乙肝核心抗原的检测与应用PPT推荐.ppt
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乙肝核心抗原的检测与应用PPT推荐.ppt
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推荐。
0引言乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒,完整的HBV颗粒又称Dane颗粒,球形,直径约42urn。
HBV核心抗原(HepatitisBCoreAntigen,HBcAg)存在于Dane颗粒的核心,是HBV的结构蛋白即病毒核壳蛋白,主要存在于受感染的肝细胞核内,它反映血清中Dane颗粒的存在及肝内HBV的复制。
存在于乙型肝炎患者血液和肝组织内的HBcAg具有重要的生物学特性和临床病理意义。
1生物学特性1.1一般特性HBcAgHBcAg由由HBVHBV基因组的基因组的CC开放读码区(开放读码区(ORFORF)编编码,从第二个码,从第二个ATGATG(19011901ntnt)起始翻译(终止密码起始翻译(终止密码子在子在24582458ntnt)。
)。
HBcAgHBcAg有保守的三维结构,可因血有保守的三维结构,可因血清型不同而有清型不同而有183-185183-185个氨基酸残基(个氨基酸残基(aaaa),),相对分相对分子质量子质量Mr21,000Mr21,000,180180个个HBcAgHBcAg形成形成2727nrnnrn的正的正2020面体面体以构成核心颗粒。
以构成核心颗粒。
HBVHBV核心部分含有环状双股核心部分含有环状双股DNADNA、DNADNA聚合酶、聚合酶、HBcAgHBcAg和和ee抗原(抗原(HBeAgHBeAg),),是病毒复是病毒复制的主体。
制的主体。
HBcAgHBcAg包装包装HBVDNAHBVDNA,在病毒成熟过程在病毒成熟过程中起重要作用。
中起重要作用。
HBcAgHBcAg己被证明含有己被证明含有HBVHBV特异性特异性DNADNA聚合酶,是聚合酶,是HBVHBV复制的标志。
复制的标志。
1.1一般特性一般特性HBcAg可在受染的肝细胞核中查到,但它主要在胞质中产生,由胞核定位序列(nuclearlocalizationsequences,NLS)介导HBcAg进人细胞核中。
胞核定位序列位于HBcAg的羧基末端区(C端区)第145-156位和第172-183位的氨基酸序列,具有与细胞核特异性结合,并将与之相连的蛋白或DNA转运到细胞核中的功能。
1.2免疫反应HBcAg具有高度免疫原性,在T细胞和B细胞水平上,HBcAg的抗原性较HBeAg强100倍,几乎所有HBV感染者都产生抗-HBc,同时有T细胞免疫应答。
对HBcAg的免疫应答在病毒清除中可能有重要作用。
这对HBcAgDNA的疫苗研究有重要的指导意义。
1.2免疫反应Th细胞根据其的分泌细胞因子不同可分为Th1和Th2亚群。
Th1细胞主要产生白介素-2(IL-2),干扰素(IFN)和肿瘤坏死因子(TNF)等促进细胞免疫反应;
Th2细胞主要产生白介素-6(IL-6)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)等促进体液免疫反应。
Th1和Th2细胞通过分泌的细胞因子相互下调对方的生长分化,刺激自身的增生。
1.2免疫反应机体的机体的Th1型免疫反应可促进病原体的清除,而型免疫反应可促进病原体的清除,而Th2型免疫反应则可加重机体的病理损害,在型免疫反应则可加重机体的病理损害,在HBcAg诱导下,外周血单个核细胞(诱导下,外周血单个核细胞(PBMC)产生产生Th1类细类细胞因子量明显增高;
