染比色杯污染比色杯污染样本针携带污染样本针携带污染清洗系统携带污染清洗系统携带污染用用排排除除法法鉴鉴别别不不同同类类型型的的交交叉叉污污染染的的排排列列顺顺序序(在在保保证证试试剂质量没有任何问题的前提下):
剂质量没有任何问题的前提下):
样本针携带污染样本针携带污染比色杯污染比色杯污染试剂针携带污染试剂针携带污染搅拌棒携带污染搅拌棒携带污染清洗系统携带污染清洗系统携带污染试剂交叉污染-类型1.试剂成分间的直接影响2.试剂成分间的间接影响3.反应进程相同4.影响反应条件试剂交叉污染1.试剂成分间的直接影响前一个测定试剂中直接含有后一个测试试剂所要测定的项目。
例如:
通常在AMY的R1试剂中含有Ca离子(酶活化剂),当某样品作AMY和Ca这两个检测项目时,检测的顺序是先检测AMY,接着检测Ca。
因吸取过AMY的R1试剂针上可能沾有残留的R1试剂,所以当R1试剂针再吸取Ca试剂时,会引入AMY的R1试剂中含有的Ca离子,这样对Ca项目的检测结果就可能造成正误差试剂交叉污染常见试剂成分间的直接影响葡萄糖(GLU)(氧化酶法)、总蛋白(TP)与酸性磷酸酶(ACP)试剂中含有较高浓度的钾(K+);
胆碱酯酶(ChE)、总胆固醇(CHOL)、GLU(GOD法)、尿酸(UA)(尿酸酶法)、乳酸脱氢酶(LD)(IFCC法)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)(DGKC法)等试剂中含有磷酸缓冲液;
CHOL、TG试剂及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂中含有胆酸钠;
丙氨酸氨基转移酶(ALT)(IFCC法)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)(IFCC法)试剂中含有高活性的LD;
以上试剂的交叉污染就分别会对、K+(紫外酶法)、磷(P)、总胆汁酸(TBA)及LD的测定结果造成干扰试剂交叉污染2.试剂成分间的间接影响试剂成分参与反应:
上一个试剂中含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用,因而干扰下一反应的测定结果。
如:
Mg2+测定试剂的络合剂亦能与铁(Fe)结合,影响铁与铁络合剂的结合;
直接胆红素(DBil)(重氮法)试剂含有EDTA,Mg2+试剂中含有EDTA,均能与Ca结合,从而影响Ca的测定;
以甘油作为酶保护剂的试剂,会对TG的测定带来干扰;
钙(MTB法)试剂对K+有负干扰;
CHOL试剂中含有胆固醇酯酶,可水解胆固醇酯形成游离胆固醇,而引起对游离胆固醇测定的干扰。
试剂交叉污染(3)反应进程相同:
上一个试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰,下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。
当上一反应产物为H2O2时,则对以Trinder反应产生颜色的测定结果引起干扰,如UA对CHOL结果的影响,CHOL对肌酐(CREA)(酶法)测定结果的影响,GLU(氧化酶法)对CREA测定结果的影响;
CK(NAC法)、CK-MB(NAC法)试剂中含有GLU成分,其分析方法的原理中包含GLU的己糖激酶(HK)反应过程,因此可能对GLU的测定带来干扰,尤其对GLU的HK法测定可能带来严重干扰。
试剂交叉污染(4)影响反应条件:
如上
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