化学发光检测教材Word文档格式.docx

化学发光检测教材Word文档格式.docx

《化学发光检测教材Word文档格式.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《化学发光检测教材Word文档格式.docx（40页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

．兴起于20世纪70年代，现仍普遍使用于县级以上医院；

．产品处于衰退期；

．厂商试剂与仪器共同开发，试剂基本系列化。

．兴起于20世纪60年代，现已基本退出临床应用；

．产品生命周期已终结；

．厂商试剂和仪器共同开发，试剂基本系列化。

酶联免疫法　　（ＥＬＩＳＡ）

．兴起于20世纪80年代，现普遍使用于各级临床机构，为我国临床免疫诊断的基本方法；

．产品处于成熟期；

．厂商试剂与仪器共同开发，试剂尚未系列化。

．兴起于20世纪70年代，现仍在临床应用；

化学发光免疫法（ＣＬＩＡ）

．导入于20世纪90年代，现个别较大医院开展个别项目；

．产品处于导入期或成长期；

．无厂商开发生产，完全依赖进口。

．兴起于20世纪80年代，现已被临床普遍使用，成为临床免疫诊断的支柱方法；

．厂商试剂与仪器共同开发，仪器自动化程度高，试剂系列化状态好。

由以上分析不难看出，化学发光免疫检测是大势所趋；

而取代进口，发展我国的化学发光检测事业，正是临床检验界着手发展的方向。

由此，我公司自1998年立项至今，致利于化学发光检测方案设计，自行开发了具有国内领先水平的化学发光底物，与国外知名检测仪器生产商联合开发了化学发光全自动、半自动检测仪，并自行设计开发了化学发光管理软件，而今形成了仪器、试剂、软件全面配套，为我国的临床检验界提供了一套完善的解决方案。

二、化学发光免疫分析技术

【概述】

本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。

目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。

化学发光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA）是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。

其检测原理与放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其自身的发光强度直接进行测定。

化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作。

且测试中不使用有害的试剂，试剂保持期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。

【原理】

在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。

免疫反应系统，其基本原理同酶联免疫技术（ELISA），常采用双抗体夹心法、竞争法、间接法等反应模式，如图1.2，1.3，1.4所示。

如图1.2双抗体夹心法反应原理示意图

化学发光系统的原理在于免疫反应中的酶作用于发光底物。

发光底物在酶的作用下，底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。

这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子。

利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。

由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。

具体说来，我们采用的是辣根过氧化物酶（HRP）催化鲁米诺（Luminol）底物发光系统，如图1.5所示。

我们的核心技术之一在于自行研制开发的发光底物系统，该系统与国外同类产品的比较表明，不仅主要性能指标达到了国外产品水平，并且由于自行生产，因此大大降低了发光底物的成本。

在该底物系统中，我们采用特殊的复合型增强剂，发光快，强度高，发光平台期长，可达30~60分钟，因此完全可以满足临床检测的需要。

其发光平台期测定结果如图1.6所示

（1）与放免（RIA）产品比较

　　与放射免疫试剂（RIA）比较，化学发光避免了放射性核素的污染以及对操作人员的伤害，大大缩短了反应时间，同时兼具高灵敏度的优势。

（2）与酶免（ELISA）产品比较

灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具ELISA法简便的操作方法与较短的反应时间。

（3）与进口全自动发光比较

试剂成本远远低于进口全自动发光试剂，为开放体系，也可适用其他发光检测仪器检测。

【应用】

发光免疫分析作为一种非放射性免疫标记技术，除了具有灵敏、特异、标记物稳定等特点外，其检测程序亦简便、快速，只需微量标本，近年来临床上已应用于检测各种激素、肿瘤标志物、药物及其他微量生物活性物质，亦可用于细菌和病毒感染的快速诊断。

三、技术优势

【技术路线的确定】

为适应中国临床检验的实际需要，我公司确定了以下的技术路线，如下表1.7所示：

【技术鉴定】

（1）化学发光试剂的现状

▲已通过河北省科委鉴定：

▲国外进口发光剂对比结果：

符合率为98%，部分技术指标超过进口发光剂。

▲甲胎蛋白（AFP）化学发光定量检测试剂盒：

已通过中国药品生物制品检定所检定，各项指标优异。

▲癌抗原125（CA125）化学发光定量检测试剂盒：

▲催乳素（PRL）化学发光定量检测试剂盒：

（2）化学发光仪及软件

▲化学发光分析管理软件已开发完成，可实现程序测量、快速测量、单板多项、两点定标、自动打印化验单、工作量统计等功能。

表1.7技术路线思路确定

技术路线

思路

标准微孔板为反应载体

操作简便、易于标准化

标记辣根过氧化物酶

应用广泛、标记技术稳定

鲁米诺底物系统

针对辣根过氧化物酶，发光强度大，扩展性强

全自动、半自动发光仪

适合不同层次用户的需要

中文操作软件

方便国内临床免疫学检测实验室

四、产品介绍

【系列试剂盒】

现有试剂盒共有5个系列，20余种产品。

（1）肿瘤标志物系列：

甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、血清铁蛋白（SF）、β2微球蛋白（β2-MG）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）、前列腺特异性抗原（PSA）、游离前列腺特异性抗原（f-PSA）、癌抗原125（CA125）、癌抗原15-3（CA15-3）、癌抗原19-9（CA19-9）