在胞因子量明显增高;
在HBeAg诱导下,诱导下,Th2类细胞因类细胞因子量明显增高。
慢性子量明显增高。
慢性HBV感染进行免疫调节治疗的感染进行免疫调节治疗的一个目标就是使一个目标就是使HBeAg特异性特异性T细胞由细胞由Th2细胞主导细胞主导型转化为型转化为Th1细胞型,细胞型,HBcAg有望打破有望打破HBeAg诱导的诱导的免疫耐受状态而增强免疫耐受状态而增强Th1细胞优势表达达到治疗的目细胞优势表达达到治疗的目的。
慢性乙型肝炎患者和的。
慢性乙型肝炎患者和HBV慢性携带者体内针对慢性携带者体内针对HBV的特异性的特异性CTL应答明显低下,纠正这种应答明显低下,纠正这种CTL低低反应状态,对于机体有效地清除反应状态,对于机体有效地清除HBV至关重要。
至关重要。
1.2免疫反应DNA疫苗(基因疫苗)是近几年免疫学和分子生物学研究的新兴领域,它作为一种全新的高效免疫方法,己在许多难治性感染性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病和肿瘤性疾病的预防及治疗领域显示出较好的应用前景。
DNA疫苗可刺激机体特异性CTL功能的特性给HBV慢性持续感染的治疗带来新的希望。
1.2免疫反应采用治疗性疫苗打破宿主对采用治疗性疫苗打破宿主对HBVHBV的免疫耐受状态来的免疫耐受状态来治疗慢性乙型肝炎和慢性乙型肝炎病毒携带者是一新的治疗慢性乙型肝炎和慢性乙型肝炎病毒携带者是一新的有效途径。
有效途径。
HBVHBV核心抗原区核心抗原区AA1-AA151AA1-AA151段含有多个不段含有多个不连续的抗原表位,对刺激机体产生特异性的体液免疫和连续的抗原表位,对刺激机体产生特异性的体液免疫和细胞免疫均具有重要作用。
细胞免疫均具有重要作用。
KuhoberKuhober和和GeissierGeissieretaletal作了作了HBcAgHBcAgDNADNA疫苗肌内注射法免疫小鼠的初步观察。
该疫苗肌内注射法免疫小鼠的初步观察。
该DNADNA疫苗具有良好的细胞免疫原性,确可刺激宿主产生疫苗具有良好的细胞免疫原性,确可刺激宿主产生较强的较强的CTLCTL反应。
这一结果为我们进一步探索该反应。
这一结果为我们进一步探索该DNADNA疫疫苗在治疗主要因机体苗在治疗主要因机体CTLCTL功能低下所致功能低下所致HBVHBV慢性持续感慢性持续感染方面的应用前景奠定了初步的实验研究基础。
染方面的应用前景奠定了初步的实验研究基础。
2临床应用2.1血清HBcAgHBsAg、HBeAg、抗-HBc等免疫学指标都是体内存在乙型肝炎病毒颗粒的间接标志,而HBcAg则是HBV存在的直接标志。
所以,HBcAg测定更能反映HBV的存在及其复制程度,比其他各种免疫学指标更灵敏、更特异。
HBcAg是乙型肝炎病毒(HBV)的核心成分,若在血清中检出HBcAg则说明有HBV复制。
血中的HBcAg是作为Dane颗粒内部成分存在,极少有游离的HBcAg,故用常规方法不易检出,在血清中不能直接检出HBcAg,需加用开壳剂,使HBcAg释放于溶液中然后进行测定。
检测HBcAg,目前多采用间接的方法,即首先在试管内将Dane颗粒沉淀,再用裂解剂裂解Dane颗粒外壳,使HBcAg暴露游离,并经过多次洗涤处理后,用放免或酶免方法检测。
如用EIA微板法检测血清HBcAg,被检标本不须任何处理,直接在微孔板内进行检测,应用于临床,可与乙型肝炎病毒标志物同步检测。
2.1.1检测2.1.2血HBcAg与HBsAg的关系HBcAgHBcAg出出现现的的阳阳性性率率与与HBsAgHBsAg的的出出现现密密切切相相关关,往往往往HBcAgHBcAg()与与HBsAgHBsAg()同同时时存存在在,而而HBsAgHBsAg()时时不不一一定定会会出出现现HBcAgHBcAg()。
抗抗-HBsHBs的的出出现现并并不不标标志志着着HBVHBV复复制制的的中中止止,而而是是复复制制水水平平减减低低。
不不能能以以HBsAgHBsAg阴阴性性就就排排除除HBVHBV感感染染,临临床床上上HBsAgHBsAg阴阴性性的的患患者者,只只要要HBcAgHBcAg检检出出阳阳性性,说说明明仍仍有有乙乙型型肝肝炎炎病病毒毒复复制制。
以以往往认认为为血血清清中中仅仅HBsAgHBsAg阳阳性性者者,病病毒毒为为非非复复制制相相,无无传传染染性性,但但这这种种患患者者中中,也也有有检检测测出出HBcAgHBcAg、HBVHBVDNADNA阳阳性性者者,故故判判断断单单项项血血清清HBsAgHBsAg阳性者的传染性时应慎重。
阳性者的传染性时应慎重。
2.1.3血HBcAg与e系统的关系HBeAg阳性是HBV持续高水平复制和传染性强的标志,其与HBcAg、HBVDNA密切相关,并具有明显的平行关系。
多年来,一直认为e抗原是复制标记物,由于HBeAg是HBcAg的降解产物,以可溶性蛋白形式存在,在结构上不及HBcAg与病毒颗粒关系密切,对判断病毒复制、评估传染性不及HBcAg敏感可靠。
2.1.3血HBcAg与e系统的关系一般认为,当HBeAg/抗-HBe转换后,HBV复制趋于减少,没有传染性或传染性很小。
HBeAg被公认为是HBV复制的标志物。
但部分阴性者HBeAg的血清中仍可检出HBcAg和(或)HBVDNA,说明HBeAg的表达可能不是HBV复制的必然结果,对HBeAg阴性感染者的带毒状态及抗-HBe表达的临床意义必须重新认识,不能忽视其具有传染性的可能。
2.1.4血HBcAg与HBVDNA、HBVDNA-P的关系在慢性乙型肝炎患者中,血HBcAg与血HBVDNA有很好的相关性;
而在急性期,尤其是在肝损害极期时,往往血HBcAg阳性,而血HBVDNA阴性,考虑为HBcAg从受免疫损伤的被感染的肝细胞内释放入血,这种情况甚至在病毒已终止复制后也可出现。
对HBsAg慢性携带状态患者,判断HBV复制及传染性,HBcAg的敏感性最高,HBVDNA和HBVDNA-P次之,HBeAg敏感性低。
2.1.5不同肝病的检出率慢性活动性肝炎中血慢性活动性肝炎中血HBcAg阳性率阳性率明显高于明显高于ASC(无症状病毒携带者),无症状病毒携带者),说明血说明血HBcAg阳性较多见于病变活动较阳性较多见于病变活动较重的慢性肝炎而较少见于病变较静止的重的慢性肝炎而较少见于病变较静止的ASC。
血清中的血清中的HBcAg阳性与肝脏病变阳性与肝脏病变活动程度有关,且对估计预后有很好价活动程度有关,且对估计预后有很好价值。
值。
HBcAg检出结果是:
肝硬化慢性检出结果是:
肝硬化慢性乙型肝炎中型慢性乙型肝炎轻型。
乙型肝炎中型慢性乙型肝炎轻型。
2.1.6检测血HBcAg的临床意义
(1)对血液内)对血液内HBV的开壳处理,能直接检的开壳处理,能直接检测测HBcAg,能比能比HBeAg更客观地反映血更客观地反映血HBV的的存在,以及作出数量多少的判断,可替代存在,以及作出数量多少的判断,可替代HBeAg而作为病毒复制和传染性的敏感指标,是病毒存而作为病毒复制和传染性的敏感指标,是病毒存在的直接标志。
它与在的直接标志。
它与HBV复制标志呈正相关,可复制标志呈正相关,可以反映以反映HBV
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