（2）甲状腺功能系列：

甲状腺素（T4）、游离甲状腺素（FT4）、三碘甲腺原氨酸（T3）、游离三碘甲腺原氨酸（FT3）、促甲状腺素（TSH）

（3）生殖内分泌激素系列：

催乳素（PRL）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激激素（FSH）、孕酮（P）、睾酮（T）、雌二醇（E2）

（4）糖尿病系列：

胰岛素、血清C肽

（5）其他检测系列：

皮质醇、总lgE、生长激素（GH）

【试剂盒评价标准】

从临床应用角度考核检验试剂的可靠性，是以其能否区分健康与疾病的能力作为依据的。

目前还很难找到100%可靠的试验，任何试验都会出现假阴性或假阳性。

以下指标为评价一个试剂盒的常用指标，不同的试剂盒将根据不同的标准进行评价。

（1）准确性

准确性是指测定所得值与真值的一致性。

（2）精密性

精密度是指对同一份样品重复测定，每次测定结果和均值的接近程度。

（3）灵敏度

灵敏度是指某种试验检出极低免疫物质的能力。

（4）特异性

特异性是指以无病者试验，其阴性的百分率。

（5）稳定性

是指试剂盒在有效期内保持稳定的程度。

【试剂盒操作注意事项】

（1）发光反应最适温度在25~28℃，为保证试验测定的准确性，应严格控制实验室温度在18~25℃。

（2）发光反应灵敏度很高，因此需要严格按照说明书要求，控制每步反应时间，操作应紧凑。

（3）处理试剂和样品时需戴一次性手套，操作后应彻底洗手。

（4）所有标本应视为潜在的传染性物质，废弃处理时，请按照当地政府和有关国家规定进行。

（5）操作前仔细阅读使用说明书，不同批号的试剂不得混用。

（6）包被条打开后，应将剩余包被条用密封保存，以免受潮。

（7）加样头不可混用，以免交叉感染。

（8）为避免边缘效应，建议温育过程中将微孔板用封膜覆盖。

（9）洗涤要彻底，洗液应注满每孔，避免产生气泡。

每次洗涤均应甩干孔内液体。

但不可用水过猛，最后应将孔内液体拍干。

（10）建议各实验室根据自己实际条件建立临界值范围。

本试剂盒仅作其他诊断方法的辅助手段之一，供医生参考。

（11）试剂请在有效期内使用。

第二章肿瘤标志物检测

一、肿瘤标志物简介

近年来，肿瘤已成为危害人类生命健康的常见病、多发病。

肿瘤根据来源可分为瘤和癌，按照性质可分为良性和恶性。

肿瘤的发生直接影响机体的代谢，如改变糖的代谢途径，改变蛋白质与核酸的合成，改变代谢过程中关键酶的活性，以及引起激素代谢异常等。

以蛋白质为例，肿瘤组织中的蛋白质含量要比正常组织高。

作为可用于肿瘤标志检测蛋白质来讲，属于肿瘤组织自身增值中合成的标志蛋白质或酶均见增高，而属于肿瘤细胞分化标志的蛋白质或酶，其合成往往成减低趋势。

并且通过研究发现，在哺乳类动物胚胎期所具有蛋白质，随着年龄增长其结构有所改变，当人体出生后或随着年龄变化，某些基因被关闭，不再表达或很少表达该基因的活性，当癌变时，某些细胞退化成为分化较差的、近似于胚胎细胞时，使得某些基因失活，某些基因被激活，重新合成一些胚胎蛋白，如甲胎蛋白、癌胚抗原等，这一现象称为返祖现象。

这即为肿瘤标志物的检测建立了科学基础。

所谓肿瘤标志物（tumormarker,TM），是指由肿瘤组织产生的存在于肿瘤组织本身，或分泌至血液或其他体液，或因肿瘤组织刺激，由宿主细胞产生而含量明显高于正常参考值的一类物质。

肿瘤标志物的检测，对于肿瘤的早期发现，病情的发展、治疗后的评价、监测复发和转移等方面都具有一定的应用价值，可以为患者争取治疗时间，延长患者生命。

因而近年来，世界许多医学科学工作者致力于对肿瘤细胞生长各环节、代谢与调控的基本规律和变化研究，寻求新的特异性或相对特异性的肿瘤标志物。

二、瘤标志物的分类

[肿瘤胚胎性抗原标志物]

该类蛋白质即前文所提到的因返祖现象的出现，而产生的肿瘤标志物。

虽然该类标志物与肿瘤组织不一定具有特定的相关性，但与肿瘤的发生存在着内在的联系。

例：

甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）

癌胚抗原（carcinoembryonicantigen,CEA）

[糖类抗原标志物]

该类物质是肿瘤细胞表面的抗原物质，或肿瘤细胞所分泌的物质。

这类标志物的出现为临床肿瘤的诊断带来方便，但其命名无规律可言。

有些是肿瘤细胞株编号，有些是抗体物质的编号。

该类标志物又可分为两类

1．糖类高分子粘蛋白抗原

癌抗原CA125癌抗原CA15-3

2．血型类抗原

癌抗原CA19-9癌抗原CA50

[酶类标志物]

酶及同工酶是最早出现和使用的肿瘤标志物之一。

肿瘤状态时，机体的酶活力就会发生较大变化，这主要是因为①肿瘤细胞或组织本身诱导其他细胞和组织产生异常含量的酶；

②肿瘤细胞的代谢